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1、芍药甘草附子汤对弗氏完全佐剂关节炎大鼠血清TNF-水平及PGE2水平的影响关键词:类风湿性关节炎 PGE2 肿瘤坏死因子(TNF-) 乌头汤 雷公藤贰 实验研究1.引言类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种常见的以关节滑膜慢性炎症病变为主的慢性全身性自身免疫疾病，其特征症状为对称性，周围性多个关节慢性炎症性病变，临床表现为受累关节疼痛、肿胀、功能下降，病变呈持续反复发作过程。女性发病多于男性，发作期与缓解期交替，致残率高。现代医学认为RA主要是由于多种因素引起的自身免疫反应性炎症，其中细胞免疫与体液免疫共同参与，近来认为细胞免疫异常是导致类风湿关节炎发病的主要原
2、因，多与疾病的活动及机体的免疫功能有关。如关节损伤的病理过程与巨噬细胞产生的白介素1、肿瘤坏死因子、白介素6等多种细胞因子密切相关。实验动物：Wistar大鼠4-6周龄,雌雄各半，平均体重为(19015) g,药物及试剂：乌头汤处方组成:麻黄、芍药、炙甘草、黄蔑各1饨，炙川乌59，煎成汤剂(炙川乌先煎30分钟，以解其毒性)，配成浓度为g1/m1。雷公藤多贰片弗氏完全佐剂试剂盒肿瘤坏死因子试剂盒前列腺素E2(ELISA)试剂试剂盒动物模型制作：Wistar大鼠正常饲养一周后，按性别、体重分层后，再随机分为4组，分别为:乌头汤组；雷公藤组；模型组；正常对照组。每组10只，分笼饲养，自由饮水，使各组
3、条件均等。除正常对照组外，所有动物右后足趾部常规消毒后注射弗氏完全佐剂0.lml。药物治疗组于造模的第d8起分别给予乌头汤，进行剂量换算后大鼠用量15g/kg，配成浓度为1g/ml(100%浓度)，日一次灌胃；雷公藤多贰片10mg，大鼠用量为50mg/kg，粉碎后，加蒸馏水稀释至0.01g/ml(l%浓度)，即日一次灌胃给药1ml。模型组和正常对照组给予3ml生理盐水，连续灌胃21夭。连续用药2ld，于末次给药24h后，用乌拉坦进行大鼠腹腔注射麻醉后，切开腹腔，用手术器械分开腹腔脏器，露出腹主动脉，并进行结扎，然后用5毫升注射器进行腹主动脉穿刺，抽取动脉血约3一5毫升，最后处死大鼠。将四组血做
4、好标记，在离心机上2000/rmin离心10分钟后，取上清液待测。未测的血清放入低温冰箱待测。RA时滑膜细胞可大量产生各种炎性细胞因子,其中肿瘤坏死因子-(TNF-)倍受瞩目,目前认为其启动了RA细胞因子的瀑布反应。TNF-是由巨噬细胞和单核细胞分泌的一种重要的细胞因子。具有多种生物学效应，能调节机体的免疫功能，并且也参与炎症病变的多方面病理变化。因此，测定血清或其它体液中TNF-的浓度，在基础医药学和临床多种疾病的诊疗研究中是一项很有价值的指标。大量证据表明TNF一a与RA的发病有着密切的关系。TNF一a是众多细胞因子中作用活跃和具有广泛生物学活性的致炎因子，在AR滑膜组织中以自分泌和旁分泌
5、的方式，大量表达TNF一a及a受体，特别是在血管豁部位;促进胶原酶、PGEZ等多种炎症介质的释放，并趋化、吸引炎性细胞进入关节滑膜，介导关节滑膜发生持久的炎症反应，使软骨蛋白多糖降解和合成减少，致关节软骨损害;减少滑膜细胞凋亡并促使其增殖，诱导成纤维细胞增殖分化，介导增生和血管豁形成，致关节软骨和骨质破坏，关节强直。另一方面可激活血管内皮细胞，增强内皮细胞豁附分子的表达，促进血管内皮生长因子(VGEF)的分泌而促使滑膜血管的增生。再者还可以刺激结缔组织和多形核细胞产生前列腺素而上调VEGF的分泌。VEGF既促进血管内皮细胞的有丝分裂，促进新生血管的形成，又增强血管的通透性，促进血管内物质的渗出
