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1、拳参正丁醇提取物对大鼠心肌肥厚时钠钾及钙ATP酶活性的影响【摘要】目的观察拳参正丁醇提取物对异丙肾上腺素(Iso)所致大鼠心肌肥厚的保护作用及其对Na+-K+-ATPase，Ca2+-ATPase，CK，LDH活性的影响。方法采用Iso 1mgkg-1d-1，背部皮下注射，连续10 d，建立大鼠心肌肥厚模型。造模第2天开始给予不同浓度的拳参正丁醇提取物或NS，连续14 d，末次给药后禁食12 h，称重，麻醉后断头取血，测定血清LDH的活性、心肌Na+-K+-ATPase，Ca2+- ATPase，CK及LDH的活性。结果模型血清LDH的活性升高，心肌组织Na+-K+-ATPase，Ca2+-
2、ATPase，CK及LDH的活性降低；与模型组相比，拳参正丁醇提取物 治疗 组血清LDH的活性降低，心肌组织Na+-K+-ATPase，Ca2+ATPase，CK及LDH的活性升高。结论拳参正丁醇提取物可通过提高Na+-K+-ATPase，Ca2+- ATPase的活性起抗心肌肥厚作用。 【关键词】拳参正丁醇提取物； 心肌肥厚； 钠钾ATP酶； 钙ATP酶 拳参具有清热、镇惊、理湿等疗效。拳参通过95%的乙醇提取后，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，其正丁醇萃取部分即得拳参正丁醇提取物，主要成分为丁香苷、芦丁、儿茶素及Mururin A1。有实验表明，拳参提取物具有抗心律失常2、镇痛3、中
3、枢抑制4、心肌缺血保护5等作用。心肌肥厚是以心肌细胞体积增大和蛋白含量增多为主要特征的代偿反应，是对各种心血管刺激因子的适应反应，但持续的心肌肥厚会导致心衰而威胁生命。心肌肥厚的发生是许多因素共同参与的结果。本课题组前期研究表明，PBNA可通过增强抗氧化作用及改变血管活性物质合成而起抗心肌肥厚作用6，7。本实验在此基础上进一步探讨PBNA的抗心肌肥厚机制是否与Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性及细胞代谢有关。 1 材料与仪器动物清洁级SD大鼠，雄性，体质量200250g，购自江西中院动物合格证号：SCXK2005-0001。药品和试剂拳参正丁醇提取物；盐酸异丙肾上腺素注射针
4、剂，Na+-K+-ATPase、Ca2+- ATPase、CK、LDH检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所。仪器ZS83-1型内切式组织匀浆器，赛多利斯BS224S型 电子 天平(北京赛多利斯仪器有限公司)。2 方法造模与给药方法雄性SD大鼠32只，体质量200250 g，随机分成4组，每组8只，分别为：对照组、心肌肥厚模型组、 mg/kg PBNA组、1 mg/kg PBNA组。大鼠背部皮下注射Iso 1 mg/kg/d，连续10 d，制作心肌肥厚模型，对照组给予等体积生理盐水。于造模后第2天开始分别灌胃给以1 mg/kg， mg/kg的PBNA，连续14 d，对照组和心肌肥厚模型组大鼠给予
5、相同体积的NS灌胃。Na+-K+-ATPase、Ca2+- ATPase、CK、LDH活性测定末次给药后禁食12 h，水合氯醛(/kg)麻醉，腹腔静脉取血2 ml，室温静置1 h，4，2 000 r/min，离心10 min，分离血清，于-80保存。取出心脏，称取500 mg左心室心肌组织冰浴下制成10%匀浆，4，3 500 r/min，离心10 min，取上清于-80保存。严格按试剂盒说明，ATPase活性测定采用定磷法，以每克蛋白每小时分解ATP产生的无机磷量表示酶活性，产生1 mmol Pi 为1个活性单位U，蛋白定量采用考马斯亮蓝法，以牛血清白蛋白为标准。比色法测定血清CK及心肌组织C
6、K、LDH的活性。学分析实验数据采用Graphpad 进行单因素方差分析，结果以柱状表示，认为有统计学意义。3 结果 Iso模型组与对照组相比，血清LDH的活性升高，心肌Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase、CK及LDH的活性降低；与模型组相比，拳参正丁醇提取物 治疗 组血清LDH的活性降低，心肌组织Na+-K+-ATPase、Ca2+- ATPase、CK及LDH的活性升高。结果见15。 4 讨论 心肌肥厚是心脏维持适当收缩功能对各种病理状态的代偿反应。Iso作为受体激动剂，可使心肌收缩力增强，心率加快，胶原纤维增生，产生心肌肥厚8。心肌生长是由于儿茶酚胺的直接刺激和通过肾上腺
7、素能神经兴奋引起代谢变化、血流动力学改变和神经内分泌活动而造成。Borges等9，10报道用异丙肾上腺素慢性刺激大鼠，可引起心肌肌浆网Ca2+-ATPase mRNA表达下降，心肌细胞转化生长因子TGF-1 mRNA水平增高，通过改变心肌基因表达而造成心肌肥厚和心脏纤维化。Na+-K+-ATP的主要功能是将细胞内的Na+泵出和将胞外的K+泵入，平衡细胞内外Na+、K+，是生物电产生的基础，也是细胞膜继发性主动转动的能量来源；Ca2+- ATPase的主要功能是将细胞内ca2+泵入肌浆网，它同Na+-Ca2+交换共同维持细胞内Ca2+稳态。心肌肥厚时Na+-K+-ATPase及Ca2+- ATP
8、ase活性下降，导致细胞内Ca2+、Na+增多。胞内Na+增多引起Na+-Ca2+交换增加，进一步加剧细胞内Ca2+超载，从而引起心肌细胞凋亡1114。 本课题组前期研究表明，PBNA可使左心室重量指数下降，提示了PBNA具有抗心肌肥厚作用，这种保护作用可能与PBNA提高机体的抗氧化能力、促进NO及ANP合成、降低ET及Ang含量有关6，7。本实验结果显示，给予PBNA治疗大鼠心肌组织Na+-K+-ATPase及Ca2+- ATPase活性均有不同程度的升高，提示PBNA可能是通过抑制心肌Na+-K+-ATPase及Ca2+- ATPase活性下降，改善ATPase活性，抑制心肌胶原增生，从而
9、抑制心肌肥厚和心脏重构。小剂量Iso长期注射，可引起心肌细胞坏死，心肌细胞释放LDH及CK增加15。本实验证实，Iso所致心肌肥厚大鼠释放入血清的LDH增多，组织CK及LDH含量降低。PBNA治疗组大鼠组织CK及LDH含量升高，释放入血清的LDH量亦降低，提示PBNA可降低心肌肥厚时的心肌细胞损伤。 【 参考文献 】 1刘晓秋，李维维，生可心，等拳参正丁醇提取物的化学成分J沈阳药科大学学报，2006，23(1)：162Zeng jing，Huang xianhua，Lai f，etEffects of Polygonum Bistortaextract J. Drug Development
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