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1、ICS备案号:JJF(gP福建省地方计量技术规范JJF XXXX-XXXX液相色谱-质谱联用仪校准规范Calibration Specification for Liquid Chromatography 一 Mass SpectrometersXXXX-XX-XX 发布XXXX-XX-XX 实施福建省质量技术监督局发布液相色谱-质谱联用仪校准规范 Calibration Specification for Liquid JJF （闽）XXXX-XXXX Chromatography Mass spectrometers本规程经福建省质量技术监督局于XXXX年XX月XX日批准，并自XXXX年X
2、X月XX日起施行。归口单位：起草单位：福建省计量科学技术研究所本规程技术条文由起草单位负责解释本规范主要起草人:参加起草人:目录1范围12引用文献13术语和计量单位14概述25计量性能要求36校准条件36.1实验室环境要求36.2标准物质和试剂46.3校准设备47.校准项目和校准方法47.1外观及功能性检查47.2校准方法58校准结果的处理89.复校时间间隔8附录A校准证书内页格式(供参考)9附录B校准记录格式10附录C不确定度评定12附录D碘化铯钠(NaI CSI)离子质量13液相色谱一质谱联用仪校准规范1范围本规程适用于离子阱(QIT)、单级四极杆(Q)和三重四级杆(Q-Q-Q)液相色谱一
3、 大气压离子化质谱联用仪(Liquid Chromatography Atmospheric Pressure Ionization Mass Spectrometers，简称 LC-APIMS)的校准。其他类型 LC-MS 的校准 检测可参照此规范进行。2引用文献GB/T 6041-2002质谱分析方法通则JJG (教委)003-1996有机质谱仪检定规程JJS K0136-2004高效液相色谱法-质谱分析法一般规则使用本规范时，应注意使用上述引用文献的现行有效版本。3术语和计量单位3.1 大气压离子化(atmospheric pressure ionization, API)离子源的功能是
4、使样品分子转化为离子，将离子聚焦，并加速进入质量分析器。 API是指在大气压条件下的质谱离子化技术的总称，包括电喷雾离子化(electrospray ionization ESI)和大气压化学离子化(atmospheric chemical ionization, APCI)等技术， 是目前商品化液质联用仪主要的离子源类型。3.2 质量范围(mass range)质谱仪能检测的最低和最高质量。3.3 原子质量单位 u (atomic mass unit)以123质量的1/12为一个质量单位。3.4 分辨率(resolution)分辨率指分辨相邻两个离子质量的能力(R)。若两个相邻的峰形成的峰谷
5、为峰高的10%，则称这两个峰能被分辨。3.5质荷比；m/z离子的质量数和核电荷数之比。3.6 灵敏度(Sensitivity)LC-APIMS联用仪采用相对灵敏度表征仪器的灵敏性，即质量色谱图中某一质 量离子峰的信噪比。3.7 基线噪声(baseline noise)基线峰底与峰谷之间的宽度。3.8 信噪比(signal-to-noise ratio, S/N)待测样品信号强度与基线噪声的比值，记为S/N。3.9 质量色谱图(mass chromatography MC)MC是由总离子流色谱图重新建立的特定质量离子强度随扫描时间变化的离子 流图，故也称为提取离子流色谱图(extracted i
6、on chromatography)o3.10 总离子流色谱图(total ion current TIC)LC-APIMS的TIC相当于色谱图，图中色谱峰上的每一点，是一种质谱图中所 有离子的总强度。4概述液相色谱一质谱联用仪(Liquid chromatography/mass spectrometry, LC-MS)，主 要由高效液相色谱，离子源，质量分析器，检测器，数据采集及分析系统组成(如 图1.)。LC-MS是利用样品中各组分在色谱柱中的流动相和固定相间的分配及吸附 系数的不同，由流动相把样品带入色谱柱中进行分离后，经接口装置(离子源)去 除溶剂并使样品离子化，使其成为带有一定电荷
7、、质量数的离子，这些不同的离子 碎片在不同场中(电场和/或磁场)的运动行为不同，各种类型的质量分析器利用该 原理把电离子按质荷比(m/z)分开，得到依质量顺序排列的质谱图。通过对质谱图 的分析处理，可以得到样品的定性、定量分析结果。E,门时间四极离K闻 在一变腐1|.丈 傅叶挽*摭振图1. LC-APIMS组成框图5计量性能要求LC-APIMS各项技术指标见表1表1 LC-APIMS主要技术指标技术指标要求质量范围上限不低于1500u质量准确性*（ M）0.5 u分辨率（R）W1 u灵敏度*QESI/APCI止离子10pg 利血平，m/z609 处 S/NN100： 1（峰峰值）ESI/APC
8、I负离子10pg氯霉素，m/z321处S/NN40： 1 （峰峰值）Q-Q -QQITESI/APCI止离子10pg 利血平，m/z 609（母核），m/z195 （碎片），S/NN150:1（峰峰值）ESI/APCI负离子10pg 氯霉素，m/z 321（母核），m/z152 （碎片），S/NN100:1（峰峰值）定量重复性*RSDW6%定性重复性*RSDW2%6校准条件6.1实验室环境要求6.1.1仪器室内不得有强烈的机械振动和电磁干扰，不得存放与实验无关的易燃、易 爆和强腐蚀性气体或试剂。6.1.2实验室温度：20C30C；6.1.3相对湿度：W70%。6.2标准物质和试剂6.2.1利血
