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1、实验一 光学显微镜的使用、植物细胞有丝分裂的制片和观察一、目的与要求1、掌握光学显微镜的构造及使用方法。2、掌握植物根尖细胞有丝分裂制片技术。3、掌握有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化。二、实验原理有丝分裂是植物细胞分裂的主要方式，细胞分裂过程中，核内染色体准确地复制，并有规律地、均匀地分配到两个子细胞中去，使子细胞和母细胞的遗传组成一样，保证了植物细胞的遗传性状的一致。各种生长旺盛的植物组织中，如根尖组织、茎尖组织、居间分生组织、愈伤组织等，常进行着剧烈的细胞有丝分裂。在细胞分裂的适当（分裂旺盛期）时候取材，进行预处理，固定、解离、染色和涂抹压片等方法，使细胞、染色体分散，便于在显微镜
2、下观察染色体的形态特征和变化特点及进行染色体计数。三、实验材料洋葱（Allium cepa, 2n=16）根尖组织四、实验仪器显微镜、分析天平、酒精灯、剪刀（或刀片）、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、滤纸、铅笔、标签纸、胶水、棕色瓶。五、实验试剂1、卡诺固定液：冰醋酸:无水酒精=1:3（体积比）2、染色液（改良苯酚品红染液）配法顺序如下：原液A：取3克碱性品红溶于100毫升70%酒精中，此液可以长期保存。原液B：取A液10毫升加入90毫升5%苯酚(即石炭酸)水溶液中(2周内使用)。原液C：取B液55毫升加入6毫升的冰醋酸和6毫升38%的甲醛(可长期保存)。染色液：取C液10-20毫升，加入90-
3、80毫升45%醋酸和1.5克山梨醇。3、1N盐酸六、实验步骤（一）材料准备通过休眠的洋葱鳞茎，经日晒后，置于盛有清水的小烧杯上，根部与水接触，2025光照条件下培养23天，待根长12cm时，于上午9:001:00剪下根尖备用。（二）预处理为了获得较多中期分裂相的细胞，同时使染色体缩短和分散，可对根尖进行预处理，将根尖浸在蒸馏水中于在14低温下处理24小时。（三）固定用蒸馏水洗净材料，再用卡诺固定液（用量应为材料体积的15倍以上）室温下固定3060分钟。固定的材料如暂不制片，可经90酒精80酒精70酒精（各半小时）浸泡进行转换，最后置于70酒精内放入04冰箱，约可保存半年。如保存时间太长，需重新
4、固定后再用。（四）解离根尖、茎尖等体细胞需经处理，除去细胞间的果胶层，并使细胞壁软化，才便于压片。这种处理过程称为解离，解离时间的长短依植物材料和解离液的不同而不同。时间短细胞不易压散，时间过长，细胞被压破，且影响染色效果。取材料的根尖，在生长点处切取1毫米左右（一般一个根尖可取45段），放入1N HCl酸解10分钟左右，取出，用水漂洗三遍。注：1N HCl由36%38%浓盐酸取83ml定容至1升配置而成。（五）制片选取已处理过的根尖一枚，放在干净载玻片中央，除去非分生组织的部分，并吸去多余水分。另取一张干净载玻片，呈十字形交叉盖在有根尖的载玻片上，用大拇指按压在载玻片的中央，使根尖压成一簿层
5、，然后将两载玻片分开，各滴一小滴染色液进行染色，稍等片刻，取一盖玻片，盖玻片一边靠在离材料不远的载玻片上，左手握镊子顶着盖玻片，右手握解剖针托住盖玻片徐徐放下，若染色液不能布满盖玻片时，可在盖玻片边缘稍加染色液，然后用一张大小合适的滤纸覆盖在盖玻片上，一手固定盖玻片，另一手持铅笔橡皮头，对准材料轻敲，使根尖细胞分散均匀。制好的片子若不能及时进行显微镜观察，可用矾士林临时封住盖玻片四周。（六）观察制备好的细胞学片子，置于显微镜的载物台上，先用低倍镜（1010）调焦观察，寻找到具有分裂相的细胞后，再转换到高倍镜（1040）下观察。七、显微镜使用注意事项1取显微镜时必须右手握镜臂，左手托镜座，严禁单
6、手提镜，勿使镜体倾斜，防止目镜从镜简中滑出或碰撞显微镜。2.注意姿势。将显微镜平稳地放在自己左侧的适当地方，镜臂向着自己，镜检者姿势要端正。一般用左眼观察，右眼便于绘图或记录。两眼必须同时睁开，以减少疲劳。3.将镜台向上调节时，须从侧面观察，以防压碎标本玻片或损坏物镜镜头。4一般情况下观察标本均要加盖盖玻片，切忌水、洒精或其它药品浸损镜头或镜台。观察标本时，必须按低倍镜高倍镜的顺序进行。5显微镜各部要保持清洁，光学部分必须用镜头纸擦试，绝对禁止用其它物品擦试。其它部分可用纱布轻轻擦试。6观察、绘图时应双眼同时张开，以便在观察的同时绘图。7. 使用显微镜时一定严格按规程操作，遇到问题，如机件不灵，千万不可用力转动，切忌任意拆修，应立即报告指导教师。8使用完毕要将显微镜擦试干净，恢复原状，转动物镜转换器，将4物镜转到光路上，使镜台调至接近物镜。9关闭光圈、电源，适当下降聚光镜，将塑料罩罩好，及时收回镜箱。八、作业1. 制作细胞有丝分裂各时期图象片子12张。2. 描绘所观察到的细胞有丝分裂过程中各时期的图象，并简要说明染色体的行为特征。
