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1、 第一章 绪论法医物证学：法医物证学是应用多种学科的理论知识和技术研究并解决涉与法律方面有关生物性检材的检验与鉴定的一门学科。应用的学科包括：医学、生物学、遗传学、免疫学、血型血清学、生物化学与分子生物学等。法医物证学：是以法医物证为研究对象，以提供科学证据为目的，研究应用生命科学技术解决案件中与人体有关的生物检材鉴定的一门学科。法医物证学是法医学的分支学科，其研究容属于法医学中的物证检验局部，是法医学研究的主要容之一。法医物证是一门应用科学，研究的方法涉与多种学科包括：化学，物理学，电子计算机，形态学，免疫血清学，生物化学，分子生物学，遗传学等方法。 法医物证的特点：法医物证的稳定性受环境条
2、件的影响；法医物证属于“科学证据。第二章 法医物证分析的遗传学根底1、 何谓遗传标记？个体的单位遗传性状作为标志用于法医物证分析时，这种遗传性状就成为遗传标记GM。2、 何谓基因、基因型和表型？1) 基因型：是指个体一个或多个基因座上等位基因的组合，是生物体可见性状的实际基因组成。2) 表型：是指生物体某特定基因所表现的性状。表型由基因型决定。3、 Hardy-Weinberg平衡定律的前提条件和意义1) 前提条件：群体无限大、随机婚配、没有突变、没有大规模的迁移和没有选择因素的影响。2) 结论：群体中的基因频率和基因型频率在逐代传递中保持不变。3) 意义：4) 反映基因频率和基因型频率的关系
3、纯合子基因型频率=基因频率的平方，杂合子=该两基因频率乘积的二倍5) 群体样本的检验4、 非父排除概率P23PE是指孩子的非亲生父亲的男子，能够被某个遗传标记系统排除的概率。PE用于评估某一遗传标记系统在亲权鉴定案件中的实用价值。5、 何谓个人识别概率？P22个人识别概率DP是指在群体中随机抽取两个体，两者的遗传标记表型不一样的概率。DP是评价该遗产标记系统识别无关个体效能大小的指标，DP越高，效能越强。第三章 DNA多态性的分子根底1、 何谓DNA多态性？P371) 在基因组DNA中，由不同碱基结构的等位基因所形成的多态性叫做DNA多态性。2) 按照DNA遗传标记的结构特征，DNA多态性可分
4、为长度多态性和序列多态性。2、 何谓VNTR？P37小卫星DNA中的可变数目串联重复序列称为VNTR。3、 何谓STR？微卫星的可变数目串联重复序列称为短串联重复序列，STR。第四章 DNA长度多态性1、 RFLP2、 Amp-FLR3、 DNA指纹图谱的根本特征？1) 遗传方式：孟德尔规律、所有片段独立遗传2) 个体的组织同一性：稳定一致3) 群体遗传学特征：4) 突变率：配子细胞形成时重排、重组与交换4、 DNA纹印图谱的根本特征？1) 高多态性2) 遗传规律：共显性3) 个体组织同一性：一致4) 群体遗传学特征：5) 高突变率：配子细胞形成时重排、重组、交换5、 何谓扩增片段长度多态性分
5、析？Amp-FLR：采用PCR技术扩增VNTR或STR基因座等位基因进展DNA长度多态性分析的方法。6、 RFLP与Amp-FLP技术有何异同？P747、 STR分型用于法医物证鉴定的主要优点？1) 高灵敏度：适用于微量降解检材2) 高鉴别能力：节约检材、试剂和提高效率3) 标准化分型：实现数字化结果，利于实验室间数据交换，建立数据库8、 何谓miniSTR？miniSTR分型有何法医学应用价值？1) miniSTR：通过重新设计引物，使其结合在更靠近核心重复区的侧翼序列，从而降低扩增产物的大小，进一步提高灵敏度和分型成功率，这种技术称为短片段STR分型或miniSTR分型。2) miniST
6、R法医学应用价值： STR基因座的扩增片段较短，灵敏度更高，尤其适用于微量或降解生物检材的DNA分型； 等位基因片段长度围较窄，不易发生因小等位基因的优势扩增而造成的等位基因丧失现象； 可对多个STR基因座进展复合扩增，从而节约检材、降低本钱，提高单次检测的信息量9、 何谓多基因座复合扩增？1) 在一个PCR体系中同时扩增多个靶基因座的方法叫做复合扩增。2) 复合扩增可提高单次检测的信息量，提高个人识别率，也可降低本钱和检材的消耗。10、 Y-STR有何法医学应用特点？1) Y染色体为男性特有2) Y-STR呈父系遗传特征3) 单倍体遗传：在减数分裂过程中，Y-特异性区不发生重组，所有Y-ST
7、R基因座均呈连锁遗传，等位基因频率不能以相乘方法计算4) GD=PE5) 结果不具有唯一性，不能认定11、 Amelogenin基因名解牙釉基因AMG：位于X染色体Xp22，编码牙原基质牙釉质蛋白，故命名牙釉基因。在人Y染色体中心粒附近有一类牙釉基因AMGL，与牙釉基因的碱基序列有90%同源性。用一对特异性引物可同时扩增AMG和AMGL序列片段，X特异性片段长度为977bp，Y为788bp。扩增后，男性可获得两条带，女性只观察到一条带。但是其扩增产物较长，不适合腐败血痕、过于旧血痕的性别鉴定。第五章 STR自动分型1、 简述STR自动分型技术的主要步骤1) DNA自动化提取2) PCR多色荧光
8、标记STR复合扩增3) PCR产物电泳前处理4) 自动毛细管电泳结合激光诱导的荧光检测5) 自动数据采集并分型2、 何谓off-ladder1) 在STR分型图谱中，常会遇到局部样本的少量片段峰未被程序化数字命名，在分型图谱中被标识为off-ladder2) 漂移作用和新等位基因都可标识为off-ladder3、 何谓LCNLCN：基因组含量小于100pg的样本称为低拷贝DNAlow copy number。第六章 DNA序列多态性DNA多态性DNA polymorphisms：基因水平上的多样性来自基因的突变，当基因突变以等位基因形式在群体中得以保存，并能够从亲代遗传给子代，可形成个体间的遗
