《甲状腺功能检测SOP》由会员分享，可在线阅读，更多相关《甲状腺功能检测SOP（33页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、SO我件共32页岗位人员 签字秦易生编写陈礼甲状腺功能检测SOP编写日期2014-6-5修订秦易生编号：CSSJSBYMY001-01修订日期2014-6-5目的保证检测结果准确可靠应用范围甲状腺功能检测刖百本院目前开展甲状腺功能检测项目：TT3,FT3,TT4,FT4,TSH,TPO-ab根据临床操作规程及本实验室条件编写，主要包括以下内容：一 .检测仪器：贝克曼 ACCESS2学发光仪二 .检测原理：见具体项目检测三 .目录：1 .TT3检测22 .FT3检测73 .TT4 检测114 .FT4 检测175 .TSH 检测236 .TPO-ab 检测29本操作程序（sop）至编写完成并审核
2、通过之日起开始实施，每年由实验室主管负责组织在岗人员进行修订。审核人（签字）：SO我件共32页岗位人员心日人签字秦易生编写陈礼甲状腺功能检测SOP编写日期2014-6-5修订秦易生编号：CSSJSBYMY001-01修订日期2014-6-5目的保证检测结果准确可靠应用范围甲状腺功能检测总T3分析步骤试剂货号：33830原理 检测原理Access总T3检测是一种竞争抑制的酶免疫方法，样品和用以破坏T3与血清中蛋白结合的消化剂被加入到反应管中，样品中的T3与和生物素结合的 T3类似物质竞争的与抗 T3碱性磷酸酶标记的酶结合物相结合，形成两种抗原抗体复合物。其中由和生物素结合的T3类似物质与酶结合物
3、所形成的复合物可通过生物素-亲和素系统与磁性颗粒相结合。随后，在磁性分离系统去除未与磁性颗粒结合的其它复合物，最后在反应管中加入化学发光底物 （Lumi-Phos* 530 ）,已与固相结合的碱性磷酸酶会使该底物发出光子并被光电比色计所检测。最后，对照仪器中储存的多点定标曲线中所描述的光量子与标准品的对应关系而计算出 样品中的总T3浓度，反应产生的光子与样品中总T3的含量成反比。概述甲状腺激素的浓度和他们的生物效应受下丘脑-垂体-甲状腺轴所控制，促甲状腺素释放激素（TRH或TRF）由下丘脑分泌，受外周游离甲状腺激素浓度调节。TRH从下丘脑经门静脉血液系统进入垂体前页，在那里引起内部细胞的串联从
4、而导致产生和释放促甲状腺素（hTSH或Thyrotropin ）。人促甲状腺素作用的靶组织是甲状腺，在那里与受体结合并通 过腺甘酸环化酶第二信使系统引起反应，包括合成、储存分泌和T3、T4的代谢。超过99%的T3和T4与血清中的蛋白相结合，他们没有生物活性，只有不到1%的游离部分能和受体相结合，刺激靶器官或靶组织（1,2）。甲状腺机能正常的个体血清中，只有一小部分（20%）的T3是由甲状腺合成分泌到血清的，大部分的总T3是在外周组织中通过酶的脱碘反应由T4转化而来（3）。T3分子是甲状腺激素中活性最强的一个，T4的活性也是通过脱碘转化成T3后才形成的，外周脱碘酶的活性受到严格控制。在进行性甲状
5、腺机能减退时，明显可见的是通过补偿途径来促使T4到T3的转化增加以增强甲状腺机能来保持具有生物活性的T3的浓度。在甲状腺刺激免疫球蛋白长期刺?t下（Grave s病），甲状腺会大量分泌 T3 ,引起T3/T4比例较正常人有显著增加。临床上对血清T3检测是为了诊断甲状腺疾病，在Grave s病和其它常引起甲状腺功能亢进的疾病中常见T3升高，在初发的甲状腺疾病如毒性甲状腺肿、新生儿甲减或由下丘脑-垂体水平所致的继发性甲减中常见T3浓度的降低（1）。标本采集A. 推荐使用血清标本。B. 遵循国家临床实验室标准委员会推荐的以下标本处理、运行和储存步骤（4, 5）:1 .用真空采样管采集所有血液标本时须
