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1、花椒多酚类化合物抗自由基抗氧化损伤的研究【摘要】目的观察花椒多酚类化合物总提取物ZPP对活性氧自由基H、2和肝脂质过氧化损伤的作用。方法分别利用化学发光法、体外肝匀浆温育Fe2+和H22诱导及l4肝损伤实验讨论ZPP对H和2的去除作用及检测肝和血浆中超氧化物歧化酶SD活性以及脂质过氧化物丙二醛DA含量。结果ZPP能有效地去除活性氧自由基；口服低剂量ZPP能显著降低l4中毒小鼠血浆DA，进步SD活性。结论适量ZPP具有抗活性氧自由基和脂质过氧化的作用。【关键词】花椒多酚类化合物自由基抗氧化损伤Abstrat：bjetiveTstudytheeffetsfpryanidinsextratfrZan
2、thxylubungeanuaxi.(ZPP)nativexygenradialsandlipidperxidatin.ethds(1)ThesavengingeffetsfZPPnH,and2ereinvestigatedbyheiluineseneethd;(2)Thententsfalndialdehyde(DA)inliverhgenatesinubatedithFe2+andH22invitrasdeterined;(3)Theieeretreatedithasingleintragastrifeedingf5%l4syabeanilslutin(10l/kgb)afterseven
3、dayssuppleentatinfZPP200,400,800g/(kgbd).Theativityfsuperxidedisutase(SD)andthententfDAinliverandplasafl4txiieeredeterined.ResultsInvitr,ZPP388.9g/Land431.22g/LhasarkedativitynHinFentnsystesand2.prduedinxanthine/xanthinexidaserespetively,anduldsignifiantlydereasethententsfliverDA.Inviv,ZPP200，400g/(
4、kgbd)evidentlyreduedthententfDAandinreasedtheativityfSD.nlusinItsuggeststhatZPPaybeusedasanantixidantandighteffetivelyprtetliverfrtheinjuryduetlipidperxidatin.Keyrds：Zanthxylubungeanuaxi.;Plyphenls;Freeradials花椒为芸香科植物青椒ZanthxylushinifliuSieb.EtZu.或花椒Zanthxylubungeanuaxi.的枯燥成熟果皮，味辛,性温,小毒，具有“温中止痛，驱虫，外
5、用燥湿，杀虫止痒的成效1，其主要化学成分有生物碱、酰胺、木脂素、香豆素、挥发油和脂肪酸等，而花椒多酚类化合物的相关研究报道较少。多酚类化合物是广泛存在于植物界的一类具有多种生理功能的活性物质,它不仅具有很强的去除自由基才能,还可以通过抑制氧化酶和络合过渡金属离子等方式起到抗氧化作用。本文以四川汉源花椒为研究对象，研究花椒总多酚类化合物的抗氧化活性，旨在充分挖掘利用该资源。1材料1.1动物SD大鼠，雄性180200g；昆明种小鼠，雄性1820g，成都中医药大学实验动物中心提供。1.2样品制备花椒购自四川九襄。粉碎，丙酮-水溶液(73)浸提，减压除去浸提液中丙酮，然后过滤残留水液，将滤液经醋酸乙酯
