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1、注射用XX有关物质及含量测定方法学验证方案样品：自制 XX 供试品：批号：市售品：进口 XX 批号： 国产 XX 批号：对照品：XX对照品：自制，批号：xxxxxx, XX含量：51.27% 水分：1.34%A 对照品：来源：批号：B 对照品：来源：批号：C 对照品：来源：批号：1、方法验证注射用XX是以XX为原料通过复溶并重新冻干获得，制品期间未加入任何辅料，同时注射用 XX有关物质及含量测定方法与原料测定方法完全一致，因此注射用XX有关物质及含量测定方法 学验证可与XX原料方法学一致，此次方法学验证使用的样品用原料（批号：xxxxxx）代替。2、检测方法含量测定 照高效液相色谱法（中国药典
2、2015年版四部通则0512）测定。色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水相-甲醇-乙腈（800： 160： 16）为流动相；柱温：30C；检测波长为260nm。取对照品溶液作为系统适用性试验溶液，量取 20卩1注入液相色谱仪，各杂质峰之间及主成分峰与相邻杂质峰之间的分离度应符合规定，理论板数 按 XX 峰计算应不低于 3000。测定法 取本品适量，精密称定，加水溶解制成每 1ml 中约含 XX 0.2mg 的溶液，作为供试 品溶液。精密量取供试品溶液20卩1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取XX对照品适量，同法测 定。按外标法以峰面积计算，按无水物计算，含XX阳离子应
3、为50.0%54.0%。有关物质 照高效液相色谱法（中国药典2015年版四部通则0512）测定。取本品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中约含XX 0.5mg的溶液，作为供试品溶液； 另分别取A、B、XX、C对照品适量，精密称定，加水溶解并定量制成每1ml中约含A 2.5卩g、B 2.5卩g、 XX5.0卩g、C 5.0卩g的混合溶液，作为对照品溶液。取对照品溶液20卩1，注入液相色谱仪，出峰顺 序依次为A、B、XX、C,调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%30%；再 精密量取对照品溶液和供试品溶液各20卩1,分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间 的6倍。供试
4、品溶液色谱图中如显杂质峰，按外标法以峰面积计算，A峰面积不得大于对照品溶液 中A的主峰面积（0.5%）, B峰面积不得大于对照品溶液中B的主峰面积（0.5%），C峰面积不得 大于对照品溶液中C的峰面积（1.0%）,其它单个杂质峰面积不得大于对照品溶液中XX主峰面积 的0.1倍（0.1%）,其它杂质峰面积的和不得大于对照品溶液中XX主峰面积的0.5倍（0.5%）。3、方法学验证项目采用自制品（批号：XXXXXX ）按照确定的检测方法进行详细的方法学验证。项目验证要求专属性（1）空白溶剂水应不干扰测定；供试品溶液色谱图中主成分峰与对照品溶液色谱 图中主成分峰保留时间应一致；系统适用性溶液中各成分峰
5、保留时间与其单 独进样的保留时间基本一致，各已知杂质峰之间、主成分峰与相邻杂质峰之 间分离度均应大于2.0，主成分峰理论板数应33000。专属性供试品破坏试验（包括酸破坏试验，碱破坏试验，氧化破坏试验,高温破坏试验，光 照破坏试验）中主成分峰与相邻杂质峰应能完全分离，主成分峰纯度因子应大 于980，物料基本守恒，破坏前后峰面积和基本一致。系统适用性（1） 有关物质方法学配制6份相同浓度的杂质对照品混合溶液（系统适用性试验溶液）进行分析， 各杂质峰峰面积的RSD应2.0%，保留时间的RSD应1.0%，主峰拖尾因子 应不大于2.0，理论板数应33000，各已知杂质峰与相邻峰分离度应32.0。系统适
