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1、一 概述 1有关物质 1.1照高效液相色谱法（通则0512）测定1.2色谱条件 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为磷酸盐 缓冲液（取0.05mol/L磷酸氢二钾溶液，用20%的磷酸溶液调节pH 值至8.2） -乙腈（45：55）,流动相B为甲醇，柱温为30C（必要时 适当调整）；按下表进行线性梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml,检测 波长为210nmo取杂质S和杂质A对照品各适量，加上述稀释液溶解并稀释制成 每1ml中各约含0.05mg的溶液，作为杂质S和杂质A对照品溶液； 另取阿奇霉素系统适用性对照品（含杂质R、杂质Q、杂质J、杂质丨、 杂质H、阿奇霉素和杂质B）适量，加上述对照品溶液溶
2、解并稀释制 成每1ml中约含10mg的溶液，作为系统适用性溶液；精密量取对照 溶液10ml，置50ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为灵敏 度溶液，取系统适用性溶液和灵敏度溶液各50 |d l，分别注入液相色 谱仪，灵敏度溶液主成分峰峰高的信噪比应大于1 0 ，系统适用性溶 液色谱图中各峰之间的分离度均应大于1.2，阿奇霉素峰的保留时间 应在3040分钟之间。时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）0752535955649556575257175251.3测定法取本品细粉适量，加稀释液磷酸二氢铵溶液（称取磷酸二氢铵 1.73g,加水溶解并稀释至1000ml,用氨试液调节pH值至10.0
3、0.05） -甲醇-乙腈（7： 7： 6）使阿奇霉素溶解并稀释制成每1ml中含阿奇 霉素10mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取1 ml, 置200 ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。 精密量取供试品溶液和对照溶液各50丨，分别注入液相色谱图仪， 记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，杂质B峰面积不得大 于对照溶液主峰面积的4倍（2.0%）,杂质H与杂质Q按校正后的峰 面积计算（分别乘以校正因子0.1、0.4）不得大于对照溶液主峰面 积的 2 倍（1.0%），其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积 的 2 倍（1.0%），各杂质峰面积的和按校正后的峰面积
4、计算不得大于 对照溶液主峰面积的8 倍（4.0%）。2 溶出度2.1 照溶出度与释放度测定法（通则0931 第二法）测定。2.2取本品，以磷酸盐缓冲液（pH6.0） （O.1mol/L磷酸氢二钠溶液 6000ml,加盐酸约40ml,调节PH值至6.00.05）900ml为溶出介质， 转速为每分钟100转，依法操作，经45分钟时，取溶液适量，滤过， 精密量取续滤液适量，用溶出介质定量稀释制成每1ml中约含阿奇霉 素0.2mg的溶液，作为供试品溶液；另取阿奇霉素对照品适量，精密 称定，加适量乙醇（每2mg约加乙醇1ml）使溶解，用溶出介质定量 稀释制成每1ml中约含0.2mg的溶液，作为对照品溶液
5、。照含量测定 项下的方法测定，按外标法以峰面积计算每片的溶出量。限度为标示 量的 75，应符合规定。3含量3.1 照高效液相色谱法（通则05 1 2 ）测定。3.2 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充 剂；以磷酸盐缓冲液（取0.05mol/L磷酸氢二钾溶液，用20%的磷酸 溶液调节pH值至8.2）-乙腈（45 : 55）为流动相；检测波长为210nm。 取阿奇霉素系统适用性试验对照品适量，加乙腈溶解并稀释制成每 1ml中含10mg的溶液，取50丨注入液相色谱仪，记录的色谱图应 与标准图谱一致。3.3测定法 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约 相当于阿奇霉素0.1
6、g），加乙腈溶解并定量稀释制成每1ml中约含阿 奇霉素1mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液，精密量取50 Ul注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿奇霉素对照品适量，同法 测定。按外标法以峰面积计算，即得。4. 工艺处方组成规格：0.25g物料名称基准处方1000片阿奇霉素250g糊精20g低取代羟丙纤维素25g微晶纤维素69.5g羧甲淀粉钠20g硬脂酸镁8g聚维酮K308g合计（干物质）400.5g5、仪器基本情况：设备名称XXXXX设备编号XXXXX型号XXXXX出厂编号XXXXX出厂日期XXXX安装位置XXXXXX生产厂家XXXX供货厂家XXXXXX6.相关术语：6.1准确度系指采用该
7、方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。一般用回收率（）表示。回收率限度应在98%102%之间。6.2 精密度系指在规定的条件下同一份均匀的供试品，经多次取样测 定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标 准偏差表示。6.3 线性系指在设计的测定范围内，测定结果与试样中被测物的浓度 直接呈比例关系的程度。6.4 范围系指分析方法能达到一定精密度、准确度和线性要求时的高 低限浓度或量的区间。6.5 检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。6.6 耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受 程度。二. 验证目的通过验证以确认所采用的方法适合于阿奇霉素片的测定。根