6、萃取别离，脱水枯燥，得到花椒多酚类化合物总粗提取物ZPP,得率为0.033%。ZPP为黄棕色粉末，实验前用生理盐水配成所需浓度。1.3药品黄嘌呤、黄嘌呤氧化酶、3-氨基邻苯二甲酰肼购于Siga公司,其余化学试剂均为AR级。超氧化物歧化酶SD、脂质过氧化产物DA测试盒：南京建成生物工程研究所提供。2方法2.1总酚含量的测定采用Flin-ialteu法测定。准确汲取100l的提取物,参加200l稀释1倍的酚试剂,混匀,再参加102lNa23溶液,用蒸馏水定容至5l,摇匀,室温避光反响40in，4000r/in离心10in.,上清液在760n处测吸光度。结果以100g提取物中含有相当没食子酸的克数表
7、示。2.2羟基自由基(H)的产生和去除汲取一定量的ZPP溶液,50l60l/L2-脱氧核糖,100l1l/LEDTA-Fel3,100l1l/LV和100l1l/LH22,用200l/LpH7.4磷酸盐缓冲溶液定容至1l,置于37水浴锅中反响1h,取出后分别加10三氯乙酸溶液和1硫代巴比妥酸,在80水浴中反响15in,冷却后在532n下测定其吸光度。羟基自由基去除率(%)=1A样品/A对照100A样品:样品管的吸光值；A对照:对照管的吸光值2.3超氧阴离子(2)的产生和去除用黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系产生2,然后参加Luinl试剂2和样品,在DD-1型发光测试仪上测试反响1in时的发光值，以蒸馏
8、水为空白对照。2.4体外给药对大鼠肝匀浆DA含量的测定参照文献方法3，每支试管加10%大鼠肝匀浆0.2l，给药组每管分别加不同浓度的ZPP，使其终浓度分别为：4，8，16g/L，对照组加等体积生理盐水，分别加诱导试液FeS4(5l/L)0.1l，H22(10l/L)0.1l，空白对照组加0.1l生理盐水，37%温育24h，置冰水中冷却后TBA比色法4测DA含量。2.5急性肝损伤实验昆明种小鼠50只，随机分为5组：正常对照组、l4中毒组、ZPP3个不同剂量组每组小鼠分别灌胃200，400，800g/kgd。对照组给等体积生理盐水，连续7d。末次灌胃后24h，除正常对照组给等体积豆油外，其余各组一
9、次灌胃5%l4油溶液10l/kg体重，灌胃后不久，小鼠逐渐表现出中毒病症：行动缓慢，全身蜷缩懒动，毛发竖立。24h后摘眼球取血，肝素抗凝，然后颈椎脱臼法处死小鼠，摘取肝脏，制成10%匀浆，分别测定DA含量、SD酶活性。2.6数据处理以抑制2的发光强度一半的浓度I50为标准，判断ZPP的有效性和效价；实验数据表示为s，应用SPSS11.0统计软件，采用t检验和方差分析进展统计学处理。3结果3.1ZPP和维生素对H的去除作用结果见表1。羟基自由基已广泛用于测定植物提取物的抗氧化活性领域，羟基自由基是的最强的氧化剂，它比高锰酸钾和重铬酸钾的氧化性还强，具有极强的反响性，寿命极短，在很多缓冲溶液中，只
10、要一产生，就会同缓冲溶液反响。它几乎可以攻击所有的邻近细胞，同细胞中的所有成分发生反响，对人体的危害最大。从表1中可以看出，ZPP的有效半数去除浓度为388.9g/L，与4.1g/L的V的去除才能相当，且在一定浓度(20800g/l)范围内，ZPP随着浓度的增加，其去除Fentn体系羟基中自由基的才能亦增强，呈现出一定的量效关系。表1ZPP对Fentn体系羟基自由基(H)去除作用的影响略转贴于论文联盟.ll.3.2ZPP对2的去除作用结果见表2。表2ZPP对超氧阴离子自由基(2-)的去除作用略生物体内主要的活性氧有超氧阴离子自由基2、过氧化氢H22、羟基自由基H、烷氧基自由基等。超氧阴离子自由
