鲜冻肉的检验程序

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1、、使用标准GB 16869-2005GB 2707-2005GB 4789.1-2010GB 4789.2-2010GB 4789.3-2010GB 4789.17-2003鲜冻肉的检验程序编号：一、检验产品鲜冻猪肉、牛肉、兔肉、鹅肉、鸭肉、鸡肉鲜、冻禽产品 鲜（冻）畜肉卫生标准 食品微生物学检验 总则 食品微生物学检验 菌落总数测定 食品微生物学检验 大肠菌群计数 食品卫生微生物学检验 肉与肉制品检验GB/T 5009.17-2003食品中总汞的测定方法GB/T 5009.44-2003肉与肉制品卫生标准的分析方法三、检验流程四、样品的采取1、现场采样用品1.1、采样箱。1.2、带盖搪瓷盘。

2、1.3、温度计。1.4、编号牌或蜡笔、纸。2、生肉及脏器检样：如系屠宰场宰后的畜肉，可于开腔后，用无菌刀采取两腿内侧肌肉150克（或 劈半后采取两侧背最长肌各150克）；如系冷藏或售卖之生肉，可用无菌刀取腿 肉或其他部位之肌肉250克。检样采取后，放入灭菌容器内，立即送检；如条件 不许可时，最好不超过3小时，送检样时应注意冷藏，不得加人任何防腐剂。检 样送往化检验室应立即检验或放置冰箱暂存。3. 禽类（包括家禽和野禽）：鲜、冻家禽采取整只，放灭菌容器内。带毛野禽可放清洁容器内，立即送检。以下处理同2。五、菌落总数测定： GB/T 4789.2-20101、原理：食品检样经过处理，在一定条件下（

3、如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g （mL）检样中形成的微生物菌落总数。2. 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2.1、恒温培养箱：36 C1 C, 30 C1 C。2.2、冰箱：2 C5 C。2.3、恒温水浴箱：46 C1 C。2.4、天平：感量为0.1 g。2.5、均质器。2.6、无菌吸管：1 mL （具0.01 mL刻度）、10 mL （具0.1 mL刻度）或微量移 液器及吸头。2.7、无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。2.8、无菌培养皿：直径90 mm。2.9、PH计或pH比色管或精密pH试纸。2.10、放大镜或/和菌落计数器。

4、3、培养基和试剂3.1、平板计数琼脂培养基：3.1.1、成分：胰蛋白胨5.0g；酵母浸膏2.5g；葡萄糖1.0g；琼脂15.0g；蒸馏水1000 mL；pH 7.00.2。3.1.2制法：将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH,分装试管或锥形瓶，121C 高压灭菌15min。3.2、磷酸盐缓冲液3.2.1、成分：磷酸二氢钾（KHPO ） 34.0g；蒸馏水500mL； pH 7.2。243.2.3、制法：贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175 mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液:取贮存液1.25mL,用蒸馏

5、水稀释至1000mL,分装于适宜容器中，121C 高压灭菌15min。3.3、无菌生理盐水3.3.1、成分：氯化钠8.5g ；蒸馏水lOOOmL3.3.2、制法“称取8.5 g氯化钠溶于lOOOmL蒸馏水中，121C高压灭菌15 min。4、检验程序：茵韶总豊的检验程序见图lu有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试 管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。5.1.3、按5.1.2操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换 用1次1mL无菌吸管或吸头。5.1.4、根据对样品污染状况的估计，选择2个3个适宜稀释度的样品匀液

6、（液 体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内， 每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作 空白对照。5.1.5、及时将15mL20mL冷却至46C的平板计数琼脂培养基（可放置于46C 1C恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。5.2、培养5.2.1、待琼脂凝固后，将平板翻转，36C1C培养48h2h。水产品30ClC 培养72 h3 h。5.2.2、如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后 的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按5.2.1条件 进行培养。5.3、菌落计

7、数： 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落 数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units, CFU）表示。5.3.1、选取菌落数在30CFU300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总 数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300 CFU的可记录为多不可计。每 个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。5.3.2、其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落 生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中 菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。5.3.3、当平板上