6、遵守常规注意事项。2 .离心前使标本完全自然形成凝块。3 .全程保证样品管的密闭状态。4 .离心获得血清后的两小时内，至少将 500 Ml血清或血浆转移到一个密闭的储存试管 中备用。5 .储存样品，保持样品管完全密闭，在室温 （15到30C）条件下不超过8小时。6 .如果8小时内不能完成检测即应将标本放入2到8 C冰箱冷藏。7 . 如果24小时内不能完成检测即应将标本放入-20 C冰箱冻藏。C. 标本只可复溶一次。试剂和必须品Beckman Coulter, Inc.4300 S. Harbor Blvd.Fullerton, CA 92834A. R1: Access 总 T3 试剂盒货号：
7、33830:100 个测试， 2盒装，50测试/盒现成可用，在2到10C冰箱中顶端朝上存放，可一直保存到标签中注明的失效期。试剂盒必须在2到10。C冰箱保存2小时后才能放入仪器中使用或保存。试剂盒被吸取使用后，在2到10C条件下可稳定28天，一旦发现有蒸发、结晶或质控结果超 出范围等现象出现即代表试剂盒失效。1. R1a:含结合了碱性磷酸酶的大鼠抗T3单抗和包被了亲和素的Dynabeads ?*磁性微粒子的TRIS缓冲液，含离子表面活性剂，蛋白（鸟性和鼠性） ， 0.1% 的 叠氮钠和 0.1% ProClin* 300。2. R1b:含结合了生物素的 T3类似物的TRIS缓冲液，含离子表面活
8、性剂，蛋白（鸟性）， 0.1% 的叠氮钠和 0.1% ProClin* 300 。3. R1c:含8苯胺-1-硫酸奈酸（ANS）的0.4N氢氧化钠溶液。4. R1d: 0.4N盐酸溶液。B. Access 总T3定标品货号 33835: : S0-S5, 4.0 mL/ 瓶定量检测的定标是用已知分析浓度的标本进行检测以观察光量子值。光量子值和已知浓度之间的数学关系就构成了定标曲线。定标曲线储存于仪器中，可将样本检测中得 到的光量子值转化成特定的分析浓度。现成可用，顶端朝上保存于210。C,使用前轻轻颠倒混匀，避免产生气泡。在270 c 环境可稳定到定标品瓶标签上标出的失效期。质控结果落到允许的
9、范围之外是定标品失效的信号。定标操作步骤请参见 Access免疫分析系统的操作指南和参考手册。1. S0:含 0.1% 的叠氮钠和 0.025% Cosmocil CQ的人血清，含 0.0 % /dl （nmol/l）T3o2. S1 65:人血清内 T3浓度分别大概为 0.5, 1.0, 2.0, 4.0 及8.0 ng/mL （大概为0.8, 1.5, 3.1, 6.1, 及 12.3 nmol/L） , 0.1% 的叠氮钠和 0.025% Cosmocil CQ 。参见瓶 贴上标明的准确浓度。3. 定标卡：1C. Access 底物货号为 81906:4瓶x 130 ml/瓶。现成可用，
10、下表注明了储存条件和稳定性，底物本底检测值的增高提示底物的不稳ao未开瓶2 到 8C可一直保存到标签注明的 失效期使用前的平衡（未开瓶）15到30 C （室温条件）至少18小时最长14天使用中（已开瓶）内部底物支持位置最长5天使用中（已开瓶）外部液体架的底物位置最长14天R2底物：Lumi-Phos 530 （缓冲液中包含有 dioxetane Lumigen* PPD,荧光素和离子表面活性剂量）。D.E.F.按照Access仪器操作指南中介绍的使用方法使用。Access冲洗缓冲液货号：819074 x 1950 ml/ 箱现成可用。在室温条件下（15到30 C）可稳定到包装上注明的失效期。底
