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1、基因工程考试题库（便携版）片段。T-DNA区： 即转移 DNA，能转移并整合在植物细胞核基因组上的、决名词解释定植物形成冠瘿瘤的一段DNA。LTS 和 RTS对于 T-DNA的转移和整合是不可缺少的。同裂酶（同切点酶） ：有一些来源不同的限制酶识别的是同样的核苷 - 互补 ：指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整酸靶序列，这类酶称为同裂酶。, 它们来源各异，识别的的近操纵基因区段的 - 半乳糖苷酶（ -galactosidase，由 1024同尾酶： 与同裂酶对应的一类限制性内切酶个氨基酸组成）阴性的突变体之间实现互补。靶序列也各不相同 , 但切割后都能产生相同的黏性末端,
2、特称为同尾11. cos序列（ cohesive endsite）： DNA 分子两端各有12 碱基 (5酶。-GGGCGGCGACCT-3 )的单链互补粘性末端，当 噬菌体进入细菌测序酶： 是经修饰过的T7 噬菌体 DNA聚合酶，是采用缺失的方法，细胞后，其 DNA 可迅速按碱基互补配对结合形成双链环状DNA 分从外切核酸酶结构域中除去28 个氨基酸，这样使得T7DNA聚合酶完子。全失去了 3-5 外切酶活性，只有 5-3 聚合酶活性，而且聚合能力COS位点： 当 DNA进入细菌细胞后，便迅速粘性末端配对形成双链很强，测序时常用此酶。与 klenow相比优点是 ：是双脱氧链终止法环状 DNA
3、分子，这种粘性末端结合形成的双链区域叫做COS位点 .对长片段进行测序的理想用酶。13. 端粒重复序列 （ telomeric repeat，TEL ）：定位于染色体末端一段限制性核酸内切酶： 是一类能识别和切割双链DNA分子中特定碱基系序列，用于保护线状的DNA 不被胞内的核酸酶降解，以形成稳定的列的核酸水解酶。结构。限制 - 修饰系统中的限制和修饰作用：限制 - 修饰系统中的限制作用是14. 自主复制序列： 一段特殊的序列，含有酵母菌中DNA进行双向指一定类型的细菌可以通过限制性酶的作用，破坏入侵的外源 DNA(如 复制所必须的信号。噬菌体 DNA等) ，使得外源 DNA对生物细胞的入侵受
4、到限制；而生物22. 多克隆位点： 含有紧密排列的多个限制性内切酶识别位点的一段细胞 ( 如宿主 ) 自身的 DNA分子合成后， 通过修饰酶的作用， 在碱基中DNA 片段。特定的位置上发生了甲基化而得到了修饰，可免遭自身限制性酶的破23、分子杂交： 是指在分子克隆中的一类核酸和蛋白质分析方法，用坏，这就是 限制 - 修饰系统中的修饰作用。于检测混合样品中特定核酸分子或蛋白质分子是否存在及其分子量5. 限制性片段长度多态性 （ RFLP ）：当 DNA 序列的差异发生在限制大小。性内切酶的识别位点时，或当DNA 片段的插入、缺失或重复导致基24、菌落原位杂交： 是将菌落或噬菌斑转到固相膜上，原位
5、裂解细胞因组 DNA 经限制性内切酶酶解后，其片段长度的改变可以经过凝胶后使核酸固定在膜上，然后与探针杂交。用标记的核酸探针，经放射电泳区分，出现的这种DNA 多态性称为限制性片段长度多态性。自显影或非放射检测体系，在组织细胞间期染色体上对核酸进行定位6. 星号活性： 限制性内切核酸酶识别和切割特异性位点是在特定的和相对定量研究的一种手段。条件下测定的。 当条件改变时， 许多酶的识别位点会改变， 导致识别26、真核细胞原位杂交：是一项组织化学与分子杂交相结合的技术，与切割序列的非特异性，这种现象称为星号活性。（“非最适的 ”反应 使探针与固定在载玻片上的细胞组织切片内的变性染色体杂交。条件例如
6、高浓度的核酸内切限制酶、高浓度的甘油、 低离子强度、用27、荧光原位杂交（ fluorescence in situ hybridization ，FISH ）：对寡Mn 2+取代 Mg 2+以及高 pH 值等。 )克服星号活性的方法：维持反应体核苷酸探针做特殊的修饰和标记，后用原位杂交方法与靶染色体或系适当的离子强度、较低的温度或酶浓度，尽可能缩短反应时间或DNA 上特定的序列结合，再通过与荧光素分子相偶联的单克隆抗体DNA 样品的重新处理等。（单个细胞增殖形成的细胞群所产生的抗体）来确定该DNA 序列在7. 载体 (vector): 在基因操作中携带外源基因进入受体细胞的工具。染色体上的位
