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1、【精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流甲基绿派洛宁染色法观察细胞DNA RNA分布.精品文档.甲基绿派洛宁染色法观察细胞DNA RNA分布实验目的 1. 学会制作血涂片2. 熟悉甲基绿派洛宁法显示核酸的原理与操作步骤3. 观察 DNA、RNA 在细胞中的分布。 实验原理 1 电离作用：脱氧核糖核酸和核糖核酸都有磷酸基，又有碱基，故为两性电解质。在一定的条件下，可以电离而带电荷，因此都有一定的等电点。 甲基绿、派洛宁为两种碱性染料，在水中电离后，都产生带阳电荷的离子，常与带负电荷的磷酸根形成盐键。甲基绿电离后，在五价氮处产生二个正电荷，碱性较强，易与双链 DNA 分子（胞核等电点
2、pH3.84.2） 进行极性吸着而结合，使 DNA 显示绿色； 派洛宁电离后仅产生一个正电荷， 碱性较甲基绿弱， 与单链 RNA （胞质等电点 pH4.65.2）吸附结合，使 RNA 显示红色。 2 聚合作用：甲基绿对聚合高的DNA有亲和力，派洛宁对聚合低的RNA有亲和力。因此，甲基绿选染 DNA，而派洛宁选染 RNA。 实验材料1. 蟾蜍红细胞 2. 70%酒精 95%酒精 甲基绿派洛宁染色剂（5:3）3. 载玻片 镊子 剪刀 托盘 显微镜 手套 实验步骤1取蟾蜍（蟾蜍破髓，仰位剪去下颌、舌头）制备血涂片，干燥后滴加 70%的乙醇溶液固定 10 分钟，晾 干。 2滴染色液于血膜上，染 15 分钟。 （或在染色缸中）3蒸馏水冲洗，去染液。 4向染色液血膜滴加 95%乙醇溶液分色、同时倾斜载片弃液体，晾干。 5. 观察。BA实验结果A10倍下的染色后的蟾蜍血细胞B40倍下的染色后的蟾蜍血细胞显微镜下可观察到细胞核被染成紫色，细胞质被染成蓝色。讨论与结论1.制作血涂片的时候，要注意推片的角度，力度，速度，使血细胞分布均匀，厚薄适宜。2.要注意分色的时间和次数掌控，时间过长次数过多会导致观察到的血细胞染色不明显。3.染色效果不是很理想，可能是由于染液中甲基紫的含量较高。
