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1、马钱子检验方法确认方案 类 别：检验方法确认 文件编号：VAP-FF-2016-001 起 草 人： 审 核 人： 批 准 人： 一 简介 本品为马钱科植物马钱Strychnos nux-vomica L.的十燥成熟种子。冬季采收成熟果实，取出种子，晒干。苦，温；有大毒。归肝、脾经。通络止痛，散结消肿。用于跌打损伤，骨折肿痛，风湿顽痹，麻木瘫痪，痈疽疮毒，咽喉肿痛。 二 验证目的 马钱子质量标准收载在中华人民共和国药典2015版一部, 为保证生产出的产品符合检验标准的要求,确认该检测方法是否适用于本公司生产的产品检验。现对质量标准分析方法进行确认验证，确保检验结果的准确可靠。 三 验证范围 3
2、.1 鉴别 （士的宁、马钱子碱薄层鉴别） 3.2 含量测定 四 验证小组成员及职责姓 名职务责任人质量部部长（确认小组组长）检验仪器确认总负责；组织相关的设备确认培训；批准确认方案；审批确认报告。QC主管审核确认方案；督促并监督确认的正常进行；审核确认报告，对整个确认验证项目负责。QC按照预定方案进行确认；并做好相关记录；出现异常情况及时汇报和记录；起草确认报告。 五 确认验证实施步骤 5.1 为了确保验证数据的准确可靠，采取以下几个先行保障措施 5.1.1 仪器：己经过校正并在有效期内 5.1.2 人员：均经过培训，熟悉方法及使用的仪器 5.1.3 对照品：购自陕西省药品检验所 5.1.4
3、材料：均符合检验要求 5.1.5 参考资料 中华人民共和国药典2015版一部 药品GMP指南（2010年版）质量控制实验室与物料系统 5.2 鉴别（2） 5.2.1 试验A：取本品粉末0.5g，加三氯甲烷-乙醇(10：1)混合溶液5ml与浓氨试液0.5ml，密塞，振摇5分钟，放置2小时，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取士的宁对照品、马钱子碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各lOul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液(4：5：0.6：0.4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试
4、液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 5.2.2 试验B：取三氯甲烷-乙醇(10：1)混合溶液5ml与浓氨试液0.5ml，密塞，振摇5分钟，放置2小时，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取士的宁对照品、马钱子碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各lOul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液(4：5：0.6：0.4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。5.2.3 确认验证标准:试验A供试品色
5、谱中应检出士的宁、马钱子碱。试验B供试品溶液中不得检出士的宁、马钱子碱。5.2.4 检测结果及评价类别检验结果试验A试验B操作人： 复核人： 日期： 年 月 日 结果及评价：马钱子原药材中检出士的宁、马钱子碱，而空白溶剂样中未检出士的宁、马钱子碱，本方法可以作为马钱子鉴别中士的宁、马钱子碱鉴别的指导方法使用。 评价人： 评价日期： 年 月 日 5.3 含量测定 照高效液相色谱法测定。5.3.1 验证方法 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈0.Olmol/L庚烷磺酸钠与0.02moI/L磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节pH值2.8）(21：79)为流动相；检
6、测波长为260nm。理论板数按士的宁峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备 取士的宁对照品6mg、马钱子碱对照品5mg，精密称定，分别置1Oml量瓶中，加三氯甲烷逶量使溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取2ml，置同一10 ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含士的宁0.12mg、马钱子碱0.1mg)。 供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氢氧化钠试液3ml，混匀，放置30分钟，精密加入三氯甲烷20ml，密塞，称定重量，置水浴中回流提取2小时，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，分取三氯甲烷液，用铺有少量无水硫酸钠的滤
7、纸滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液3ml，置lOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。空白溶液的制备 取氢氧化钠试液3ml，置具塞锥形瓶中，放置30分钟，精密加入三氯甲烷20ml，密塞，称定重量，置水浴中回流提取2小时，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，分取三氯甲烷液，用铺有少量无水硫酸钠的滤纸滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液3ml，置lOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各lOul，注入液相色谱仪，测定，即得。 5.3.2 含量计算 A供C对稀释倍数公式：含量%=100% A对m供5.3.3 确认验证标准 A 供试品溶液应检出与对
8、照品溶液中士的宁、马钱子碱相同保留时间的色谱峰；空白溶液中不得检出与对照品溶液中士的宁、马钱子碱相同保留时间的色谱峰。B 连续进供试品6次测定含量，RSD2%。5.3.4 检测结果及评价A 保留时间确认项目对照品溶液供试品溶液空白溶液保留时间操作人： 复核人： 日期： 年 月 日B 重复性确认次数123456含量平均含量RSD操作人： 复核人： 日期： 年 月 日结果及评价：供试品溶液中检出与对照品溶液中士的宁、马钱子碱相同保留时间的色谱峰；空白溶液中未检出与对照品溶液中士的宁、马钱子碱相同保留时间的色谱峰。连续进供试品6次测定含量，RSD2%。本方法可以作为马钱子含量测定的指导方法使用。 评价人： 评价日期： 年 月 日六 验证总体评价及建议 评价人： 评价日期： 年 月 日
