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1、水产动物组织胚胎学实验指导书编 著：钟 蕾合用专业：水产养殖 水族科学与技术湖南农业大学印制三月目 录一、课程的性质和任务1二、实验教学目的和基本规定1三、实验考核方式及办法1 四、实验项目2五、实验课注意事项2六、课堂实验3实验一、显微镜的构造和使用、细胞、上皮组织、结缔组织的观测3实验二、血液涂片的制作，血细胞、肌肉组织、神经组织的观测6实验三、血管、呼吸、泌尿器官的观测11实验四、消化、免疫、内分泌器官的观测17实验五、生殖器官、鱼类初期发育的观测22七、教学实习24八、重要参考书28实验课程编号：20505B3sy课程属性：必修实验属性：非独立设课学时学分：20学时，计入课程学分实验应
2、开学期：春季先修课程：基础化学实验、鱼类学实验一、课程的性质与任务 组织胚胎学实验是组织胚胎学的重要组成部分。它是在理论讲授的基础上，通过实验观测，使学生掌握动物体的微细结构，并能从细胞、组织和器官三个层次上对鱼类有机体的形态结构与功能有一个总体结识。通过胚胎实验课，使学生掌握普通胚胎学的基础知识及鱼类发生的一般规律。通过实验特别是一周的综合实验，使学生掌握生物绘图、切片、染色等一些基本技能或能力，为以后的生产实践和科学研究打下坚实的基础。二、教学目的与基本规定（一）教学目的 1掌握光学显微镜的一般构造和使用方法。 2通过切片观测，掌握细胞的一般构造，四大基本组织的一般构造和器官组织的一般构造
3、。 3在显微镜下，对照实物切片，如何科学地、真实地掌握生物绘图技术。 4掌握组织切片技术的基本原理和制作一般组织学切片标本的程序。（二）基本规定 1.能纯熟掌握显微镜操作技术。 2.能按实验指导书提供的方法进行验证性实验。三、实验考核方式及方法1实验前规定对实验内容先进行预习。讲解实验内容时可采用提问的方式进行检查了解。2每次实验结束时，对实验的基本内容要进行实地检查。3每次实验规定绘24个图。作为当天实验作业上交。 4对作业图进行认真批改。成绩计入30的平时成绩。 5实验前要对上次实验中发现的问题进行讲评；不及格者要补考。平时成绩不及格不能参与期末考试。6综合实验每人规定交一张自己制作的切片
4、和一张血液涂片，并进行综合评分。四、实验项目一览表 水产动物组织胚胎学实验项目一览表序号 实验项目名称 实验类型 实验规定 适应专业 学时1显微镜使用及细胞、上皮组织、结缔组织的观测 验证 必做 水产养殖 42血液涂片制作、血细胞、肌肉、神经组织观测 技能 必做 水产养殖 43血管、呼吸、泌尿器官的观测 验证 必做 水产养殖 44消化、免疫、内分泌器官的观测 验证 必做 水产养殖 45生殖器官、鱼类初期胚胎发育的观测 验证 必做 水产养殖 4五、实验课注意事项1、 实验前应认真预习实验指导书，明的确验目的、规定，了解实验内容和方法，熟悉操作环节，以提高实验效果。2、 实验前仔细清点实验材料。实