6、用性（2） 含量测定方法学配制6份相同浓度的0.2mg/ml对照品溶液进行分析，主峰峰面积的RSD应 2.0%，主峰保留时间的RSD应1.0%，主峰拖尾因子应2.0,主峰的理论板 数应33000。线性与范围（1） 有关物质方法学A在定量限-200%限度（定量限-5.0卩g/ml）的浓度范围内配制6份浓度不同的各组分对照品溶液，分 别测定主峰面积，以浓度（C）为横坐标，以相应的 峰面积（A）为纵坐标，进行线性回归分析。B在定量限-200%限度（定量限-5卩g/ml）的浓度范围内配制6份浓度不同的各组分对照品溶液，分别测定 主峰面积，以浓度C）为横坐标，以相应的峰面积（A） 为纵坐标，进行线性回归
7、分析。XX在定量限-200%限度（定量限-10卩g/ml）的浓度范围内配制6份浓度不同的各组分对照品溶液，分别测 定主峰面积，以浓度C）为横坐标，以相应的峰面积 （A）为纵坐标，进行线性回归分析。C在定量限-200%限度（定量限-10卩g/ml）的浓度范围内配制6份浓度不同的各组分对照品溶液，分别测 定主峰面积，以浓度（C）为横坐标，以相应的峰面 积（A）为纵坐标，进行线性回归分析。可接受标准：回归方程的相关系数（R2）应30.990, Y轴截距应在100%响应 值的25%以内，响应因子的RSD应10%。线性与范围（2） 含量测定方法学在50%-300% （0.1mg/ml-0.6mg/ml）
8、的浓度范围内配制5份浓度不同的对照品 溶液，分别测定主峰面积，以浓度（C）为横坐标，以相应的峰面积（A） 为纵坐标，进行线性回归分析。回归方程的相关系数R2）应0.998, Y轴截 距应在100%响应值的2%以内，响应因子的RSD应三2.0%。检测限LOD主峰与噪音峰信号比3时的各已知杂质和主成分对照品溶液浓度（量）定量限LOQ主峰与噪音峰信号比10时的各已知杂质和主成分对照品溶液浓度（量）；配 制6份各已知杂质和主成分定量限浓度溶液，所测6份溶液各已知杂质和主 成分主峰保留时间的RSD应1%，所测6份各已知杂质和主成分溶液主峰面 积的RSD应2%。精密度（1）有关物质方法学包括重复性和中间精
9、密度。重复性：配制6份同一浓度（相当于100%浓度水平）的供试品溶液，由1人 在尽可能相同的条件下进行杂质含量测定，所得6份杂质含量数据的RSD应 2%；中间精密度：配制6份相同浓度供试品溶液，由另一分析人员用另一台仪器 于不同日期进行杂质含量测定，所得12份杂质含量数据的RSD应2%。精密度（2）含量测定方法学包括重复性和中间精密度。重复性：配制6份相同浓度的供试品溶液，由1人在尽可能相同的条件下进 行含量测定，所得6份含量数据的RSD应1%；中间精密度：配制6份相同浓度供试品溶液，由另1人用另一台仪器进行含 量测定，所得12份含量数据的RSD应1%。准确度（1）有关物质方法学分别配制含已知
10、杂质浓度为各自限度浓度50%、100%、150%的供试品溶液各3份，分别测定已知杂质含量，将实测值与理论值比较，计算回收率，各浓度下的平均回收率均应在92%-105%，9个回收率数据的RSD应10%。准确度（2）含量测定方法学分别配制含XX浓度为80%、100%、120%的供试品溶液各3份，分别测定含 量，将实测值与理论值比较，计算回收率，各浓度下的平均回收率均应在 98%-101%，9个回收率数据的RSD应2.0%。耐用性（1）（浓 0.5mg/ml）有关物质方法学溶液稳定性：供试品溶液分别在室温和冰箱冷藏室（4C ）中放置12h，分别在0、4、8、 12h测定杂质含量，各已知杂质含量的绝对
