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1、大豆油脂肪酸含量的测定：两种前处理方法比较作者：王亚宁，李琳 来源：农业开发与装备 2016年第6期王亚宁，李 琳黑龙江省农垦科学院测试化验中心，黑龙江佳木斯 154007）摘要：比较了乙酰氯一甲醇甲酯化和三甲基氢氧化硫（TMSH ）法甲酯化两种甲酯化前处理 的差异，通过比较，建立了快速简便的脂肪酸甲酯化方法，该方法简单快速，结果可靠。可以 为实验室采用。关键词：脂肪酸；甲酯化；气相色谱法大豆油富含油酸、亚油酸等不饱和脂肪酸，其脂肪酸含量占油脂总量的90%以上，是油脂 的主要成分。大豆油脂的特性与其所含不饱和脂肪酸的组成与配比有关。大豆油脂不饱和脂肪 酸中所含的亚油酸和亚麻酸是哺乳动物自身不能
2、合成的，该重要营养物质必须从植物油脂中获 得1。大豆是亚油酸含量较高的油用植物，亚油酸可防止血清中胆固醇的增加和沉积，软化血 管，对防治高血压和心脑血管疾病均有重要作用。亚麻酸对维持细胞膜的稳定性和调节细胞膜 适应性具有极其重要的生物学意义2。由于脂肪酸不稳定，必须经过衍生才可用于气相色谱分析，而甲酯化是气相色谱测定油脂 脂肪酸的常用衍生方法。甲酯化方法包括三氟化硼法（BF3 甲醇法）、酸法甲酯化法（浓硫酸 甲醇法）、碱式甲酯化法（氢氧化钾甲醇法）、三甲基氢氧化硫法。其中，酸法甲酯化法 易造成长链脂肪酸的损失3，4，三氟化硼毒性大，对试剂的时效性要求较高，操作危险性大 本文比较了三甲基氢氧化硫
3、法和最经典的乙酰氯甲酯化法，选出了最为简便快速的甲酯化方法。1 实验部分1.1 实验材料与试剂大豆油（购于超市）；脂肪酸甲酯标准品（含15种脂肪酸甲酯）；甲醇：色谱纯；甲苯：色谱纯；乙酰氯：分析纯；碳酸钠溶液：6%；三甲基氢氧化硫-甲醇溶液（TMSH）： 0.2mol/L；甲基叔丁基醚：色谱纯；正己烷：色谱纯。1.2 主要仪器设备GC-2010A （FID检测器、自动进样器）；电子天平（感量O.Olmg）；漩涡振荡器；恒温水浴锅；氮吹仪；离心机。1.3 方法1.3.1乙酰氯甲酯化法。准确称取10mg大豆油样品置于15mL螺口玻璃管中，加入5ml甲 苯溶解，加入10%乙酰氯甲醇溶液6.0ml,充
4、氮气后，旋紧螺旋盖，震荡混合后于80ClC水 浴锅中放置2h,期间每隔20min取出振摇一次，水浴后取出冷却至室温。将反应后的样液转移 至50ml离心管中，分别用3.0ml碳酸钠溶液清洗玻璃管三次，合并碳酸钠溶液于50ml离心管 中，混匀，5000r/min离心5min。取上清液作为试液，气相色谱测定。1.3.2三甲基氢氧化硫（TMSH）法。称取10mg大豆油样品置于10ml具塞试管中，加入 500卩l甲基叔丁基醚溶解试样，加入250卩l三甲基氢氧化硫（TMSH）溶液，猛烈振摇30s，正 己烷定容至5.00ml，所得溶液即可用于气相色谱分析。1.3.3 气相色谱条件色谱柱：DB-WAX；载气和
5、流速：氮气，1.0ml/min；进样口温度：260C；分流比：60：1；检测器温度：280C；程序升温：初始温度140C，保持5min，以4C/min升温至240C，保持10min。进样量：1.0ul。2 结果与讨论1 ）脂肪酸甲酯标准溶液浓度为3. 0mg/ml ，其中亚油酸为6. 0mg/ml 。标准样品与试样标准 色谱图见图1和图2。2）结果比较。由结果可知：两种甲酯化方法所得脂肪酸含量并无明显差别。脂肪酸含量均 在大豆油脂肪酸指标范围内（见表1）。ri Ji匸4唸丿甲御M瞞j8.S2127讣 1 C-5)3. E2E. 5-S.422議LT. I-2EL052.8451.0310. S
6、-6&5.645.835.0 |1 Jp 05)Cl 3；0瓊0.1-D.63结论通过对三甲基氢氧化硫法（TMSH）和最经典的乙酰氯甲酯化法作比较，得出TMSH法更为快 速简单，结果可靠，可以作为实验室常用方法被采用。参考文献1 徐杰，胡国华，张大勇大豆籽粒发育过程中脂肪酸组分的累计动态J.作物学报， 2006，32（11）： 1759T763.2 张学杰，程传格，李法曾蜀葵种油的脂肪酸组成分析J.植物资源与环境学报， 2003， 12 （3）： 58-59.3 杨国龙，毕艳兰.甲酯化方法对油脂脂肪酸组成分析的影响A.中国粮油学会油脂分 会第十六届学术年会论文选集C. 2007： 78-81.4 寇秀颖，于国萍脂肪和脂肪酸甲酯化方法的研究J.食品研究与开发，2005，26 （2）： 46-47.
