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1、项目中期检查报告食用菌液体菌种的生产工艺研发与规模化栽培技术应用2016江苏省苏北科技专项(BN2016057)、项目进展与成效。1、项目的阶段目标完成情况1.1项目合同任务及考核指标时间考核指标2016 年 7 月至2016 年12月引进扩繁新品种2-3个，安装调试液体菌种制备系统，设计开展新品种和新 配方筛选试验研究，筛选出高效液体菌种培养基配方1个。2017年1月 至2017年6月优化液体菌种生产工艺，集成关键栽培技术，开展食用菌规模化关键工序技 术优化试验研究，缩短制种周期20天以上；产鲜菇3500吨，销售收入2000万元。2017年7月至2017年12月整理分析试验数据，发表论文1篇
2、，进一步优化和提升关键技术。2018年1月 至2018年6月产鲜菇3500段，收入2000万元，提供就业岗位20个，撰写项目工作总结与 技术总结，准备项目验收材料。为了更好的实施本项目，本项目组从以下几个方面进行项目的组织 实施工作：组织形式：本项目的实施将组建专项工作组作为本项目的管理决 策机构。由项目负责人担任组长，统筹协调管理项目建设，直接负责 项目的总体建设进度安排和各部门、各环节的协调沟通及对外合作。 研究经费采用专款专用，财务独立核算，确保项目顺利实施。技术支持：技术支持单位按合同要求开展本项目的相关研究工 作，承担单位负责项目的实施地点和相关事宜，落实技术服务单位按 合同要求在承
3、担单位开展技术示范，并指导承担单位的技术熟化与推 广工作。承担单位通过筹建相关的合作社，根据生产需求，以“合作社+ 农户”的方式带动农户从事生产，回收产品统一销售。技术服务单位定期组织专家赴项目地进行技术支撑；协助开展培 训相关技术人员和农户。对照项目合同，本年度工作主要围绕引进扩繁新品种，安装调试 液体菌种制备系统，设计开展新品种和新配方筛选试验研究等内容, 目前已经完成了基地建设。同时完成了 10个菌株的引进和筛选，获得 了主推品种1个，其生物学效率相对其他品种提高5.8%.完成了液体菌 种的培养配方和培养条件、进行了出菇培养基的研究。获得了高产培 养基配方各一个，菌丝满袋时间液体菌种节省
4、约22d时间。具体研究 工作如下：1.2.1菌种的引进 从江苏农科院引进科杏3号，自用菌株Ple0025、Ple0026、Ple0028、Pie0029、Ple0032、Pie0038、Ple0040、Ple0045 共10试验品种122菌种的筛选项目组对10菌株进行筛选，进行了如下试验：(1) 菌丝活力实验：将10个供试菌株分别接入PDA斜面培养基，置 于25r恒温箱内培养。定时观察菌丝生长情况，并测算菌丝日均生长 速度。结论：菌丝萌发时间最快的为菌株只需1d，菌株 菌丝萌发最慢需2d;菌株菌丝日均走速最快，菌株走速最慢; 菌丝走满斜面均在710 d之间；菌株的菌丝长势粗壮、 浓密、洁白。菌
5、丝活力的强弱主要表现在菌丝萌发与走菌速度的快慢 以及菌丝生长势情况，综上分析，菌株可做为筛选出的具 有菌丝活力强的菌株。(2) 菌株抗杂能力本研究分别在PDA培养基中先后接入杏鲍菇菌株和杂菌(木霉、红 色链孢霉、青霉)，在培养过程中观察杏鲍菇菌丝和杂菌菌丝生长情 况，判断不同杏鲍菇菌株抗杂能力，结论如下：红色链孢霉都能压过 菌丝继续生长，说明10个杏鲍菇菌株对红色链孢霉均没有抗杂能力； 菌株对木霉、青霉均有较强的抗杂能力，菌株对木霉、 青霉的抗杂能力弱，菌株对三种霉菌均没有抗杂能力。菌株仅对 青霉有较弱的抗杂能力，对其它两种霉菌均没有抗杂能力，菌株 对木霉的抗杂能力弱，但对青霉具有较强的抗杂能