7、置。克隆载体： 主要用于扩增或保存DNA 片段，是最简单的载体。主要28、凝胶阻滞试验： （gel retardation assay）：又叫 DNA迁移率变有：质粒载体、 噬菌体载体、 黏粒载体、 人工染色体 （YAC 和 BAC ）。 动试验 （ electrophoretic mobility shift assay， EMSA），是用于YAC（酵母人工染色体） ：是利用酿酒酵母的染色体的复制元件构建的体外研究 DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。载体，其工作环境也是在酿酒酵母中。26. 盒式诱变： 就是用一段人工合成具有突变序列的DNA片段，取BAC（细菌人工染色体） ：是
8、基于大肠杆菌（ E.coli）的 F 质粒构建的代野生型基因中的相应序列。这就好象用各种不同的盒式磁带插入收高通量低拷贝的质粒载体。录机中一样，故而称合成的片段为“盒”，这种诱变方式为盒式诱变。表达载体是 可携带外源基因进入宿主细胞进行复制并进行转录、翻译27. 定点诱变（寡核苷酸介导；重叠延伸PCR、大引物PCR）：的载体。（ site-directed mutagenesis）是使已克隆基因或DNA片段中任何病毒表达载体： 是以病毒基因组序列为基础，插入必要的表达元件所一个特定碱基发生取代、插入或缺失突变的过程。构建成的真核基因转移工具。27、体外随机诱变： 指随机的在克隆化 DNA中引入
9、碱基置换突变。T-载体： Taq 酶的末端转移酶活性可在PCR 产物的 3端加上一个不28、探针： 指用于检测特定基因或转录产物存在或表达的DNA、 RNA依赖于模板的 A，根据这一特性，为方便进行PCR 产物的直接克隆或寡核苷酸序列，这些序列在使用之前需标记。而开发出 T-载体。29、DNase I 足迹试验： DNase I 足迹试验是一种鉴别RNA 聚合酶等Ti 质粒（ tumor inducingplasmid ）：是在根癌农杆菌中发现的可决蛋白质在 DNA 上结合位点的方法，它不仅能找到与特异性DNA结定冠瘿病（即可诱发寄主植物产生冠瘿瘤）的质粒。 大小在 200kb 左 合的目标蛋
10、白，而且能告知目标蛋白结合在哪些碱基部位。右。30. 衔接物： 是指人工合成的由1012nt 组成的、具有一个或数个限12. 粘粒载体： 由人工构建的、 大小一般在57kb 左右、含有 DNA制性内切核酸酸识别位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。此方法的 cos 序列和质粒复制子的一类特殊的质粒载体。适用于没有衔接物限制性内切核酸酶酶切位点的外源DNA片段。17.一元载体：含目的 DNA 的中间表达载体与改造后的受体 （Ti 质粒） DNA 接头（人工接头） : 是指人工合成的含有限制酶识别顺序的核苷通过同源重组所产生的一种复合型载体。酸片段。 人工合成的一类具有某种限制性内切酶粘性末端，另一头
11、为18.双元载体： 是指由两个分别含有T-DNA和 vir 区的相容性突变 Ti平末端的双链寡核苷酸片段。质粒构成的系统。31. 接头分子连接法 （ DNA 接头连接法）：将具有平末端的外源 DNA16. 卸甲载体： 将 Ti 质粒上的 T-DNA 的致瘤基因全部去掉，仅保留片段与人工接头分子在T4 DNA 连接酶的作用下连接起来； 然后与具其两边界及与 T-DNA 转移所必需的25bp 序列而构建成的载体。有同样粘性末端的载体DNA 分子在 T4 DNA 连接酶作用下连接成重8. 质粒的相容性 ：是指两种质粒是否可以共存于同一个细胞，如果能 组体。够共存则叫相容又叫亲和。32. 转化（ tr
12、ansformation）：把重组质粒 DNA 导入受体细胞（大肠质粒的不相容性： 两个质粒在同一宿主中不能共存的现象，出现这种杆菌、酵母、动植物细胞等）,使其遗传性状改变的过程。现象的原因主要是它们常常共用同一复制系统。转染（ transfection）: 把重组的噬菌体或病毒导入受体细胞的过程。9. 转移性： 质粒具转移性是指在自然条件下，很多质粒可以通过称相互关系： 转化一词严格地说是指， 感受态的大肠杆菌细胞捕获和表为细菌接合的作用转移到新宿主内。不含tra 基因的质粒则不具备转达质粒载体 DNA分子的生命过程； 而转染一词，则是专指感受态的大移性。肠杆菌细胞捕获和表达噬菌体DNA分子的生命过程。但从本质上讲，T-DNA ：能导入宿主细胞并插入其 DNA中发挥作用的 Ti 质粒部分 DNA 两者并没有什么根本的差别。无论转化还是转染， 其关键的因素都是用氯化钙处理大肠杆菌细胞，以提高膜的通透性，从而使外
