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1、吉林省高等教育自学考试生物制药专业毕业设计设计项目：无花果多糖提取技术研究完成时间： 年 月设计作者： 准考证号：工作单位： 联系电话：吉林大学生命科学院印制摘要本文以无花果取汁后的残渣为原料，探讨浸提次数、时间、料液比和温度对多糖得率的影响，在单因素试验的基础上，通过正交试验确定最佳提取工艺条件。结果表明：在试验范围内，最佳提取温度为100，在此温度下提取次数对多糖提取率影响最大，其次为料液比，提取时间的影响最小。无花果多糖提取的最优条件为提取温度100，料液比1：12，浸提2次，每次浸提3h，其水溶性多糖提取率达8.52。关键词：无花果；多糖；提取目录前言4材料和方法5结果与分析8结论与讨
2、论13参考文献14致谢15前言无花果是一种桑科榕属植物无花果（Ficus caricaL）的干燥花托，具有广泛的营养价值和药用价值，不但香甜可口，而且具有润肺止咳、健胃清肠、消肿解毒、增强机体免疫功能、抑制多种肿瘤的功效，近年来无花果抗肿瘤特性尤其受到人们的重视1。目前国内外在无花果抗癌方面的研究十分活跃。 无花果多糖是无花果的重要的功能因子，戴伟娟等（2002）研究发现，无花果多糖不仅对正常小鼠的免疫功能有增强作用，而且对荷瘤小鼠的免疫功能抑制状态有恢复作用，推测无花果多糖的抗瘤机制可能与激活机体免疫系统有关。无花果残渣是无花果取汁后的下脚料，其中含有丰富多糖成分，现在常被废弃于环境中。目前
3、对适合工业化生产的无花果多糖提取技术研究不多，以无花果残渣为原料提取无花果多糖更未见报道。本文在充分调查的基础上，针对我国无花果加工企业对无花果残渣利用现状，研究了无花果残渣中多糖的提取技术，为无花果综合加工、延长农业产业链和保护环境提供依据。1材料与方法1.1试验材料、试剂与设备试验材料无花果残渣 江苏省丰县中研无花果有限责任公司试剂正丁醇，三氯甲烷，95乙醇，三氯乙酸。以上试剂均为分析纯试剂 设备HH恒温水浴锅 江苏中大仪器厂；GFB高速万能粉碎机 北京长风仪器仪表公司；RE52A旋转蒸发器 上海亚荣生化仪器厂；LD5 2A医用离心机心机 北京医用设备公司；快混匀器 中外合资深圳天南海北公
4、司；冷冻干燥器，DTS 050型真空冷冻干燥实验机。1.2方法1.2.1提取工艺无花果残渣超临界CO2去脂热水浸提除蛋白浓缩乙醇沉淀去色冷冻干燥无花果多糖1.2.2试验方法1.2.2.1去脂对多糖提取率的影响取20g无花果残渣和20g无花果残渣超临界CO2萃取后的萃取物在干燥皿中贮放3d后，取出，分别加18倍的双蒸水，在沸水浴中提取2h，离心，沉淀再用双蒸水浸泡并离心一次，合并两次上清液，定容至250ml测定多糖含量。1.2.2.2温度对多糖提取率的影响分别秤取无花果残渣粉20g，加18倍水，浸提时间6h，提取1次，研究在不同提取温度（20、40、60、80、100）下多糖的得率。1.2.2.
5、3提取时间对提取率的影响秤取无花果残渣粉20g，加水900ml，提取温度100，提取1次，研究在不同提取时间（10、30、60、90、120、180、210、270min）时多糖的得率。1.2.2.4加水倍数对提取率的影响分别称取无花果残渣粉20g，在提取温度100，提取时间120min时，研究不同加水倍数（3、9、12、15、18和100倍）时多糖提取率。1.2.2.5提取次数对提取率的影响分别称取无花果残渣粉20g，在提取温度100，提取时间3h，加水倍数为12倍时，研究不同提取次数（1，2，3，4，5次）对多糖提取率的影响。1.2.2.6正交试验根据单因素试验的结果，确定正交试验的因素水
6、平，研究无花果多糖的最优提取工艺。1.2.2.7除蛋白方法的确定比较两种除蛋白方法（Sevage法，三氯醋酸法）对无花果提取液中蛋白质去除效果。Sevage法是在多糖提取液中加入氯仿：戊醇（或正丁醇）5：1的混合溶剂，混合物剧烈振摇2030min，蛋白质与氯仿戊醇（或正丁醇）生成凝胶物，离心，分去水层和溶剂曾交界处的变性蛋向质。二氯醋酸法是在冰浴中搅拌的情况下缓缓于提取液中加入1530二氯醋酸，直至溶液不再继续浑浊。在低漏下（4）放置4h。离心除去沉淀即得无蛋白质的多糖提取液。1.2.2.8多糖测定方法 硫酸一苯酚法5。2结果与分析2.1去脂对多糖提取率的影响许多多糖是胞内多糖，常常被脂肪包裹
7、，因此去脂肪往往可以提高多糖的提取率。去脂对无花果多糖提取率影响的试验结果如表1所示。表1去脂对多糖提取率的影响原料处理方法多糖提取率（%）未去脂7.80去脂8.41从表1可以看出，去脂处理明显提高了多糖的提取率，而且无花果脂肪还有很好的保健功能，可以加工成其他的保健食品。2.2温度对多糖题取率的影响温度是影响多糖提取的关键因素之一。随着温度的升高，一方面组织中的多糖向提取液中的传质速率增加；另一方面多糖的黏度降低，有利于组织中的多糖浸出。但是温度太高，会导致多糖降解甚至失活。不同温度对无花果残渣中多糖的影响如图1所示。图1温度对无花果糖提取率的影响由图1可以看出，在试验温度范围内，随着温度的