6、力。经分析，菌株 为选出的具有较强的抗杂能力的杏鲍菇菌株。1.2.3出菇试验对上述菌株按常规培养方法进行出菇实验，考察其生物学转化率， 结论如下：杏鲍菇菌株的生物学效率最高，平均为86.2%，其次 为杏鲍菇菌株平均为81.4%，杏鲍菇菌株最低，平均为54.8%。 综合上述实验结果，本项目选育出科杏3号作为主推品种。其生物学 效率相对其他品种提高5.8%.1.2.4新品种和新配方筛选试验研究(1 )液体培养基的优化 杏鲍菇液体菌种的制备以选育出科杏3号作研究对象，从活化的PDA培养菌种上取3块0.5 cm2的菌块，接入250mL三角瓶,28 C、 180 rpm培养5 d ,制得液体一级种子。然
7、后按10 %接种量将一级种 子接入液体菌种培养基中，合适条件下培养，制得杏鲍菇液体菌种。 以科杏3号菌丝生物量为考察对象，恒重法测量获得。 研究实验条件选择碳源的选择选取葡萄糖2 %、蔗糖2 %、玉米粉4%、土豆20%、麸 皮10 %分别作为碳源，另外加入硫酸镁0 .3 %、磷酸二氢钾0.15 %、 蛋白胨0 .05 %、琼脂0.1 %。在250 mL三角瓶中装入100 mL培养基, 灭菌后接入10 mL 一级种子,28 C下180 rpm振荡培养5 d，测量生物 量。每个处理重复3次。氮源的选择 选取蛋白胨0 .6 %、硫酸铵0.6 %、牛肉膏0 .6%、酵母 汁0.3 %、麦麸皮10%作为
8、氮源，另外加入硫酸镁0 .3%、磷酸二氢钾 0.15%、琼脂0 .1 %、蔗糖0.5 %、玉米粉4 %。操作同上。液体菌种培养条件的确定 采用250 mL三角瓶振荡培养，设置不同 的装液量、培养温度、培养时间、摇床转速，测量其生物量。每个处 理重复3次。 结果与分析不同碳源对菌丝生长的影响当以麦麸皮作为碳源时菌丝生物量明显高于其他4组。同时，观 察发现当麦麸皮做为碳源时，液体培养基中菌丝球整齐均一，而其它 组则出现菌丝球大小不一的现象。由此确定麦麸皮为5种待选碳源中 的最优碳源。不同氮源对菌丝生长的影响问题研究发现科杏3号菌株对氮源的利用能力依次为麦麸皮、蛋白 胨、酵母汁、牛肉膏、硫酸铵。以麦
9、麸皮、蛋白胨、酵母汁为氮源时 菌丝球整齐均一。利用硫酸铵作氮源时，菌丝球长势最差，大小不一。 综合原料来源、成本、菌丝生物量，选取麦麸皮同时作为杏鲍菇培养 基的碳源和氮源。同时，为了使菌种能迅速生长，添加了 0 .4 %的葡萄糖作速效碳 源。由此，科杏3号液体菌种培养基为麦麸皮10%、葡萄糖0 .4 %、 硫酸镁0 .3 %、磷酸二氢钾0 .15%、琼脂0 .1%，pH自然。（2）液体培养条件的优化以上述培养基为液体培养基，科杏3号菌株为考察菌株。设置不同的 装液量、培养温度、培养时间、摇床转速，以科杏3号菌丝体生物量 为考察指标。确定其液体菌种培养条件，其研究方案及结果如下： 不同装液量对菌
10、丝生长的影响设置不同装液量水平分别从40、60、80、100、120、140、160ml/ 瓶 接种量10 %，28C，180 rpm培养5 d，测量菌丝生物量。结果表明当 装液量在80100 mL时，菌丝生物量较大。考虑到生产时需要使用 大量的液体菌种，因此选用装液量为100 mL/瓶。 不同培养时间对菌丝生长的影响采用装液量100 mL，接种量10 %，28 C下180 rpm培养不同天数 分别为2、3、4、5、6、7、8d，测量菌丝生物量。结果表明，杏鲍菇 培养至第6d时菌丝生物量达最大值。因此确定科杏3号菌株液体培养时间为6d。不同培养温度对菌丝生长的影响采用装液量100 mL ,接种