9、平-乙腊溶液：10.0pg/|iL；6.2.2氯霉素-乙腊溶液：10.0pg/pL；6.2.3碘化铯钠-异丙醇水溶液：2四g/由碘化钠，50ng/L碘化铯溶于V异丙醇：V水=50： 50溶液中；6.2.4乙腊、异丙醇：液相色谱醇或同等级别。6.2.5水：二次去离子水。6.3校准设备6.3.1微量注射器：10四L（分度为0.1uL）；6.3.2绝缘电阻表：500V, 10级。6.3.3液相色谱仪检定专用测量仪。7.校准项目和校准方法7.1外观及功能性检查7.1.1仪器应附有制造厂的技术说明书，产品合格证；应标明仪器名称、型号、编号、 出厂日期及制造厂名称、制造计量器具许可证标志及编号，各开关、按
10、钮、显示器 应有明确的功能标志。7.1.2仪器不应有妨碍正常工作的机械损伤；各调节器转动灵活，定位准确；各紧固 件应无松动；通电后，仪器能正正常工作，显示器清晰、完整。7.1.3新出厂的仪器，表面涂、镀层均匀，无明显檫伤、露底、污点等现象。7.1.4绝缘电阻仪器电源线、中线对地的绝缘电阻应不小于20MQ7.2校准方法仪器稳定后，执行自动调谐，直到自动调谐通过后，开始以下校准。7.2.1外观用目视和手动检查。7.2.2绝缘电阻断开外接电源。仪器电源开关处于接通位置。用绝缘电阻表检定。7.2.3质量范围将碘化铯钠调谐溶液由质谱进样口注入，并调入该类型的质量校准文件进行调 谐和校准。使用标准荷质比范
11、围（m/z为50-2200），选择SCAN模式，以碘化铯钠 溶液为调谐液进行全范围扫描，质量数达到1500以上，观察是否出现质量数1500 以上（含m/z为1500）的质谱峰。7.2.4质量准确性仪器调谐过后，按照调谐的条件，注入碘化铯钠调谐液，记录附录D中的主要 离子的实测质量数，根据公式（1）计算质量准确性。AM = M测量-M理论（1）式中南.测量一一第i个离子三次测量平均值，u；M理论第i个离子理论值，u。7.2.5分辨率仪器调谐过后，按照调谐的条件，注入调谐液，考察如下附录D中3-5个主要 离子峰的分辨率（该峰形成的峰谷大于峰高的10%）。并根据式（2）计算仪器的分 辨率：R=w（2
12、）式中R一分辨率，FWHM ；w 一离子峰峰高50%处的峰宽宽度（简称半峰宽）；127.2.6灵敏度以自动或手动调谐时确定的最佳值作为检定参数。7.2.6.1 ESI 正离子以C18（2.1mmX150mm，5pm）或相当者为色谱分离柱，采用70： 30乙晴水溶液 为流动相，控制流速为200pL/min，注入10uL质量浓度为1pg/pL的利血平溶液， 选择选择离子检测模式（SIM），提取利血平的特征离子m/z =609，根据公式（3）计 算质量色谱图中m/z609的信噪比。S/N= HH噪声式中：H609提取离子（m/z =609）的峰高；H噪声一一基线噪音，取该峰附近10min内的基线噪声
13、的平均值。*注：检定LC-MS-MS时，以C18（2.1mmX150mm，5pm）或相当者为色谱分离柱， 采用70： 30乙晴水溶液为流动相，以800pL/min的流速，注入10uL质量浓度为1pg/pL 的利血平溶液，选择多反应选择检测（MRM）模式，提取利血平特征离子m / z 609 的碎片离子m/z195的质量色谱图，根据公式（3）计算S/N。7.2.6.2 ESI 负离子以C18（2.1mmX150mm，5pm）或相当者为色谱分离柱，采用70： 30乙晴水溶液 为流动相，以200pL/min的流速，注入10uL质量浓度为0.5pg/pL的氯霉素溶液， 选择SIM模式，提取氯霉素特征离
14、子m/z =321，再现质量色谱图，根据公式（3） 计算S/N。*注：检定LC-MS-MS时以C18（2.1mmX150mm，5pm）或相当者为色谱分离柱，采用 70： 30乙晴水溶液为流动相，以800pL/min的流速，注入5uL质量浓度为0.5pg/pL 的氯霉素溶液，选择MRM模式，提取利血平特征离子m/z 321的碎片离子m/z152 的质量色谱图，根据公式（3）计算S/N。7.2.6.3 APCI 正离子以C8（2.1mmX150mm，5pm）或相当者为色谱分离柱，采用70： 30乙晴水溶液 为流动相，以1mL/min的流速，注入10uL质量浓度为1pg/pL的利血平溶液，选择 SI
15、M模式，提取利血平的特征离子m/z =609的质量色谱图，根据公式（3）计算S/N。*注：检定LC-MS-MS时注入5uL质量浓度为1pg/pL的利血平溶液，选择MRM 模式，提取利血平特征离子m/z609的碎片离子m/z195的质量色谱图，根据公式（3） 计算S/N。7.2.6.4 APCI 负离子以C8（2.1mmX150mm，5pm）或相当者为色谱分离柱，采用70： 30乙晴水溶液 为流动相，以1mL/min的流速，注入10uL质量浓度为1pg/pL的氯霉素溶液，选择 SIM模式，提取氯霉素特征离子m/z =321，再现质量色谱图，根据公式（3）计算 S/N。*注：检定LC-MS-MS时以C18（2.1mmX150mm，5pm）或相当者为色谱分离柱，采 用70： 30乙晴水溶液为流动相，以2mL/min的流速，注入5uL质量浓度为1pg/pL 的利血平溶液，选择MRM模式，提取利血平特征离子