5、验后须经指导教师检查无误，方可离开实验室。如有损坏，应及时报告指导老师，认真填写好损坏的物品登记。3、 实验时应按照指定方法观测、操作，培养严厉认真一丝不苟的科学态度和工作作风。4、 认真记录实验结果，准时完毕实验报告。作业力求简明扼要，清楚对的，绘图用实验报告纸，绘图要认真，不得草率和照抄。注明绘物及其各部分的名称，实验报告不合规定者，教师有权规定重做。5、 爱惜实验仪器及用品，要特别注意显微镜和解剖镜的对的使用和保护。遇有故障或损坏时，应立即报告指导老师。6、 爱惜实验材料，不得浪费和随意丢弃。爱惜实验标本。节约药品。实验材料、用品等，用后要及时清整，物归原处，由值日生统一归整交还老师。7
6、、 遵守实验秩序，保持室内安静，有事先报告，未经指导老师允许，不得擅自提前离开实验室。8、 每次实验结束后，由值日生作好清洁整理工作，要特别注意水、电等的安全检查，关好门窗，方可离开实验室。9、 实验课不认真完毕，未经指导教师通过者，不得参与期末考试，成绩以“不及格”论处。10、每次实验成绩作为平时成绩加权到课程终成绩。第一部分 课堂实验实验一、显微镜的构造和使用、细胞、上皮组织、结缔组织的观测（一）实验目的和规定1、通过实验过程中的操作和观测来验证和巩固理论知识，加深学生对理论课内容的理解。2、通过对各种组织切片的观测，逐步培养学生学会观测、比较、分析和综合各种现象的科学方法，培养学生独立思
7、考和独立工作的能力。3、进行本学科的基本技能训练，使学生可以纯熟使用光学显微镜，了解组织和器官切片的一般制作过程，学会在光镜下对的绘图和描述观测到组织或器官的形态结构特点。4、掌握多种细胞、被覆上皮、疏松结缔组织的结构特点。（二）教学仪器多媒体教学互动设备，显微镜、切片，以及相关的挂图、相关的教学课件等。（三）实验内容一、光学显微镜的构造、使用方法和保护1显微镜的重要构造：（1）镜筒、物镜转换器、滤片槽、载物台、粗调焦手轮和细调焦手轮。（2）照明器：是显微镜的灯光照明系统，直接组装在镜座内部。（3）集光器：是一个装在载物台下可以沿着光轴方向垂直移动的透镜系统，它的重要作用时把照明光线聚集在被观
8、测的物体上。（4）光阑：在集光器上装有孔径光阑，它对物像的质量和分辨力的大小有着重要的作用。（5）物镜：分低倍、高倍和油镜三种。低倍镜是4和10，高倍镜是40，油镜是100。（6）目镜：常用放大倍数为10的目镜，物像的放大倍数=目镜倍数物镜倍数。目镜内有一黑色指针，可作指示镜下结构。2显微镜的使用方法:（1） 取镜：拿显微镜时必须一手紧握镜臂，另一手平托镜座底，切忌单手提取以免目镜脱落。（2） 放置组织切片：将组织切片的盖玻片朝上，放在载物台上，然后用标本夹固定。（3） 调节焦距：从侧面观测低倍镜头，旋转粗调焦手轮使镜头接近玻片为止，从目镜观测，同时旋转细调焦手轮，边旋转边观测，直到视野物像清
9、楚为止。（4） 转换高倍镜：需转换高倍镜头时，必须先在低倍镜下将要观测的部分移到视野正中，然后直接转换高倍镜头，此时镜下隐隐约约可见物像，再稍微转动细调焦手轮即可看清楚物像。（5）收尾工作：显微镜用毕，取下玻片，物镜转成“八”字形，下降镜头使之轻触载物台，最后将显微镜放入镜箱。3.使用显微镜的注意事项:（1）不能拆卸显微镜的任何部件或与其他显微镜调换部件，使用前后要检查各零部件是否齐全，如发现损坏应及时报告教师，以便修理。（2）目镜、物镜和玻片要保持干净。（3）不要随便用其它抹布或普通纸擦镜面。必要时可用擦镜纸，蘸少许二甲苯擦去镜头的污物。二、切片观测（一）单层柱状上皮取材：鱼肠和猪的十二指肠
