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1、 免疫细胞的观察与小鼠脾脏淋巴细胞的提取 一、实验目的 1、明确各免疫器官分布与形态结构，能熟练找到各免疫器官，弄清中枢免疫器官与外周免疫器官的区别与联系。 2、掌握密度梯度离心法分离小鼠脾脏淋巴细胞的方法，熟悉脾脏淋巴细胞的形态与功能。二、 实验原理 脾脏是外周免疫器官之一，是人体最大的淋巴器官。它生在腹腔左上方，质地比较脆，容易外伤。一般来讲，脾脏有三大功能： 首先它是人体的“血库”，当人体休息、安静时，它贮存血液，当处于运动、失血、缺氧等应激状态时，它又将血液排送到血循环中，以增加血容量；其次，脾脏犹如一台“过滤器”，当血液中出现病菌、抗原、异物、原虫时，脾脏中的巨噬细胞、淋巴细胞就会将
2、其吃掉；此外，脾脏还可以制造免疫球蛋白、补体等免疫物质，发挥免疫作用。脾是血循环中重要的滤过器，能清除血液中的异物、病菌以及衰老死亡的细胞，特别是红细胞和血小板。因此，脾功能亢进时可能会引起红细胞及血小板的减少。脾脏还有产生淋巴细胞的功能。我们利用小鼠来观察脾脏的淋巴细胞。小鼠淋巴细胞的比重为1.088，利用比重为1.088的淋巴细胞分离液，将脾细胞悬液置于分离液上层，通过梯度离心的方法，在分离液与脾细胞悬液交界液面处分离得到脾脏淋巴细胞。三、 实验器材 KM种小鼠，PBS缓冲液，淋巴细胞分离液，200目不锈钢网，解剖器械四、 实验步骤1、杀死老鼠，取出小鼠的脾脏，在pbs缓冲液中冲洗干净。2
3、、将小鼠脾脏至于200目铜网中，铜网绑定在烧杯上面，剪碎、碾磨，边碾磨边加PBS冲洗，制得脾细胞悬液。3、将制得的脾细胞悬液转移到10ml的离心管中，1000r/min 5min离心洗涤，倒掉上清，加入5mlPBS再离心洗涤一次。4、加入5mlPBS将洗涤的脾脏细胞吹散、悬浮，缓慢加入淋巴细胞分离液上层，细胞悬液与分离液体体积比为1:1。5、2000r/min离心30min。6、 小心吸取中间层细胞，1000r/min 5min离心洗涤两次。7、 将制得的淋巴细胞滴于玻片，镜检。五、实验结果 小鼠脾脏淋巴细胞（1040）六、 实验结果分析1. 这次试验由于试剂瓶的标注错误，使我们将红细胞裂解液
4、误当成了PBS，结果导致脾脏淋 巴细胞没有被PBS处理。 出错之后，我们直接将细胞2000r/min进行了离心，将损失降低。2. 在图片中可以看到淋巴细胞还是较多的，不过可能由于上述的错误，导致制成的片子里面有少许杂质。另外，我们可以发现大的淋巴细胞还是较多的，约占了三分之二，这说明大部分都是未成熟的细胞，仅有三分之一是成熟的淋巴细胞。3. 在小鼠腋窝靠自己观察没有发现淋巴结，是对淋巴结的性状位置不明确导致。七、实验注意事项1.注射法杀死小鼠的时候，一定要注意安全，要将小鼠的头部用两个指头捏住之后使其不能转头，然后在进行注射。若不小心被小鼠咬到，一定要及时去医院进行治疗。2.解剖小鼠的时候注意不要将其血管剪断，导致出血影响观察。3.药剂瓶一定要将信息写的明确，防止使用过程中出现错误。4.观察时要注意大小细胞，已确定淋巴细胞的成熟与未成熟。
