《【生物】重组DNA技术的基本工具第二课时 2023-2024学年高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3》由会员分享，可在线阅读，更多相关《【生物】重组DNA技术的基本工具第二课时 2023-2024学年高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3（19页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、第三章 基因工程3.1重组DNA技术的基本工具（第二课时）“分子手术刀”“分子缝合针”“分子运输车”2三、基因的“运输车”运载体（载体）要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去！能将外源基因送入细胞的工具就是载体。3常用的分子运输车有哪些？质粒：质粒、噬菌体衍生物、动植物病毒 一种一种裸露裸露的的、结构简单、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核细胞拟核DNADNA之之外外，并并具有具有自我复制自我复制能力的能力的环状双链环状双链DNADNA分子分子终止子：终止子：转录的转录的终点，在转录过终点，在转录过程中起
2、调控作用。程中起调控作用。启动子启动子:转录的转录的起点，在转录过起点，在转录过程中起调控作用。程中起调控作用。复制原点复制原点:DNADNA复制的起始位点复制的起始位点标记基因标记基因4运载体运载体需具备的条件：需具备的条件：在受体细胞中稳定存在并能自我复制或 整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制；有一个至多个限制酶切割位点，便于插入（携带）目的基因；具有标记基因，便于筛选含有 重组DNA分子的细胞；对受体细胞无害、易分离。真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。5思考：大肠杆菌及质粒结构模式图目的基因是一个DNA片段，不含有复制原点、不含有启动子和终止子。3.为什
3、么不能直接将目的基因导入受体细胞？1.质粒上有一个或多个限制酶切点，有什么作用？供外源基因或外源DNA片段插入其中。2.质粒上有标记基因，有什么作用？便于重组DNA的筛选、鉴定和选择。目的基因不能自主复制，不能稳定存在并遗传给后代。6标记基因的筛选原理 载体上的载体上的标记基因标记基因一般是一般是某种抗生素的抗性基因某种抗生素的抗性基因，而，而受体细胞受体细胞没有抵没有抵抗该抗生素的能力抗该抗生素的能力。将含有某抗生素抗性基因的载体导入受体细胞，抗性。将含有某抗生素抗性基因的载体导入受体细胞，抗性基因在受体细胞内表达，受体细胞对该抗生素产生抗性。在基因在受体细胞内表达，受体细胞对该抗生素产生抗
4、性。在含有该抗生素含有该抗生素的培养基上的培养基上，能够生存能够生存的是被导入了的是被导入了载体的受体细胞载体的受体细胞。7下列操作中选用哪种限制酶切割来构建重组质粒？BamH I 和 Hind III 防止目的基因的自身环化不能用E.coRI 的原因 防止目的基因反向连接到载体图1图28BamH I 和 Hind III图2双酶切的优点：避免自身环化，增大目的基因和运载体结合的效率质粒与质粒连接后的运载体过大，转化难以发生，不予考虑。9原理一原理一原理二原理二原理三思路：DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法对它们进行提取DNA
5、不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精DNA能溶于物质的量浓度为2 mol/L的NaCl溶液在一定温度下，DNA被二苯胺试剂染成蓝色 DNA的粗提取和鉴定探究探究.实验实验一、实验原理：10 不同生物的组织中DNA含量不同。在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。你认为如下提供的材料中哪些不适合提取DNA？为什么？供选材料：（括号内为染色体条数）新鲜洋葱（16）、香蕉、菠菜（12）、菜花、猕猴桃（58）；猪肝（38）、鱼卵、鸡血（78）、哺乳动物的成熟红细胞；在液体培养基中培养的大肠杆菌（1）原则上，凡是含有DNA的生物材料都可以考虑；选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能
6、性更大。1、实验材料的选取 利用动物细胞提取DNA破碎细胞的方法：动物细胞无细胞壁，可直接吸水涨破。以血液为实验材料时，每100 mL血液中需要加入3 g柠檬酸钠，防止血液凝固。二、实验材料及用具：112.试剂：试试剂剂研磨液研磨液体积分数为体积分数为95%95%的酒精的酒精二苯胺二苯胺2mol/L 2mol/L 的的NaClNaCl溶液溶液 蒸馏水蒸馏水溶解并提取DNA析出DNA溶解DNA鉴定DNA，要现配现用研磨液成分作用SDS使蛋白质变性EDTA抑制DNA酶Tris-HCl缓冲液稳定DNA12三、实验步骤：1.破碎细胞称取 ，切碎，放入研钵，倒入 ，研磨。洋葱研磨液充分问题2:如果研磨不
7、充分会对实验结果产生怎样的影响？研磨不充分，会使DNA分子不能从细胞核中释放出来，从而使研磨液中的DNA含量较低，影响最终提取的DNA量。132.去除杂质在漏斗中垫上 过滤研磨液，4冰箱中静置后取 ；或将研磨液倒入塑料离心管中离心，取 。纱布上清液上清液问题3:过滤能否用滤纸代替纱布？不可以。因为DNA会被吸附到滤纸上而大量损失，影响最终提取的DNA量。问题4:此步骤获得的上清液中可能含有哪些细胞成分？可能含有DNA、RNA以及蛋白质、脂质、糖类等。143.DNA的粗提取 在上清液中加入体积相等的 溶液,静置23min，溶液中出现的 就是粗提取的DNA。预冷的酒精白色丝状物用冷却的酒精析出DN
8、A问题5:此步骤的目的是？使蛋白质等溶解在酒精中，DNA不溶于酒精而析出预冷的酒精的优点可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；抑制分子运动，使DNA易形成沉淀析出；低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少其断裂。153.DNA的粗提取 用玻璃棒沿 搅拌，卷起 ，并用滤纸吸去上面的水分：或将溶液倒入塑料离心管中离心，取 晾干一个方向沉淀物丝状物问题6:为什么要用玻璃棒沿一个方向缓慢搅拌？避免破坏DNA用冷却的酒精析出DNA164.DNA的鉴定 将丝状物或沉淀物溶于 溶液中，加入 试剂，混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。二苯胺2mol/L的NaCl空白对照组：在等体积的NaCl溶液中加
9、入二苯胺试剂，将试管置于同等沸水浴中加热5min。加入2mol/L氯化钠溶液不加入丝状物加入4mL二苯胺试剂加入2mol/L氯化钠溶液加入丝状物加入4mL二苯胺试剂实验组对照组水浴加热174.DNA的鉴定 将丝状物或沉淀物溶于 溶液中，加入 试剂，混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。二苯胺2mol/L的NaCl实验组对照组问题7:如何评价结果？看提取物颜色看与二苯胺反应颜色的深浅DNA纯度DNA的量问题8:与其他同学提取的DNA进行比较，看看实验结果有何不同，分析产生差异的原因。18问题8:与其他同学提取的DNA进行比较，看看实验结果有何不同，分析产生差异的原因。实验结果不明显的可能原因：材料中的核物质没有充分释放出来，如研磨不充分或蒸馏水的量不够。加入酒精后摇动或搅拌时过猛，DNA被破坏。二苯胺最好现用现配，否则二苯胺变成浅蓝色，影响鉴定效果。
