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1、DNA限制性内切酶双酶切反应时通用缓冲液的选用 当酶切位点确定后，最好购买同一家公司生产同一类型的内切酶（若酶切Buffer相同，这样有时候可以省去后期去需找酶切反应通用缓冲液） 说明使用两种酶同时进行DNA切断反应 (Double Digestion) 时，为了节省反应时间，通常希望在同一反应体系内进行。TaKaRa采用Universal Buffer表示系统，并对每种酶表示了在各Universal Buffer中的相对活性。尽管如此，在进行Double Digestion时，有时还会难以找到合适的Universal Buffer。本表以在pUC系列载体的多克隆位点处的各限制酶为核心，显示了
2、在Double Digestion可使用的最佳Universal Buffer条件。在本表中，各Universal Buffer之前表示的 数字 是指各Universal Buffer的反应体系中的最终浓度。TaKaRa销售产品中添附的Universal Buffer全为10倍浓度的缓冲液。终浓度为0.5时反应体系中的缓冲液则稀释至20倍，1时稀释至10倍，2时稀释至5倍进行使用。 注意 1 g DNA中添加10 U的限制酶，在50 l的反应体系中，37下反应1小时可以完全降解DNA。 为防止Star活性的产生，请将反应体系中的甘油含量，尽量控制在10%以下。 根据DNA的种类，各DNA的立体结构的差别，或当限制酶识别位点邻接时，有时会发生Double Digestion不能顺利进行的可能。