10、，染色：HE1. 肉眼观测切片呈长条状。有凹凸不平突起的一面是腔面，突起称皱襞。皱襞表面有一层蓝色结构，即为单层柱状上皮。2. 低倍镜观测在绒毛表面找到单层柱状上皮。上皮有两个面：游离面即为空肠腔面，没有任何组织相连接，其相应的另一面是基底面，与结缔组织相连接。移动切片，选择蓝色椭圆形或杆状细胞核排列整齐的部位转高倍镜观测。3. 高倍镜观测上皮细胞呈柱状，胞质着浅红色，胞核呈椭圆形或长杆状，着紫蓝色，排列于细胞基底部（思考：单层柱状上皮还分布在哪里？有何重要功能？）（二）单层扁平上皮单层扁平上皮正面观取材：动物肠系膜，铺片。染色：镀银1. 肉眼观测铺片为一小块方形棕黄色组织，色深的细条状结构是
11、肠系膜中的毛细血管和结缔组织，淡黄色部位是单层扁平上皮。2. 低倍镜观测可见许多不规则的黑色或棕色网格（实为细胞间质，嗜银颗粒沉积在细胞间质而形成的）。网格内即为单层扁平上皮细胞。3. 高倍镜观测单层扁平上皮细胞呈多边形，两相邻细胞交界处呈棕色锯齿状，细胞中央有一圆形或椭圆形白色结构即为细胞核的位置。（三）复层扁平上皮 取材：动物食管和乌鳢皮肤染色：HE1.肉眼观测切片是食管横切面，管腔面收缩形成许多皱襞，使管腔变小而不规则。沿管腔表面有一层紫蓝色结构，即为复层扁平上皮。1. 低倍镜观测在管腔面找到复层扁平上皮，其细胞层数约为数十层，基底面呈波浪状以结缔组织连接。结缔组织形成乳头（色较浅）突到
12、基底层的凹面（为什么？）。从基底面到游离面，细胞分界不清，但可从细胞核的形态变化观测其特点。2. 高倍镜观测从基底面到游离面观测各层上皮细胞形态特点，基底层细胞矮柱状（一层），核呈卵圆形，着色深，排列紧密，胞质很少（有些部位基底层细胞核可见23层，是由于切斜了；有些部位在上皮内可见圆形或不规则形的浅色结构，是因上皮切斜，切到了深处突入基底层凹面的结缔组织乳头，乳头周边染色较深部分即为上皮基底层细胞）。中间部有几层多边形细胞，分界清楚（细胞间的分界线实为细胞间质），胞质着色浅，胞核圆，位细胞中央。近游离面有数层扁平细胞，胞核椭圆形，其长轴与表面平行。（四）疏松结缔组织铺片取材：小鼠肠系膜铺片。染
13、色：混合染色为显示疏松结缔组织中巨噬细胞的形态特点，在活体小鼠皮下注射台盼蓝染料，存活数日后处死，取其肠系膜，用分离针分离平铺于玻片上，经固定、脱水和复合染色后即可在镜下观测。这种铺片在光镜下可见有两种纤维（胶原纤维、弹性纤维）和两种细胞（肥大细胞、巨噬细胞）。有时可见成纤维细胞。1. 肉眼观测： 铺片呈紫红色不规则组织块。2. 低倍镜观测选择薄而较透明的部位观测。较粗的粉红色纤维是胶原纤维。混杂在胶原纤维之间的细如发丝的紫色纤维即为弹性纤维。弹性纤维常为单条直行，有分支，交织成网，断端常卷曲。网状纤维用浸银法方可显示，故此片看不到。上述纤维之间有肥大细胞和巨噬细胞。胞质中可见紫蓝色颗粒的是肥大细胞。3. 高倍镜观测: 选择纤维较分散、细胞较多的部位观测，可见下列细胞：成纤维细胞：只见浅蓝色椭圆形细胞核，胞核中有12个核仁。细胞质染色很浅，隐约可见淡紫色的细胞轮廓，有的细胞质模糊不清。此种细胞量最多。巨噬细胞：细胞轮廓清楚，形态多样，呈卵圆形或不规则形；细胞核小着色深（注意与成纤维细胞比较），胞质中可见吞噬的紫蓝色台盼蓝染料颗粒。肥大细胞：细胞三五成群分布，胞体呈圆形或卵圆形，胞质中充满着色深粗大的具有异染性的嗜碱性颗粒（因颗粒太密集而不能分辨）。实验二、血液涂片的制作，血细胞