8、据 样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据 验证结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行阿奇霉素片检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。三. 验证依据中国药典 2015 年版二部中国药典 2015年版四部 9101药品质量标准分析方法验证指导 原则四. 参考文件1、验证管理规程2、验证总计划3、SIL-20A 高效液相色谱仪操作维护保养规程5、变更控制规程6、偏差控制规程五. 验证职责六. 验证步骤1. 阿奇霉素片含量分析方法验证1.1 系统适应性试验1.1.1 色谱条件 固定相：十八烷基硅烷键合硅胶色谱
9、柱（C ）; 检测器：紫外检测器，检测波长 210nm； 18 流动相：磷酸盐缓冲液（0.05mol/L磷酸氢二钾溶液，用20% 磷酸溶液调节PH值至8.2）-乙腈二（45： 55） 流速：1.0mL/m in。 柱温：30C 进样量：50L。 照高效液相色谱法（通则0512）测定。1.1.2 系统适用性试验溶液：取阿奇霉素系统适用性对照品约 20mg 加乙腈 2ml 溶解，制成每 1ml 中含 10mg 的溶液，作为系统适用性试 验溶液。1.1.3取系统适用性试验溶液50L注入液相色谱仪。1.1.4判定标准：记录的色谱图应与标准图谱一致。 1.2阿奇霉素片含量分析方法线性验证1.2.1 溶液
10、配制1.2.1 流动相配制以磷酸盐缓冲液（取0.05mol/L磷酸氢二钾溶液，用20%的磷酸溶液 调节pH值至8.2） -乙腈（45：55）为流动相1. 2. 2处方量辅料配制精密称定糊精约200mg、低取代羟丙纤维素约250mg、微晶纤维 素约695mg、羧甲淀粉钠200mg、硬脂酸镁80mg、聚维酮K30 80mg 混合。此混合辅料约为10片阿奇霉素片（2.5g）所需的辅料共约1505 mg。1.2.3样品溶液配制 精密称取阿奇霉素对照品约 8mg 、9mg 、10mg 、11mg,12 mg， 置10ml量瓶中，乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶 液。按80%、90%、100%、1
11、10%、120%的倍数稀释，加乙腈配置 成浓度为 0.8mg /ml、0.9mg /ml、1mg/ml、1.1mg/ml、1.2mg /ml 的溶液。1.2.4测定精密量取经微孔滤膜过滤后各不同浓度稀释液50从丨，注入液相 色谱仪，每个样品进样2次，记录色谱图。1.2.5判定标准：阿奇霉素在0.8 mg /m l至1.2mg /m l的浓度范围内， 阿奇霉素峰面积成线性且相关系数RM99.8%。1.3阿奇霉素片含量分析方法精密度验证 1.3.1流动相配制见阿奇霉素片含量分析方法线性验证项下。1.3.2样品溶液配制取阿奇霉素片（XXXX生产）10片，研细，精密称取样品适量（约 相当于阿奇霉素0.
12、1g ）置100ml量瓶中，加乙腈溶解并定量稀释制 成每1ml中约含阿奇霉素1mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶 液；1.3.3测定精密量取50从l注入液相色谱仪，记录色谱图，连续6次，得到拉 呋替丁峰面积。1.3.4判定标准：峰面积的SreW2.0%。1.4阿奇霉素片含量分析方法准确度验证1.4.1流动相配制、处方量辅料配制见阿奇霉素片含量分析方法线性 验证项下。1.4.2样品溶液配制精密称取阿奇霉素对照品约8mg、10mg、12 mg，置10ml量瓶 中，乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。按80%、 100%、120%的倍数稀释，加乙腈配置成浓度为0.8mg /ml、1mg/
13、ml、 1.2mg /ml的溶液。1.4.3测定精密量取501注入液相色谱仪，记录色谱图，得到阿奇霉素峰 面积。通过线性方程计算阿奇霉素浓度。用测得浓度和实际浓度之比 计算回收率。1.4.4判定标准：回收率限度应在98%-102%之间，回收率的S W2.0%。 rel1 . 5阿奇霉素片含量分析方法范围验证1.5.1数据记录及结果计算依据1.2线性，1.3精密度，1.4准确度，确定高效液相色谱法 符合中国药典2015版阿奇霉素峰含量的范围一般为测定浓度的 范围。1.5.2判定标准：含量的范围一般为测定浓度的 80% 120%。1 . 6阿奇霉素片含量分析方法专属性验证 1.6.1流动相配制、处
14、方量辅料配制见阿奇霉素片含量分析方法线性 验证项下。1.6.2溶液配制1.6.2.1供试品溶液：取阿奇霉素片（XXXX生产）10片，研细， 精密称取样品适量（约相当于阿奇霉素0.1g ）置100mI量瓶中，加 乙腈溶解并定量稀释制成每1ml中约含阿奇霉素1mg的溶液，滤过， 取续滤液作为供试品溶液；1.6.2.2精密称取阿奇霉素对照品（约25mg）,置25mI量瓶中，乙腈 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。1.6.2.3空白溶液：取乙腈作为空白溶液。1.6.2.4 阴性溶液：按照阿奇霉素片配方，加入处方量混合辅料 60.2mg，置100ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过（0.
15、45um微孔滤膜），滤过,续滤液，作为阴性溶液。1.6.3测定精密量取经微孔滤膜过滤后的供试品溶液、对照品溶液、空白溶 液、阴性溶液各501,注入液相色谱仪，每个样品进样2次，记录 色谱图。1.6.4判定标准：阿奇霉素对照品溶液与样品溶液主峰保留时间一致, 空白溶液与阴性溶液在主峰保留时间处应为平直基线,无吸收峰。1.7阿奇霉素片含量分析方法耐用性验证1.7.1改变流动相比例1.7.1.1色谱条件 固定相：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（C ）； 检测器：紫外检测器，检测波长210nm； 18 流动相：磷酸盐缓冲液（0.05moI/L磷酸氢二钾溶液，用20% 磷酸溶液调节PH值至8.2） -乙腈二（40： 60） 流速：1.0mL/m in。 柱温：30C 进样量：50L。照高效液相色谱法（通则0512）测定。1.7.1.2系统适用性试验溶液：取阿奇霉素系统适用性对照品约20mg 加乙腈2ml溶解，制成每1ml中含10mg的溶液，作为系统适用性试 验溶液。1.7.1.3取系统适用性试验溶液50L注入液相色谱仪