11、基是体内链式反响最早消费的自由基，其可被进一步复原，是线粒体生成有害活性氧的源头，一旦去除了超氧阴离子，便可以从根本上预防体内过多的羟基自由基和其它活性氧自由基，从而到达抗氧化损伤的目的。表2显示，ZPP的有效半数去除浓度为431.22g/L，与0.87g/L的维生素V的去除才能相当，而且ZPP对体系中产生的2的抑制率与ZPP的浓度呈直线正相关，即在一定范围内，随着ZPP浓度的进步，其抑制率增强。3.3体外ZPP对大鼠肝匀浆DA含量的影响结果见表3。肝脏具有丰富的酶性抗氧化剂，而且也是一个具有微粒体和线粒体系统的在正常代谢过程中能产生活性氧自由基的器官。当Fe2+与过氧化氢等活性氧反响生成毒性
12、更大的羟基自由基,引发生物膜发生脂质过氧化反响，即自由基产生和抗氧化才能的平衡被打破时，就有可能发生组织损伤。而抗氧化剂与Fe2+发生络合反响后,降低了介质中Fe2+的有效浓度,从而减轻自由基对生物膜的氧化损伤作用。由表3可见，ZPP对Fe2+和H22诱发的DA值均有显著的抑制作用，且呈剂量依赖性。由于DA含量的上下在一定程度上反映出膜脂质过氧化程度的强弱，提示ZPP可抑制肝细胞膜脂质过氧化，推测其作用机理与ZPP对活性氧自由基的去除作用及其强复原性及螯合金属离子的特性有关。表3体外给药对Fe2+、H22引起大鼠肝匀浆DA生成的影响略与空白对照组比拟，aP0.01；n=103.4ZPP对l4中
13、毒小鼠肝和血浆SD酶活性和DA含量的影响结果见表4。表4ZPP对l4诱导肝损伤小鼠肝脏、血浆SD活性的影响略与正常对照组比拟，aP0.01；与l4模型组比拟bP0.05，P0.01；n=10表5ZPP对l4诱导肝损伤小鼠肝脏、血浆DA生成的影响略与正常对照组比拟，aP0.01；与l4模型组比拟，bP0.05，P0.01作为一种选择性肝脏毒物，l4具用很强的诱导肝脏脂质过氧化作用5，6，由于在体内时对肝亲和力大，通过肝微粒体中的细胞色素P-450代谢激活后生成三氯甲基l3等自由基，诱发肝细胞膜发生脂质过氧化，是导致肝细胞损伤的一个重要因素。表4说明，l4组小鼠肝和血浆SD酶活性比正常对照组显著降
14、低P0.01，而口服ZPP中、低剂量200，400g/kgbd可显著抑制l4引起的小鼠肝和血浆SD酶活性的下降P0.01。但高剂量组800g/kgbd无效；表5结果显示，l4中毒组小鼠肝脏和血浆DA含量显著升高P0.01。口服ZPP能在一定程度上防止l4的损伤，中、低剂量组小鼠肝和血浆DA含量较l4组显著降低P0.01,同样高剂量800g/kg也无效。提示ZPP作为多酚类化合物，在动物体内的抗氧化活性规律与体外抗自由基作用的规律是一致的：在一定浓度范围内，ZPP的抗氧化活性随着浓度的升高而降低。4结论本实验采用体外体外抗氧化实验模型,研究了从花椒中提取出的总多酚类化合物的去除H和2、抗Fe2+
15、和H22诱发抑制脂质体氧化才能和体内抗l4诱导肝脏脂质过氧化才能以评价其抗氧化性。结果说明,从花椒中提取出的总多酚类化合物有较强的复原才能,可以抑制脂质体过氧化,有去除H，2自由基的活性,而且在不同体系中,花椒总多酚类化合物的抗氧化活性与其浓度之间均有一定的量效关系，为进一步研究奠定了基矗【参考文献】1凌智群，魏居国，程宝宏，等.花椒成效的初步考证J.陕西中医学院学报，2022，314：73.2Zhi-QunLing,Bi-JunXie，Er-LingYang.Islatin,haraterizatinandDeterinatinfAntixidativeAtivityfligeriPryanidinsfrtheSeedpdfNelubnuiferaGaertnJ.JurnalfAgriulturalandFdheistry，2022,53(7):2441.3Guldalehetik,Gulzdeirler,NelaKak-Tker,etal.Effetfpretreatentithartihkeextratnarbntetrahlride-induedliverinjuryandxidativestressJ.ExperientalandTxil