8、升高，多糖的提取率也随着升高。本试验一方面由于条件的限制，另一方面考虑到实际生产中的成本，没有研究100以上温度时多糖的提取率。因此在正交试验时，确定提取温度恒定为100。2.3提取时间对提取率的影响提取时间是影响多糖提取率的重要因素，图2是提取时间对提取率的影响。图2提取时间对无花果糖提取率的影响从上图可以看出，无花果多糖提取率随着提取时间的延长而增大，当提取时间为180min时，达到最大值8.41，随后又有所下降，分析可能是无花果多糖长时间在高温下降解造成的。并由此确定正交试验时提取时间120、150、180min；当提取时间为10min，无花果多糖的提取率可以达到5.36，占全部多糖的6
9、3.7（5.36%8.4163.7），提示无花果多糖大部分是细胞外多糖，比较容易提取。2.4加水倍数对无花果多糖提取率的影响加水倍数对无花果多糖提取率的影响如表2所示，加水倍数越大，多糖提取率才越大。加水倍数为18倍和100倍时的多糖提取率相差不大，所以加水倍数最好选择小于18倍，正交试验时加水倍数选择12、15、18倍。表2 加水倍数对无花果多糖提取率的影响加水倍数（倍）369121518100多糖提取率（%）5.367.228.108.238.298.400.8442.5提取次数对无花果多糖提取率的影响第一次提取的多糖最多，随者次数的增加，每次提取的多糖量越来越少，第四次仅为总多糖量的06
10、0，所以提取次数应小于3次，则正交试验时提取次数可以选择1、2、3次。表3提取次数对无花果多糖提取率的影响提取次数1234多糖提取率（%）7.310.830.110.05提取比例（%）88.0710.001.330.606正交试验从前面的单因素试验可以得到，在提取温度为100时，无花果多糖提取正交试验的单素水平表（见表4），无花果多糖提取的正交试验结果如表5所示。表4无花果多糖提取正交试验的因素水平表因素水平提取时间（min）120150180提取次数（次）123加水倍数（倍）91215表5 正交试验结果表试验号A（提取时间）B（提取次数）C（加水倍数）多糖提取率（%）11(120)1(1)1
11、(9)6.7421(120)2(2)2(12)8.1331(120)3(3)3(15)8.5642(150)1(1)2(12)7.2652(150)2(2)3(15)8.3862(150)3(3)1(9)8.2573(180)1(1)3(15)7.5983(180)2(2)1(9)7.9193(180)3(3)2(12)8.34K123.4321.5922.9K223.8924.4223.73K323.8425.1524.53k17.817.197.63k27.968.147.91k37.958.388.18R0.1371.190.54主次因素B,C,A优组合A2B3C3从表5可以看出，提取次
12、数对多糖的提取率影响最大，料液比的影响次之，浸提时间的影响最小；当提取温度为100时，最佳的提取工艺为：提取时间150min，加水15倍，浸提3次，即正交试验中的组合3，多糖提取率为8.56。进一步对正交表进行分析，发现在试验范围内，提取时间的极差较小，仅为0.137，提取2次和提取3次之间的极差只有0.143，从节约提取成本的方面考虑，实际生产可以采用的提取工艺条件为：提取温度100时，提取时间120min，加水15倍，提取2次。按照正交试验结果进行验证试验（表6），在最佳的试验条件下，即提取温度100时，提取时间120min，加水15倍，提取2次。多糖平均提取率为8.52。表6 验证试验次
13、数123多糖提取率8.488.528.55平均=8.522.7 除蛋白方法的确定Sevage法在避免降解上有较好效果，但效率不高，通常需要重复68次才能较彻底的除去蛋白质，有机溶剂浪费大。该法效率较高，一般需要2次即可完全除去提取液中的蛋白质。所以二氯醋酸法除蛋白的效果较好。3 结论与讨论3.1无花果残渣中多糖的提取工艺条件为：提取温度100，料液比1:12，浸提2次，每次浸提3h，其水溶性多糖提取率达8.52。3.2 在提取多糖以前，首先对原料脱脂，可以明显的提高多糖的提取率。3.3三氯醋酸法较Sevag法效率高，节约有机溶剂，除蛋白的效呆较好。3.4本试验是以干燥后的无花果残渣为原料的，如果以无花果鲜果、果干或未经干燥的残渣为原料，应当重新确定提取工艺。3.5 在提取多糖后还剩余大量的残渣，可以作为：饲料、食用菌的培养基或者从中提取膳食纤维，这些工作有待进一步进行。参考文献：1汪开治.功能食品无花果J.植物杂志，2002，（l）：1213.2戴伟娟，司端运，王绍红，等.无花果多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用J.中国中医药信息杂志
