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1、2022届衡水中学高考生物一轮复习课后夯实检测微生物的培养和应用(能力达标检测时间：40分钟)1(2021年河北省高三期末)配制培养基时可根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求，加入某些物质或除去某些营养物质以抑制其他微生物的生长，也可以根据某些微生物对一些物理、化学因素的抗性，在培养基中加入某种化学物质，从而筛选出待定的微生物，这种培养基叫作选择培养基。根据有关内容回答以下问题：(1)制备牛肉膏蛋白胨培养基的一般步骤是计算、称量、溶化、_、_。(2)某同学在做微生物实验时，不小心把大肠杆菌和酵母菌混合在一起。请你完成分离得到纯度较高的大肠杆菌和酵母菌的实验步骤并回答有关问题：主要步骤：制备两
2、种培养基：一种_的培养基，另一种加青霉素的培养基。分别分成两份，依次标上A、A、B、B备用。培养基应采用_法灭菌。分别向A、B培养基中接种_。接种后，放在恒温箱中培养34天。试说明观察到的培养结果：_。分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌种，接种到A、B培养基中。接种后，把A、B培养基放入恒温箱中培养34天。第两个步骤的目的是_。解题分析(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。(2)青霉素不影响酵母菌的生长繁殖，但会抑制大肠杆菌的生长繁殖，大肠杆菌的代谢产物能与伊红美蓝发生特定的颜色反应，使菌落呈黑色，所以一种培养基加入伊红美蓝，一种培养基加入青霉素。
3、对培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌。分别向A、B培养基中接种混合菌。接种后培养的结果：伊红美蓝培养基上的黑色菌落是大肠杆菌，加青霉素的培养基上生长的菌落是酵母菌。分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌种，接种到A、B培养基中培养，目的是获得纯度较高的大肠杆菌和酵母菌。参考答案(1)灭菌倒平板(2)加入伊红美蓝高压蒸汽灭菌混合菌伊红美蓝培养基上的黑色菌落是大肠杆菌，加青霉素的培养基上生长的菌落是酵母菌获得纯度较高的大肠杆菌和酵母菌2“采集菌样富集培养纯种分离性能测定”是从自然界筛选嗜盐菌的一般步骤。 回答下列问题。(1)培养嗜盐菌的菌样应从高盐环境采集，理由是_。(2)富集培养所用培养基为选
4、择培养基。 对嗜盐产淀粉酶微生物的富集培养时，所用培养基在组成成分上的特殊之处在于_。 在富集培养过程中，需将锥形瓶放在摇床上振荡，目的是_(答出1点即可)。(3)纯种分离嗜盐菌时，常用的两种接种方法有_，后者的效果图如图甲所示。 甲乙(4)采用图甲和图乙所示的固体平板培养嗜盐菌时，平板要倒置培养。这样处理的目的是_。(5)利用图甲所示接种方法统计采集菌样中微生物数量，为了使统计结果较为准确，随机预留一部分空白培养基的用途是_；统计接种的培养基中单菌落数时，每天统计的结果可能不同，应以_为准。解题分析(1)嗜盐菌喜好生活在高盐的环境中，因此培养嗜盐菌的菌样，应从高盐环境采集。(2)对嗜盐产淀粉
5、酶微生物的富集培养应选择以淀粉为唯一碳源的培养基，并在高盐条件下培养。在富集培养过程中，将锥形瓶放在摇床上振荡，除了使菌株与培养液充分接触以提高营养物质的利用率外，还能增加培养液中的溶氧量，以保证微生物对氧的需求。(3)纯种分离嗜盐菌时，常用的两种接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。(4)采用固体平板培养细菌时，为了防止平板冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基(或避免培养基中水分的过快挥发)，需要倒置培养。(5)利用稀释涂布平板法统计采集菌样中微生物数量，为检测培养基灭菌是否合格，应随机预留一部分空白培养基。统计接种的培养基中单菌落数时，每天统计的结果可能不同，应以每个平板上菌落数不变时
6、的平均值为准。参考答案(1)嗜盐菌喜好生活在高盐的环境(2)淀粉是唯一碳源，盐含量较高使菌株与培养液充分接触，提高营养物质的利用率；增加培养液中的溶氧量，以保证微生物对氧的需求(答出任意1点即可)(3)平板划线法和稀释涂布平板法(4)防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基(或避免培养基中水分的过快挥发)(5)检测培养基灭菌是否合格每个平板上菌落数不变时的平均值3(2021年安徽省定远重点中学高三模拟)聚对苯二甲酸乙二酯(PET)是塑料类水瓶的重要原料，科学家发现了以PET为碳源和能量来源的细菌，该发现对PET类材料的回收利用、环境治理意义重大。请回答下列问题：(1)实验小组欲从土壤中获取
