《CCK8实验方法》由会员分享，可在线阅读，更多相关《CCK8实验方法（1页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实用文档1肺动脉平滑肌细胞生长至70%-80%融合时，用胰酶消化，收集贴壁细胞，细胞计数，制成5X 104/ml密度的细胞悬液，在 96孔板中配置100 L的细胞悬液。将培养板在培养箱 预培养24小时（在37 C, 5% CO的条件下）。2、 更换新鲜1% FBS+DME低血清培养液， 随机分为上述4组，每组做6个复孔，并设置空白 对照孔。3、 将培养板分别在常氧和低氧培养箱中培养24h。4、 向每孔加入10卩L CCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD直的读数）。5、 将培养板在培养箱内孵育1-4小时。（2h后）6、用酶标仪测定在 450nm处的吸光度。7、 如果暂时不测定 OD值
2、，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10卩L 0.1M的HCL溶液或者1%w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。备注： 建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK式剂后的培养时间。（怎么判断哪个时间好？） 有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔减的差异。加入CCK式剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养
3、基页面下加，容易产生气泡，会干扰OD值读数。 白细胞可能需要培养较长时间。 当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000个/孔（100 L培养基）。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于 2,500个/孔（100如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积 的10%加入CCK溶液。 如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是 450nm滤光片的检测灵敏度最高。 培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。活力计算：细胞活力* （%） =A（加药）-A （空白）/A（0加药）-A （空白）X 100A （加药）：具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度A （空白）：具有培养基和 CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度A （ 0加药）：具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力CCK-8: Cell Counting Kit-8Sigman NO.96992 （10ul）