11、量10 %,不同温度180 rpm培养5 d,温 度分别设置为20、24、28、32、36。测量菌丝生物量。结果当培养 温度为24r时，菌丝生物量最高，在36r时菌种死亡。因此确认科杏3 号菌株液体培养温度为24 C。 不同摇床转速对菌丝生长的影响采用装液量100 mL ,接种量10%, 25C下用不同转速分别为80、 120、160、180、200、240转/分钟培养6 d ,测量生物量。结果发现 菌丝生物量先随转速的提高而上升，至180 rpm时生物量最高，然后 下降。而当转速超过180 rpm时菌丝生物量下降。因此确认科杏3 号菌株液体培养摇床转速为180转/分钟。综上研究表明科杏3号菌
12、株液体菌种液体培养基及培养条件如下： 科杏3号液体菌种培养基为麦麸皮10%、葡萄糖0 .4 %、硫酸镁0 .3 %、 磷酸二氢钾0 .15%、琼脂0 .1%, pH自然。以100/250mL装液量,10% 接种量,25 C下180 rpm转速培养6 d,菌丝生物量最大。分别采用制备的液体菌种和传统的固体菌种2种方式生产。菌丝满 袋时间液体菌种能节省约22d时间。(3) 科杏3号菌株出菇培养基的筛选培养基配比的核心问题在于其碳氮比是否适合菌丝的生长，本项 目培养材料选用棉籽壳、木屑、麸皮等。根据培养料不同的含碳、氮 量。按不同的碳、氮比例设4个培养料配方：棉籽壳56%，木屑22%,麸皮20%,石
13、膏1 %,糖1%（此配方C/N=30: 1）;棉籽壳 35%，木屑43%, 麸皮20%，石膏1%,糖1 %（此配方C / N=40:1）；棉籽壳14%，木屑64%,麸皮20%，石膏1%,糖1%（此配方 C / N=60: 1）;木屑75%, 麸皮23%，石膏1%,糖1%（此配方C /N=80: 1）。以上各配方料水比为1: 1. 5。研究发现杏鲍菇菌丝体 在4种不同碳氮比方的培养基中，配方培养基菌丝生长速度最快、 菌丝粗壮、浓密，培养基的碳氮比最适宜杏鲍菇菌丝的生长，是较好 的碳氮比培养料配方。2、成果示范推广应用中取得的经济社会效益等。本项目研发的优质菌株生物学效率相对其他品种提高5.8%.
14、研究 开发的液体菌种生产技术在生产中应用后菌丝满袋时间液体菌种节 省约22d，相对为生产企业节约生产成本达10%以上。本项目目前已经根据引进和选育的优质品种科杏3号开展了中 试，目前已经在企业完成2万袋的生产规模，收获杏鲍菇鲜菇5.16 吨，按市场平均价格10元/公斤。产值5.16万元。二、项目经费到位与使用情况。包括省拨经费、主管部门配 套经费、自筹经费等经费的到位以及按预算使用情况。目前，项目财政经费已经到位，自筹经费已经到位。但尚未开展 财政经费的报帐使用。三、项目实施中存在的主要问题及改进建议。项目实施的经费下拨较晚，对项目开展实施有一定的影响。菌种引进过程中，部分菌种的商品性状比较接近，可能为同一品种 不同的名称，影响了菌种选育的代表性，如有经费支持，可开展分子 生物学鉴定，确保菌种的差异性。四、下一步工作计划1、严格按照项目合同规定要求按计划及进度完成项目合同内容。2、继续开展2次以上的技术培训，推广新品种、新生产技术，并扩 大生产规模。3、邀请省、市、县相关管理部门领导赴基地视察调研。加强媒体宣 传和报道4、针对新品种和新技术在应用中出现的问题，将联合技术研究团队， 进行科研攻关和开发。