9、传差异。不同个体间的遗传差异形式是不同的等位基因组成。等位基因之间的差异可以是点突变引起的序列不同，也可以是因为碱基的插入或缺失引起的片段长度不同，都能构成具有个体特征的DNA遗传标记。DNA遗传标记可以出现在编码区，也可以存在于非编码区。在基因组DNA中，这种由不同碱基结构的等位基因所形成的多态性叫做DNA多态性。DNA长度多态性DNA length polymorphisms：是指同一基因座上各等位基因之间的DNA片段长度差异构成的多态性。DNA长度多态性靶序列主要是指可变数目串联重复序列VNTR，VNTR既存在于小卫星DNA中，也存在于微卫星DNA中。由于命名习惯和为了便于区分，通常小卫
10、星DNA中的可变数目串联重复序列称为VNTR，而把微卫星的可变数目串联重复序列称为短串联重复序列STR。DNA序列多态性sequence polymorphisms：是指一个基因座上，因不同个体DNA序列有一个或多个碱基的差异而构成的多态性。可以理解为该基因座上所有等位基因DNA长度一样，但是它们之间的序列存在差异。在基因组DNA中，无论是编码区或者非编码区，单碱基替换是最根底的突变形式。在人类基因组围，如果任何单碱基突变使特定核苷酸位置上出现两种碱基，其中最少的一种在群体中的频率不少于1%，就形成单核苷酸多态性single nucleotide polymorphisms，SNPs。限制性片
11、段长度多态性restriction fragment length polymorphism，RFLP：RFLP分析是一种传统的分子生物学检测技术，广泛应用于突变分析、基因诊断、基因定位等各个方面。法医物证鉴定应用RFLP技术主要是对人类基因组中的VNTR基因座进展分型，其技术核心是DNA分子杂交，决定RFLP分析图谱个体特异性的因素是限制性核酸切酶的特异性和探针的特异性。检测所用的探针多是由人类基因组DNA中筛选出的小卫星序列，选择特异性不同的探针，在不同的杂交条件下，可以只检出单个VNTR基因座，也可同时检出多个VNTR基因座，前者称为DNA纹印，后者称之为DNA指纹，检测所用的相应探针分
12、别被称为单基因探针single-locus probe和多基因探针(multi-locus probe)。Southern印迹杂交：是进展基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳别离经限制性切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进展杂交，用放射自显影或酶反响显色，从而检测特定DNA分子的含量。其根本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原那么形成双链，此杂交过程是高度特异的。由于核酸分子的高度特异性与检测方法的灵敏性，综合凝胶电泳和核酸切限制
13、酶分析的结果，便可绘制出DNA分子的限制图谱。Southern印迹杂交Southern blot是研究DNA图谱的根本技术，在遗传病诊断、DNA图谱分析与PCR产物分析等方面有重要价值。Southern印迹杂交的根本方法是将DNA标本用限制性切酶消化后，经琼脂糖凝胶电泳别离各酶解片段，然后经碱变性，Tris缓冲液中和和高盐下通过毛吸作用将DNA从凝胶中转印至硝酸纤维素膜上、烘干固定后即可用于杂交。凝胶中DNA片段的相对位置在DNA片段转移到滤膜的过程中继续保持着，附着在滤膜上的DNA与32P标记的探针杂交，利用放射自显影术确立探针互补的每一条DNA带的位置，从而可以确定在众多消化产物中含某一特
14、定序列的DNA片段的位置和大小。琼脂糖凝胶电泳硝酸纤维素膜吸印。限制性切酶常见的有那些？限制性切酶restriction endonuclease：一种在特殊核甘酸序列处水解双链DNA的切酶。型限制性切酶既能催化宿主DNA的甲基化，又催化非甲基化的DNA的水解；而型限制性切酶只催化非甲基化的DNA的水解。合成引物的要点，PCR的反响组成：标准的PCR反响体系10扩增缓冲液10l4种dNTP混合物200l引物10100l模板DNA0.12gTaq DNA聚合酶2.5 lMg2+1.5mmol/L加双或三蒸水100 lPCR反响五要素：参加PCR反响的物质主要有五种即： 模板DNA，寡核苷酸引物，
15、dNTP，反响缓冲液，TaqDNA聚合酶。PCR根本原理：PCR技术是模拟生物体DNA的半保存复制，在体外合成DNA链的方法，在模板、DNA、引物、dNTP、Taq酶存在的条件下经过：“高温变性低温退火中温延伸三步循环，获得大量扩增片段。合成引物的要点：引物合成是通过测定引物的OD值，溶解引物，最终合成引物的一个完善的过程。目前引物合成根本采用固相亚磷酰胺三酯法。亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速的偶联以与起始反响物比拟稳定的特点。亚磷酰胺三酯法是将DNA固定在固相载体上完成DNA链的合成的，合成的方向是由待合成引物的3端向5端合成的，相邻的核苷酸通过35磷酸二酯键连接。第一步，是将预先连接在固相载体CPG上的活性基团被保护的核苷酸与三氯乙酸反响，脱去其5-羟基的保护基团DMT，获得游离的5-羟基。第二步，合成DNA的原料，亚磷酰胺保护核苷酸单体，与活化剂四氮唑混