8、出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个 菌落计数。6、结果与报告6.1、菌落总数的计算方法。6.1.1、若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌 落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g （mL）样品中菌落总数 结果。6.1.2、若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计 算：式中：N样品中菌落数；C平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和; n1第一稀释度（低稀释倍数）平板个数； n2第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d稀释因子（第一稀释度）。示菱:1：100 （第一稀释度）：QQQ第二驾释度）茵落掘（CFU）232, 2

9、-33, 35I +0 In,)d232 +244 +33 + 35544=宀“=2斗 7272 十(O.lx2)xlO-20.022上述鳖锯按工22越字修釣后.表示肯2萸仙或2.春厅6.1.3、若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU，则对稀释度最高的平板进 行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。6.1.4、若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落 数乘以稀释倍数计算。6.1.5、若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1 乘 以最低稀释倍数计算。6.1.6、若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU300CF

10、U之间，其中一部分小 于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释 倍数计算。6.2 菌落总数的报告6.2.1、菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。6.2.2、菌落数大于或等于100CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后, 取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入” 原则修约后，采用两位有效数字。6.2.3、若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。6.2.4、若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。6.2.5、称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报

11、告。7、报告稀释度1:1001:10001:10000CFU/g平均值第一个样品第二个样品六、大肠菌群GB 4789.3-2010大肠菌群MPN计数法1、原理：在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽 胞杆菌。最可能数，MPN基于泊松分布的一种间接计数方法。2、设备和材料：除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2.1、恒温培养箱：36C1 C。2.2、冰箱：2C5C。2.3、恒温水浴箱：46C1C。2.4、天平：感量0.1g。2.5、均质器。2.6、 无菌吸管：1 mL （具0.01 mL刻度）、10 mL （具0.1 mL刻度）或微量移 液器及吸头

12、。2.7、无菌锥形瓶：容量500 mL。2.8、pH计或pH比色管或精密pH试纸。3、培养基和试剂3.1、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤3.1.1、成分胰蛋白胨或胰酪胨20.0g；氯化钠5.0g；乳糖5.0g；磷酸氢二钾（KHPO）2.7524g；磷酸二氢钾（KHPO）2.75g；月桂基硫酸钠0.1g；蒸馏水1000mL； pH6.80.2；243.1.2、制法：将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管 10mL。121C 高压灭菌 15min。3.2、煌绿乳糖胆盐肉汤“3.2.1、成分：蛋白胨10.0g；乳糖10.0g；牛胆粉（oxgall或oxbile）溶液200mL

13、； 0.1%煌 绿水溶液 13.3mL ；蒸馏水800mL；pH 7.20.1；3.2.2、制法：将蛋白胨、乳糖溶于约500mL蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200mL （将20.0g脱 水牛胆粉溶于200mL蒸馏水中，调节pH至7. 07.5），用蒸馏水稀释到975mL，调 节pH,再加入0.1%煌绿水溶液13.3mL，用蒸馏水补足到1000mL，用棉花过滤后， 分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。121C高压灭菌15min。3.3、磷酸盐缓冲液：3.3.1、成分：磷酸二氢钾（KHPO）34.0g；蒸馏水500mL； pH 7.2。243.3.2、制法：贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于

14、500mL蒸馏水中，用大约175mL的1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液:取贮存液1.25mL,用蒸馏水稀释至1000mL,分装于适宜容器中，121C 高压灭菌15min。3.4、无菌生理盐水:称取8.5 g氯化钠溶于1 000 mL蒸馏水中，121 C高压灭菌15 min。3.5、无菌1 mol/L NaOH：称取40g氢氧化钠溶于1000mL蒸馏水中，121C高压灭菌15min。3.6、无菌1 mol/L HCl：移取浓盐酸90mL，用蒸馏水稀释至1000mL，121C高压灭菌15min。4、检验程序：大肠菌誰MEN计豔的检验程序图I 匀液。5.1.2、样品匀液的pH值应在6.57.5之间，必要时分别用lmol/L NaOH或lmol/L HCl调节。5.1.3、用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入9 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液 面），振摇试管或换用1支1 mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100的 样品匀液。5.1.4、根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释 样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无