6、而促进RA炎症的形成和发展，TNF一a既可直接地致滑膜炎性反应，又可直接和间接地刺激滑膜VEGF的分泌，致类风湿滑膜炎性增殖，血管新生，血管酷形成。故TNF一a在AR发病过程中起着非常重要作用。PGE2主要由成骨细胞合成，通过特异性受体的介导完成对骨组织代谢的调节。机体内许多细胞因子和激素均能够刺激PGE2的分泌，如肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素(IL-1)、甲状旁腺激素、甲状腺激素以及前列腺素F2等。高浓度的PGE2可刺激软骨细胞及破骨细胞减少蛋白多糖的合成、加速其降解，并可促进滑膜纤维母细胞及软骨细胞产生释放蛋白水解酶、胶原酶，释放骨钙，导致软骨基质崩解、软骨吸收和骨破坏。PGE可使炎
7、症血管扩张，使水肿加剧，也可引起疼痛。IL-17是一种强大的前炎症细胞因子，也是炎症反应的微调因子，可以刺激成纤维细胞、角质细胞、上皮及内皮细胞释放IL-6、IL-8、前列腺素E2(PGEZ)、基质金属蛋白酶(MMP)-1、单核细胞化学趋化蛋白(MCP)一1和粒细胞集落刺激因子(GCSF)等细胞因子。1L-17还可诱导人成纤维细胞表达细胞间粘附分子(ICAM)一1，促进T细胞增殖。IL-17能够与多种细胞因子产生协同作用，以放大炎症反应。IL-17与其他炎性细胞因子如肿瘤坏死因子(TNF)一a、11二1等产生协同作用，促进粒一巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-6、H二8等分泌而增强其
8、致炎活性。leGrand等研究发现IL17与TNFa协同促进一氧化氮(NO)合成，超过两者各自的作用;IL-17与TNF-a作用后增加PGE2的表达，使用环氧化酶(COX)一2抑制剂可抑制PGE2合成，但明显增加了IL-17诱导的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的合成及NO的释放。IL-17和干扰素(IFN)-y的协同作用可使胎儿肠上皮细胞的IL-8、mRNA表达增高。发病机理尚未完全明确，认为RA是一种自身免疫性疾病已被普遍承认。具有HLA-DR4和DW4型抗原者，对外界环境条件、病毒、细菌、神经精神及内分泌因素的刺激具有较高的敏感性，当侵袭机体时，改变了HLA的抗原决定簇，使具有HLA的有核
9、细胞成为免疫抑制的靶子。由于HLA基因产生可携带T细胞抗原受体和免疫相关抗原的特性，当外界刺激因子被巨噬细胞识别时，便产生T细胞激活及一系列免疫介质的释放，因而产生免疫反应。 细胞间的相互作用使B细胞和浆细胞过度激活产生大量免疫球蛋白和类风湿因子（RF）的结果，导致免疫复合物形成，并沉积在滑膜组织上，同时激活补体，产生多种过敏毒素（C3a和C5a趋化因子）。局部由单核细胞、巨噬细胞产生的因子如IL-1、肿瘤坏死因子a、和白三烯B4，能刺激我形核白细胞移行进入滑膜。局部产生前列腺素E2的扩血管作用也能促进炎症细胞进入炎症部位，能吞噬免疫复合物及释放溶酶体，包括中性蛋白酶和胶原酶，破坏胶原弹力纤维
10、，使滑膜表面及关节软骨受损。RF还可见于浸润滑膜的闪细胞，增生的淋巴滤泡及滑膜细胞内，同时也能见到IgG-RF复合物，故即使感染因素不存在，仍能不断产生RF，使病变反应发作成为慢性炎症。 RF滑膜的特征是存在若干由活性淋巴细胞、巨噬细胞和其它细胞所分泌的产物，这些细胞活性物质包括多种因子：T淋巴细胞分泌出如白介素（IL-2）、IL-6、粒细胞-巨噬细胞刺激因子（GM-CSF）、肿瘤坏死因子a、变异生长因子：来源于激活巨噬细胞的因子包括IL-1、肿瘤坏死因子a、IL-6、GM-CSF、巨噬细胞CSF，血小板衍生的生长因子：由滑膜中其它细胞（成纤维细胞和内长细胞）所分泌的活性物质包括IL-1、IL-6、GM-CSF和巨噬细胞CSF。这些细胞活性物质能说明类风湿性滑膜炎的许多特性，包括滑膜组织的炎症、滑膜的增生、软骨和骨的损害，以及RA的全身。细胞活性物质IL-1和肿瘤坏死因子，能激活原位软骨细胞，产生胶原酶和蛋白分解酶破坏局部软骨。 RF包括IgG、IgA、IgM，在全身病变的发生上起重要作用，其中IgG-RF本身兼有抗原和抗体两种结合部位，可以自身形成双体或多体。含IgG的免疫复合物沉积于滑膜组织中，刺激滑膜产生IgM0、IgA型RA。IgG-RF又可和含有IgG的免疫复合物结合、其激活补体能力较单纯含IgG的免疫复合物更大。
