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1、一、保定技术 保定的定义，是指使用手或以器械对动物个体之活动作部分或完全之限制，以便进行检查、采样、投药、治疗或进行实验操作等之手段而言。保定无疑是进行所有动物实验前的基本步骤，但在进行实验的过程中也需避免使动物产生不必要的伤害，以下为进行实验动物保定时之重要须知： (一)不可将保定装置视为正常之饲养方式。 (二)不可仅仅为处理或控制上图方便，而恣意使用保定装置。 (三)在可完成实验目的为前提下，需尽量缩短保定之时间。 (四)在进行保定之前，应训练动物去适应保定设备与进行保定的人员，保定人员也应预先熟练保定相关之技术。 (五)保定期间若动物有受伤或不适之情形时，则应将动物暂时性或永久性移离保定
2、装置，并进行必要之治疗。 二、大鼠的保定 体型较小、未达120g的大鼠，可以采用类似保定小鼠的方式。体型较大的大鼠，则应双手保定，由一人执行保定，一人双手采样或投药。也可以采用保定架保定。抓取大鼠时穿戴橡胶手套，可以避免因直接接触大鼠所引起的过敏。尽量避免从大鼠的前方来接触他们，可避免受大鼠咬伤。1.抓取大鼠时可以握住大鼠尾根部，以此对大鼠进行简单的搬运或移动。不可抓取大鼠尾巴末端，抓取末端可能会造成大鼠尾巴的脱落。如将大鼠尾巴提起后大鼠剧烈摇晃反抗，不可突然将抓着尾巴的手放开，大鼠可能会因此而摔伤。2.由大鼠后方慢慢接近，单手轻握住其胸部，再将其提起，另一手可再抓住其尾根部、两只后脚或下腹部
3、。抓起后如大鼠剧烈挣扎，可轻微摇晃，大鼠的挣扎会稍微和缓。抓取时避免将手指至于大鼠嘴巴可及之处，可避免被大鼠咬伤。3.大鼠保定架三、大鼠的采血 采血对非专职实验动物从业人员而言，是一门难度颇高的技术。采血的技术只能靠熟能生巧与细心的摸索正确的手感来精进。采血会造成实验动物较严重的紧迫，因此建议给予适当的麻醉或镇静，可以有助于采血过程的顺畅。成年大鼠的总血量是20至40ml，单次采血的建议量为2至3ml，放血可得之总血量是8至12ml。少量采血时可以使用眼角采血、隐静脉采血、颈静脉采血及尾巴采血，大量采血则采用心脏采血与斩首采血。心脏采血之困难度较高，且需牺牲动物。除非将动物牺牲，否则所有的采血
4、法皆需确认动物的伤口以完全止血不在出血后，才可将动物放回PC笼内。(一)尾部采血： 动物如不麻醉则需以保定器保定。将尾巴置于40温水中或以加热灯照射5至10分钟，使尾巴血管扩张。以23或21G的针头由尾巴左右两侧之尾静脉或腹侧的尾动脉抽血，或仅以21G的蝴蝶针头插入尾动脉中，确认有血液流出后再以离心管承接。 (二)隐静脉（Saphenousvein）采血: 将动物徒手保定或者将动物塞进适当直径与长度的透明塑料管，藉由固定且紧绷大鼠大腿与尾巴之间的皮肤来伸直其大腿，剔除大腿外侧之皮毛，即可在踝关节的上下端见到隐静脉，将剃毛部位以酒精消毒，以23G的针头刺开隐静脉，以毛细管收集流出之血液，采得足够
5、之血量后将动物的后脚弯曲以减少开创部位的血流量，再将毛细管内的血液送入微量离心管，最后再以灭菌棉花直接加压开创部位止血。经过24小时候相同部位可以继续采血。 (三)颈静脉（Jugularvein）采血： 熟练的操作者可以在大鼠清醒时由颈静脉简单的采得血液，动物所受到的紧迫相较于眼角采血或尾静脉采血，会比较低，但建议初学者先将动物镇静或麻醉后再进行采血。将大鼠保定后保持腹部朝上、头部朝向采血者，将大鼠的头部保持笔直并将右侧颈部的毛发剔除，沿着下颚平行于正中线以21G的针头以极低角度下针，以脖子与肩膀形成的夹角为下针点缓慢推进，待有血液流入针筒后，再缓慢回抽。抽血完成后通常不会造成出血或血肿。(四
6、)眼角采血可麻醉或徒手保定。采血时以巴士德吸管由眼窝前端边旋转边向、向后插入眼窝内静脉丛，待巴士德吸管可见出血时，倾斜巴士德吸管，使血液流入巴士德吸管中。采血时间尽量缩短以避免凝血，采血后需注意止血。采血过程不可过于粗暴而伤及眼球或哈氏腺。 (六)心脏采血： 动物需经安乐死或麻醉后才可进行心脏采血，采血结束也需将动物安乐死。将动物仰卧置于台面，下针的位置位于剑状软骨突下方，约与腹部呈15至30度角向胸腔缓缓推入，一发现有血液流入针筒，即固定针头开始缓慢抽血。或直接由胸腔下针，由胸腔后端1/3处，自胸骨左侧缘垂直经刺入肋骨间而达心脏。 (五)斩首采血法： 此法取得之血液因可能会受动物的其它体液污