7、PET降解菌，需将土壤样品置于以_为唯一碳源的培养基中进行选择培养，其目的是_。(2)该实验小组选取PET浓度为800 mgL1的富集液进行系列稀释，分别取103、104和105倍数的稀释液0.1 mL涂布于培养基上，每个稀释倍数涂布三个平板，各平板的菌落数分别为(286、298、297)，(35、32、31)，(36、7、2)，不适合用于计数的为_倍数的稀释液，用另外两组稀释倍数的稀释液进行计数得到的细菌数不一致的原因可能是_。(3)倒平板时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，目的是_。在倒平板的过程中，如果培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，则这个平板不能用来培养大肠杆菌，原因是_。用平板划线法纯化PE
8、T降解菌的过程中，在第二次及其后的划线操作时，须从上一次划线的末端开始划线，原因是_。(4)在保藏PET降解菌菌种时，可采取_的方法进行长期保存。解题分析(1)欲从土壤中获取PET降解菌，需将土壤样品置于以PET为唯一碳源的培养基中进行选择培养，其目的是增加PET降解菌的浓度，以确保能分离得到目的菌。(2)为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数，据此结合题意可知：不适合用于计数的为105倍数的稀释液。用另外两组稀释倍数的稀释液进行计数，得到的细菌数不一致的原因可能是稀释倍数为103时，更多的菌落连在一起最终形成单菌落，导致结果小于稀释倍数为104组的结果。(3)倒平板时应使
9、锥形瓶的瓶口通过火焰，其目的是灭菌，防止微生物污染。在倒平板的过程中，如果培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此这个平板不能用来培养大肠杆菌。用平板划线法纯化PET降解菌的过程中，为使细菌数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而成的菌落，在第二次及其后的划线操作时，须从上一次划线的末端开始划线。(4)对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。参考答案(1)PET增加PET降解菌的浓度，以确保能分离得到目的菌(2) 105稀释倍数为103时，更多的菌落连在一起最终形成单菌落，导致结果小于稀释倍数为104组的结果(3)灭菌，防
10、止微生物污染空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生使细菌数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而成的菌落(4)甘油管藏4我国饮用水卫生标准规定每毫升水样中细菌总数不得大于100个，大肠杆菌不得检出。某兴趣小组为测定本地自来水中的细菌总数和是否有大肠杆菌，进行了如下实验：分别配制营养琼脂培养基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、H2O)和伊红美蓝培养基(成分：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红、美蓝、H2O)，灭菌。取水样。 先测定甲项指标：用灭菌吸管吸取1 mL水样，涂布到营养琼脂培养基中；置于37 培养24 h后进行菌落计数。另设一个不加水样的空白对照组。用滤
11、膜法测定乙项指标，装置和操作如图。回答下列问题：(1)步骤取水样前应先将自来水龙头用火焰灼烧3 min，目的是_。(2)步骤测定的指标甲是_。水样涂布前无需稀释，理由是_。(3)步骤测定乙项指标，主要观察滤膜上是否会出现_色菌落。配制伊红美蓝培养基时，先用蛋白胨、NaCl、琼脂配制基础培养基，在100 kPa、121 条件下灭菌后，冷却至60 左右，再加入经70 kPa、115 条件下灭菌的乳糖、伊红、美蓝水溶液，后者灭菌条件不同的原因是_。(4)兴趣小组认为合格的自来水中细菌数量很少，担心检测不到，因而将取得的水样先加入无琼脂的营养培养液中培养一段时间后，再稀释涂布平板计数。这样操作获得的数
12、据_(填“可信”或“不可信”)，理由是_。解题分析(1)实验过程要进行严格的灭菌，水龙头用火焰灼烧3 min，目的是灭菌。(2)实验过程首先要测定细菌的总数，再测定大肠杆菌数，因为自来水中细菌数量很少，所以水样涂布前无需稀释。(3)指标乙是大肠杆菌，大肠杆菌在伊红美蓝培养基上会呈现紫黑色并带有金属光泽的菌落。后者灭菌条件比前者所需要的温度及压强都低，是因为后者操作过程加入了乳糖，溶液中的乳糖高温下会被破坏。(4)若将水样先加入无琼脂的营养培养液中培养一段时间后，则原有水样中的细菌就会在培养液中繁殖，稀释涂布平板计数得到的数量不能真实反映水样中原有的数量，因此这样操作获得的数据是不可信的。参考答案 (1)灭菌(2)细菌总数自来水中细菌数量很少(3)紫黑溶液中的乳糖在高温下会被破坏(4)不可信细菌会在营养培养液中大量繁殖，实验中获得的细菌数量不能真实地反映水样中原有的数量5(2021年湖北省高三调研)某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A。研
