《小鼠白介素6elisa试剂盒说明书.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《小鼠白介素6elisa试剂盒说明书.doc（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、小鼠白介素6elisa试剂盒说明书小鼠白介素-6 ELISA检测试剂盒 日本IBL进口原装 货号:27768 规格96T 前言简介 白介素6是一种细胞因子,已被证实为B细胞分化因子.它是一种抗体形成系统,它的生理特性,如肝细胞急性蛋白合成的诱导和基于和白介素3协同作用的生长刺激等,也备受关注. 并且已证实白介素-6与病理学存在稳定的相关关系.例如,报道多种疾病的生长因子为白介素-6, 骨髓瘤细胞能合成白介素-6并表达白介素-6受体.此外, 白介素6在多种炎性疾病和自身免疫疾病发挥重要的作用. 此试剂盒能高灵敏度的检测小鼠血清和细胞基质上清的白介素6 原理 此试剂盒运用了两种特异性抗体,洗板后加
2、入TMB底物液显色,显色的强度与小鼠的白介素-6的量成正比. 检测范围 10.94 700 pg/mL 预期用途 此IBL试剂盒能用于小鼠血清,EDTA血浆,细胞上清中白介素-6的定量检测 试剂盒成分 1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T 2 酶标记抗体: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1 3 标准品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2 4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1 5 标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1 6 显色剂:
3、 TMB底物液 15mL x 1 7 终止液: 1N硫酸 12mL x 1 8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但试剂盒没有提供) 酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于标准品稀释) 温育箱(37C 1C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂)2准备 1) 洗涤液的准备 试剂盒的洗涤液是一种40倍浓缩液,用1950 mL去离子水稀释50 mL的浓缩洗涤液,制成2000mL即用稀释洗涤液. 置于冰箱内可
4、保存2周. 2) 酶标记抗体的准备 试剂盒中的标记抗体是一种30倍浓缩物,根据所需量,用标记抗体稀释液稀释30倍. 示例: 如果你用一条板(8孔),就需800 L.的标记抗体.就用870 L的标记抗体稀释液稀释30 L抗体浓缩液,充分混匀.并每孔各加100 L 浓缩酶标记抗体需稀释后才能用于实验 剩余的稀释标记抗体液需密封瓶装,存于4C 3) 标准品的准备 加0.5 mL的去离子水到瓶装标准品,制成浓度为1,400 pg/mL小鼠白介素-6标准品液 4) 标准品的稀释 准备8支试管,并每支各加230 L EIA缓冲液.稀释成如下浓度,步骤如下图所示: 试管1 700 pg/mL 试管2 350
5、 pg/mL 试管3 175 pg/ mL 试管4 87.5 pg/mL 试管5 43.75 pg/mL 试管6 21.88 pg/mL 试管7 10.94pg/mL 试管8 0 pg/mL(样品空白对照) 吸取230ul的标准品液于1号管混匀然后从1号管吸取230ul加入2号管混匀如下图所示,按此规律稀释系列标准品浓度范围为10.94-700 pg/mL,第8号管为0 pg/mL作为样品空白对照 5) 样品稀释 样品如需稀释时,必须用EIA缓冲液进行稀释 如果样品中小鼠白介素-6的浓度范围一无所知的话,预先准备几个不同稀释浓度的样品液来确定最佳的检测浓度. 3实验步骤 使用前将所有试剂应平衡
6、至室温大约30min充分混匀确保试剂质量无改变标准曲线和样品检测必须同时进行. 试剂 待检测样品 标准品 样品空白 试剂空白 检 测 样 品100ul 稀释标准品1-7管100ul EIA缓冲液第8管 100ul EIA缓冲液100ul 盖板于4C下温育过夜 洗板7次 酶标抗体 100ul 100ul 100ul - 盖板于4C下温育30min 洗板9次 显色剂 100ul 100ul 100ul 100ul 室温避光温育30min 终止液 100ul 100ul 100ul 100ul 加终止液后,30min内于450nm处读取OD值 1 设试剂空白对照并于相应的微孔中加入100ul EIA
7、缓冲液 2 确定好样品空白对照孔检测样品孔和标准品孔分别将100ul样品对照品(8号管)、检测样品和稀释好的标准品(1-7号管)加入到相应的微孔中。 3 盖板4C下温育过夜 4 用洗涤瓶剧烈洗板,再加入稀释洗涤液,静置15-30秒,再彻底倒去孔内反应液 重复洗板7次. 最后在吸水纸上拍干,去除残留液滴 如用自动洗板机洗板,先自动洗4次,再按上述用洗瓶手工洗3次 5 除试剂空白对照孔外,其余每孔各加100ul酶标抗体 6 盖板4C下温育30min 7 按照上述步骤4洗板9次 8 用一次性试管取所需量的显色剂各加100ul显色剂于微孔中.为了避免污染勿将剩余试剂在倒回试剂瓶中 9 室温避光温育30
8、min加入显色剂后溶液颜色会变成蓝色 10每孔各加100ul终止液溶液颜色会变成黄色 11擦去微孔板底部的污迹或水滴确保微孔内溶液无气泡产生.加入终止液后30min内于酶标仪 450nm处读取结果 特别注意 1) 收集样品后即尽快检测. 如需保存, 冻存样品,但要避免反复冻融.检测前,将样品解冻至室温 2) 如样品需稀释,用EIA缓冲液稀释 3) 样品和标准品建议做双份检测 4) 保持样品处于中性PH范围.有机溶剂的污染会影响实验结果 5) 只能用本试剂盒提供的洗涤液洗板.不充足的洗板会导致错误的结果 6) 在吸水纸上拍干去除残留液滴时,切勿用吸水纸刮擦孔内壁 7) 显示剂应避光保存并避免与金
9、属物质接触 8) 加终止液后,30 min内就应读取实验结果 结果计算 所有实验数据(包括标准品,检测样品的OD值),都应减去样品空白对照的OD值. 在log-log坐标纸用,以较正的OD值为纵坐标,相对应的浓度为横坐标,建立标准曲线. 样品直接在标准曲线上获取浓度值. 每次实验都应建立其标准曲线. 使用及处理常规事项 1所有试剂置于2 - 8C保存.实验前将试剂平衡至室温(约30分钟) 2瓶装标准品是冻干品,故小心打开瓶盖 3终止液是强酸物质.使用时,避免其接触皮肤和衣肤 4弃置用过的物质前,用水冲洗 5 浓缩酶标抗体,EIA缓冲液和浓缩洗涤液可能会出现沉淀,但这并不会影响实验 6使用试剂后应洗手 7切勿混用不同批号的试剂 8别使用过期的试剂 9试剂盒仅供研究用,不能用于临床诊断 存储与有效期 存储条件: 2 - 8C 有效期见试剂盒外包装 本译文仅供参考详情请以原文为准。