7、染。将大鼠摇晃或麻醉使其无法动弹，再以强力的剪刀或断头器将动物斩首后迅速以容器装盛。 四、胃管灌注 胃管灌注能使药剂经胃管直接投入胃中，进行胃管灌注时不可使用一般的针头，需使用经处理过的球型针头，可避免对动物造成伤害。插入之前需先测量动物由口腔至胃的距离选用适当长度的胃管，以避免插入胃管时插入过深造成动物胃的伤害，或是插入过浅使灌注物无法达到胃部。以注射针筒吸取药物，再保定动物，将胃管球型头置入动物口腔中，经喉背滑入食道到达胃内部，如果在插入过程遇到阻碍，需立即拔出，重新再插入，胃管插入胃后，迅即注射，注射完立刻拔出胃管。胃管灌注建议的灌注量为20 ml/kg，0.25公斤以上的大鼠仅能灌注5
8、 ml。五、注射 大鼠注射建议使用大于23G的针头，且尽量使用较短的注射针。 (一)肌肉注射： 事先以注射针筒吸取欲注射的剂量。一人保定动物，另一人执行注射。一般注射部位为大腿后侧肌肉。以酒精消毒注射部位后，以注射针头插入，试着回抽针筒，如有血液或液体回流，表示不适当，需重新插入。确定针头插入肌肉后，慢慢将药剂推入，推入的速度应避免太快，以防组织损伤。肌肉注射的建议注射量为1.0ml/kg，0.5公斤以上的大鼠仅能注射5ml。(二)皮下注射： 事先以注射针筒吸取欲注射的剂量。保定动物，注射部位颈部上方皮肤需以酒精消毒。以拇指与食指将颈部上方皮肤拧起，以针头插入皮肤拧起后产生之凹陷处，试着回抽针
9、筒，如有血液或液体回流，表示不适当，需重新插入。确定插入正确位置后，缓缓将药剂推入。皮下注射建议的注射量为20 ml/kg，可分成2至3处区域注射。(三)腹腔内注射： 事先以注射针筒吸取欲注射的剂量。保定动物，头部朝下腹部朝上，注射针头以30度角插入腹中线右侧。试着回抽针筒，如有血液或液体回流，表示不适当，需重新插入。缓缓将药剂推入。腹腔内注射建议的注射量为20 ml/kg。0.25公斤以上的大鼠仅能注射5 ml。(四)静脉注射：大鼠一般静脉注射区域为尾根部左右侧之静脉。以保定架保定大鼠，将尾巴置于40温水中或以加热灯照射5至10分钟，使尾巴血管扩张。一手拉直尾巴，以酒精消毒后，由近尾根10至
10、15 mm处，针头与尾巴呈20至30度角下针，下针时针尖斜面朝上，针尖进入静脉时会有一瞬间通畅的感觉，若仅插入皮下则会持续感到针尖受阻。建议的静脉注射量为10 ml/kg。0.25公斤以上的大鼠仅能注射2.5 ml。 六、粪便与尿液的收集 (一)代谢笼：以代谢笼单独饲养动物，代谢笼可以定量动物每日摄食之食物与饮水量，又因其能将粪尿分离，所以也能定量每日动物之排份与排尿量。 (二)直接采集：小型囓齿类动物通常在有人接触时，就会因惊吓而排便或分泌尿液，故可在保定时，同时采集尿液与粪便。 (三)导尿管：雄性之天竺鼠或兔子可以使用外径0.5mm的导尿管收集尿液，但除非非常了解这些动物的泌尿生殖解剖构造
11、，否则很难应用于同种之雌性动物。按人与各种动物以及各种动物之间用药剂量换算表 动物与人体的每公斤体重剂量折算系数表折算系数WA组动物或成人小鼠0.02kg大鼠0.2kg豚鼠0.4kg兔1.5kg猫2kg犬12kg成人60kgB种动物或成人小鼠20g1.01.61.62.73.24.89.01大鼠0.2kg0.71.01.141.882.33.66.25豚鼠0.4kg0.610.871.01.652.053.05.55兔1.5kg0.370.520.61.01.231.762.30猫2.0kg0.300.420.480.811.01.442.70犬12kg0.210.280.340.56.068
12、1.01.88成人60kg0.110.160.180.3040.3710.5311.0已知A种动物每kg体重用药量，欲估算B种动物每kg体重用药剂量时，可先查第422页表3，找出折算系数（W），再按下式计算：B种动物的剂量(mg/kg)=WA种动物的剂量(mg/kg)例如，已知某药对小鼠的最大耐受量为20mg/kg（20g小鼠用0.4mg），需折算为家兔量。查A种动物为小鼠，B种动物为兔，交叉点为折算系数W=0.37，故家兔用药量为0.3720mg/kg=7.4mg/kg，1.5kg家兔用药量为11.1mg。SD大鼠（9周龄）各脏器重量序号组织雄性重量（g）雌性重量（g）1心1.191.022肝12.787.493脾0.670.584肺1.921.295肾3.44
