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1、香菇的组织分离和培养一、 实验目的1、 了解食用菌的基础知识。2、 了解、掌握食用菌培养基的配置原理。3、 通过平菇栽培实验，掌握食用菌代料栽培的一般方法。 二、实验原理（食用菌的组织分离法）食用菌的母种一般是采用孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物。利用食用菌子实体内部组织进行分离，是获得母种最简便的方法。三、实验材料1、原种制作实验材料（1）食用菌：香菇。（2）培养基：PDA培养基斜面。（3）仪器或其他用具：75%酒精棉球、接种针记号笔等。2、食用菌的组织离2、食用菌的组织分离（1）试剂：棉籽壳、麸皮、蔗糖、CaCO3（2）仪器或其他用具：平菇菌种、香菇菌种、金针菇菌种、姬菇菌种、茶树菌种
2、、台秤、盆子、聚丙烯塑料袋、颈圈、封口膜、橡皮筋、高压蒸气灭菌锅、pH试纸（pH5.59.0）、记号笔、麻绳等四、 实验步骤1、原种制作实验材料（1）拌料按培养料配方准确称取所需棉籽壳和麸皮放入大盆中用手搅拌混合均匀，将所需的蔗糖和CaCO3溶于水中，然后泼洒在棉籽壳和麸皮上，边加水边搅拌，直至均匀。搅拌好后，焖30分钟，使培养料吸水均匀。（2）侧培养水分培养料搅拌好后，用于抓一把培养料握在手中，攥紧，手指缝中有水印但无水滴滴下，这时的含水量适合，为60%62%，若含水量不足，可再加少量的水，充分搅拌均匀，在检测，直至含水量合适为止。（3）装袋边加边将培养料压实，装至3/4左右，袋口套上颈圈，
3、用木棒在培养料中打一洞，盖上封口膜，用橡皮筋扎紧。（4）灭菌126高压蒸气灭菌90分钟。（5）接种栽培袋冷却到25左右，在超净工作台上用镊子或接种枪夹取所需菌种（1个鸡蛋大小）放入培养料袋的洞中。（6）培养接种后的栽培袋，放入23-25培养室，堆放高度三至四层，空气湿度60%-65%，每周翻堆一次，使上下发菌一致，同时挑出污染的栽培袋丢弃，一般30-40天，菌丝即可长满菌袋。（7）出菇管理（8）采收2、食用菌的组织分离1、整菇插种法（1）选择种菇：选择肥壮菇体作种菇；（2）种菇消毒：取1张菇片，用70%的酒精轻擦表面进行消毒；（3）菇肉接种：将菇片纵向撕开，在每个裂面靠近菇柄与菌盖的交界处取一
4、米粒大小的菇肉组织接于PDA试管斜面上；（4）培养：将试管斜面置于1530下培养；2、贴附法（1）、将接种针在酒精灯上灼烧，然后将接种针迅速插入斜面培养基的中间位置，使产生的水蒸气冷凝到试管壁上，再用接种针勾取香菇小片刚破膜的成熟菌褶，贴附于斜面相对应的试管相对应的试管内壁上，并使试管斜面朝上，平放在培养箱内，1224h后，在试管斜面上就落下许多孢子。2、贴附法（1）、将接种针在酒精灯上灼烧，然后将接种针迅速插入斜面培养基的中间位置，使产生的水蒸气冷凝到试管壁上，再用接种针勾取香菇小片刚破膜的成熟菌褶，贴附于斜面相对应的试管相对应的试管内壁上，并使试管斜面朝上，平放在培养箱内，1224h后，在
5、试管斜面上就落下许多孢子。（2）在无菌条件下，用接种针将贴附在试管壁上的菌褶取出。（3）将试管放入25温箱中培养12周，观察菌丝生长情况，选菌丝纯洁、粗壮、生长旺盛的试管进行保存并作出菇实验。3、悬钩法（1）、在350ml容积的三角瓶内，装入50ml马铃薯葡萄糖琼脂培养基，瓶口处垂挂一根“S”形的铁丝钩，塞上棉塞进行高压蒸汽灭菌，冷却后在将三角瓶放入30培养箱中培养23天，使培养基表面的冷凝水蒸发，备用。（2）将银耳或木耳的新鲜子实体在无菌水中洗涤3次。（3）在无菌室内用灭菌滤纸将耳片上的水吸干，如耳片过大，可用灭菌刀片切去一部分，然后将耳片悬钩在“S”形钩子上，子实体面朝下放入三角瓶内，将耳
6、片离培养基23cm，勿使耳片碰到三角瓶壁，并将三角瓶移到有散射光的地方，在1825下放置1220h，即将有很多孢子散落在培养基表面上。（4）取出耳片，将三角瓶至于2830的恒温箱，待孢子萌发后，将萌发的孢子带着培养基块移入新的试管斜面培养基内，继续进行培养，待长出纯净、洁白的菌丝后即视为分离成功。五、注意事项1、在整个操作过程中都要注意无菌操作，一切用具都要消毒。2、要等刀片冷却后再切取组织块。3、栽培种在培养过程中，应经常检查，污染袋要及时检查出处理掉。经过3040天的培养，菌丝长满袋后即可使用。若菌袋内长出原基，说明菌种已经老化。若有黄、绿、黑等杂色斑点或连成片时，说明菌种已经污染，不可使用。4、菌种的选择：优质菌种是决定栽培产量的主要因素。菌种选择不当会严重影响产量。一般选择外观为白色的菌种。如有其它真菌污染,从菌种外观上可看到其它颜色的菌落。正常的原种和栽培种在生长中和长满时都应色泽鲜亮、上下一致、洁白、而不应灰暗苍白。如果一瓶(袋)菌种,上下色泽不一致,特别是上部灰暗时,应剔除不用。5、优质的栽培材料和良好的栽培环境：原料是提供食用菌发菌和出菇的物质条件。不管利用什么原料,都必须严格掌握质量,其中生料和发酵料尤为重要。基本要求是:原料新鲜、干净、无霉变,没有因潮湿而产生的结块。播种前和栽培管理中后期,必须对栽培场所进行认真的清洁和消毒。、
