卢卡斯快蓝染色方法

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1、卢卡斯快蓝染色方法描述:用于在固定的、石蜡包埋的大脑和脊髓组织切片以及冰冻切片上对髓鞘/有髓轴突 进行染色。髓鞘,包括磷脂,将被染成蓝色到绿色,神经元将被染成紫色。这种染色 通常用于识别大脑或脊髓组织的基本神经元结构。固定:10%福尔马林。切片:石蜡切片5-10 um。20-30um冷冻切片。解决方案和试剂:0.1% Luxol 坚牢蓝液:Luxol快速蓝色,MBS0.1通用酒精,95% 100毫升冰醋酸0.5毫升0.1%甲酚echt紫罗兰溶液:甲酚echt紫罗兰(甲酚耐晒紫罗兰)-0.1克蒸馏水100毫升使用前加 10 滴冰醋酸过滤。0.05%碳酸锂溶液:碳酸锂0.05通用蒸馏水100毫升步

2、骤:1. 脱蜡并水合至95%乙醇(冷冻/石蜡切片可能需要进行脱脂步骤:将切片直接放入1:1 乙醇/氯仿中几个小时7过夜,然后水合回95%乙醇)。-染色前需要充分脱水烘干, 否则容易脱片。2. 将luxol fast blue溶液放入56C的烤箱中过夜(冰冻切片不超过16小时)。3用95%的酒精冲洗掉多余的污渍1-2min。4. 用蒸馏水冲洗 1min。5. 在碳酸锂溶液中对切片进行 30 秒的分化。6. 在 70%乙醇中继续分化30秒。7. 用蒸馏水冲洗。8. 用显微镜检查灰质是否清晰,白质是否清晰。9. 必要时重复分化步骤(步骤 5-7)。10. 分化完成后,放入蒸馏水中。11. 在甲酚紫溶液中复染30-40秒。12. 用蒸馏水冲洗(不要用70%酒精冲洗,否则会清除快速的蓝色染色)。13. 用95%乙醇对切片进行5分钟的分化(显微镜检查)。14. 100%酒精 2x5 分钟。15. 二甲苯2 x5 分钟。16. 中性树胶封片结果:髓,包括磷脂蓝色到绿色神经元粉红色到紫色

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