11、值在0.1%以内，并不得出现新的 大于报告限度的杂质视为溶液稳定，否则为不稳定。流速耐用性：供试品溶液在0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min条件下测定杂质含量，各已 知杂质峰的拖尾因子不大于2.0,各已知杂质和相邻峰应达到基线分离，各杂质含量数据的RSD应不大于2.0%，杂质含量与l.Oml/min测定数值相比变化 值在0.1%以内，视为耐用性好，否则为不好。柱温耐用性：供试品溶液在25C、30C、35C条件下测定杂质含量，各已知杂质峰的拖尾 因子不大于2.0,各已知杂质和相邻峰应达到基线分离，杂质含量数据的RSD 应不大于2.0%，杂质含量与30C测定数值相比变化值在0
12、.1%以内，视为耐 用性好，否则为不好。流动相pH值耐用性：供试品溶液在pH值为3.3、3.5、3.7条件下测定杂质含量，各已知杂质峰的 拖尾因子不大于2.0,各已知杂质和相邻峰应达到基线分离，杂质含量数据的 RSD应不大于2.0%，杂质含量与pH3.5测定数值相比变化值在0.1%以内， 视为耐用性好，否则为不好。流动相比例耐用性：供试品溶液在流动相(水相：甲醇：乙腈)比例分别为750： 200： 20； 800： 160： 16； 850： 120： 12条件下测定杂质含量，各已知杂质峰的拖尾因子不大 于2.0,各已知杂质和相邻峰应达到基线分离，杂质含量数据的相对标准偏差 应不大于20%，杂
13、质含量与800： 160： 16测定数值相比变化值在0.1%以内 视为耐用性好，否则为不好。耐用性(2)(浓度0.2mg/ml)含量测定方法学溶液稳定性：供试品溶液分别在室温和冰箱冷藏室(4C)中放置12h，分别在0、4、8、 12h测定含量，与0时比较，各放置时间含量变化的绝对值不大于2.0%，视 为溶液稳定，否则为不稳定。流速耐用性：供试品溶液在0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min条件下测定含量，主峰的拖 尾因子应不大于2.0,主峰与相邻杂质峰应达到基线分离，含量数据的相对标 准偏差应不大于2.0%视为耐用性好，否则为不好。柱温耐用性：供试品溶液在25C、30C、35
14、C条件下测定，主峰的拖尾因子应不大于2.0， 主峰与相邻杂质峰应达到基线分离，含量数据的相对标准偏差应不大于2.0% 视为耐用性好，否则为不好。流动相pH值耐用性：供试品溶液在pH值为3.3、3.5、3.7条件下测定，主峰的拖尾因子应不大于 2.0，主峰与相邻杂质峰应达到基线分离，含量数据的相对标准偏差应不大于2.0%视为耐用性好，否则为不好。流动相比例耐用性：供试品溶液在流动相（水相：甲醇：乙腈）比例分别为750： 200： 20； 800： 160： 16； 850： 120： 12条件下测定，主峰的拖尾因子应不大于2.0，主峰与 相邻杂质峰应达到基线分离，含量数据的相对标准偏差应不大于2
15、.0%视为耐 用性好，否则为不好。4.1溶液配制A 对照品储备液：精密称取 A 对照品适量，加水稀释制成约 0.1mg/ml 的对照品储备液B 对照品储备液：精密称取 B 对照品适量，加水稀释制成 0.1mg/ml 的对照品储备液。有关物质检查XX对照品储备液：精密称取XX对照品适量，加水稀释制成约0.5mg/ml的对照 品储备液。C对照品储备液：精密称取C对照品适量，加水稀释制成约0.2mg/ml的对照品储备液。A杂质定位溶液：精密量取A对照品储备液适量，加水稀释制成约2.5卩g/ml的对照品溶液。B杂质定位溶液：精密量取B对照品储备液适量，加水稀释制成约2.5卩g/ml的溶液。XX定位溶液：精密量取XX对照品储备液适量，加水稀释制成约5.0卩g/ml的溶液C杂质定位溶液：精密量取C对照品储备液适量，加水稀释制成约5.0卩g/ml的溶液杂质对照品溶液（系统适用性溶液）：精密量取A对照品储备液、B对照品储备液、XX对照品 储备液、C对照品储备液适量，加水稀释制成含A约2.5gg/ml，B约2.5gg/ml，XX约5.0gg/ml，C 约5.0gg/ml的混合溶液，同时作为系统适用性溶液。含量测定对照品储备液：精密量取XX对照品（批号xxxxxx）适量，加水溶解并稀释制成约含X