11、物本底检测值的增高或在“双抗”体夹心法中的0点定标品的相关发光值的增高则提示冲洗缓冲液的不稳7EoR3冲洗缓冲液：Tris盐缓冲液，离子表面活性剂， 0.1 %的叠氮钠和 0.1% ProClin 300按照Access仪器操作指南中介绍的使用方法使用。质控材料：商用质控血清Access免疫分析系统及消耗品G.1.2.3.告和注意点只可用于体外诊断。病人样品和血制品应按照阐述的最底危险性的常规操作进行操作，将这些物品当作 潜在的传染物品，按照常规操作注意点和优秀实验室的操作常规进行处理，无论该 些物质是原型、处理物或离心前。用合适的消毒剂进去污。按照各实验室规定和操 作规程存放和处理该些物品及
12、其容器。试剂中所含的叠氮钠可以和铅和铜反应形成有高度腐蚀性的重氮金属盐，如果被溅到含该物质的液体，则可用大量水冲洗来防止重氮的堆积(6)。4.5.ProClin 300是潜在的皮肤刺激剂，避免将该试剂溅到到或洒到衣服或皮肤上，如 果发生则用大量肥皂和清水彻底冲洗。Xi.刺激物：0.4N NaOH.R 36/38:对眼睛和皮肤有刺激S 26-37/39 :如果接触到眼睛，立即用大量清水冲洗并去看医生，戴合适的手套和 眼睛/面罩来保护。6.用来制备定标品的人源性物质，已作检测，未发现已肝病毒抗原（HBsAg）、丙肝抗体（HCV-Ab）和人免疫缺陷病毒抗体（HIV1-Ab 和HIV2-Ab）存在。因
13、为没有一个测试方法的阴性能完全保证没有感染源，因此处理试剂和样品时应视为在传递感染性疾 病样品一样(7)。7 .底物暴露在空气中容易衰变，应保持瓶口紧盖，不要将不同瓶的底物相混后使用。8 .所用材料安全数据表要求后可得。 定标了测试均需有效的定标曲线，T3的定标曲线有效期为14天，参见操作向导和参考手册来了解定标步骤。操作指南中的6.1章节阐述了暂时的重定标需要和系统选择定标的需要。 提供的Access总T3定标品有6个浓度点，0和大概0.5, 1.0, 2.0, 4.0, 及8.0 ng/mL , 由T3晶状体和人血清通过称重法制备而成，与 USP左旋甲状腺素参考标准比较并确认。 T3的定标
14、曲线有效期为14天。定标品自动复管检测。 质控 质控品与样品的性质类似，是监测免疫化学分析正常工作的必须品。因为样品可在有随机检测能力的仪器中随机检测而非批量检测，所以质控品应该包含在整个24小时的时间段内(8)。商用质控品将包括至少三个浓度质控品，按照厂家规定进行复溶和保存。在正式使 用前每个实验室均应建立各自得平均值和可接受范围，质控结果没有落在可接收范围提示检验结果无效。重新检查位于上一次有效质控值到这次无效质控值之间所有得检测结果。参见操作指南来了解如何回顾质控结果。 步骤A. Access 仪器参见Access免疫分析系统的操作向导来准备和操作。 B.分析步骤1 .从主菜单进入测试要
15、求屏幕。2 .对每个样品，设置一个样品架上的位置，输入样品信息和需检测的测试名称。3 .将样品管(杯)放入样品架中已设定的位置。4 .按下运行键(Run )开始检测。5 .仪器会提醒操作者运行所需的定标。6 .系统会自动计算检测结果。 结果A.系统软件会按照平滑的三次方参数曲线计算模式( smoothing spline math model ) 自动计算病人结果。样品中检测到的光量子值会与储存的标准曲线对应求得相应结 果，病人检测结果可通过“样品结果菜单”( Sample Results screen )回顾，如 何回顾结果请参见操作规程。B.正常参考范围1 .每个实验室均应针对各种有代表性的特殊人群建立自己的参考范围。2 .用Access总T3检测测定了 239名表观正常没有任何已
