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1、资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。临床PCR检验流程记录表检验日期： 检验项目： HBV-DNA扩增仪中保存文件名使用说明：严格按单一流向进行实验，即试剂准备区一标本制备区一扩增区，严 禁逆向移动。本记录表的流向亦遵循此流程；各项工作执行后在相应项当前的方框 内打” J”；本记录表最后归档保存在PCR实验室扩增区的专用文件夹中，以备查 找。实验前准备口试剂在有效期内扩增仪、加样器、金属浴、温湿度计等仪器在校准有效期内（校准之日起1年）口生物安全柜的滤膜在使用有效期内离心管、带滤芯吸头已经过质检合格口各区按消毒液配制SOP配制500mg/L含氯消毒液、mg/L含氯消毒
2、液和70%酒精，即用即配。口打开通风设备操作者试剂准备区实验前：口更换专用工作服、戴口罩、帽子、鞋套 口实验台面清洁（ 500mg/L含氯消毒液、70%酒精或水擦 拭）冰箱温度：冷藏室（28C） C;冷冻室（-202C） C实验室温度C（允许范围：1530C）;相对湿度： （允许范围：30%70%）PCR试剂来源：试剂厂家：口深圳匹基生物工程有限公司批号：检验项目： HBV-DNA本次实验用量： 人份；剩余量： 人份其它有关试剂配制：仪器设备使用：离心机：口正常不正常； 振荡器：口正常不正常；生物安全柜：口正常口不正常实验后：口按实验室清洁消毒SOP清洁实验室台面、地面、加样器和离心机，并进行
3、紫外线照射30分钟以上。 按实验室废弃物处理SOP处理实验废弃物。操作者检验日期:检验项目:HBV-DNA样本处理区实验前：口更换专用工作服、戴口罩、帽子、鞋套口实验台面清洁（ 500mg/L含氯消毒液、70%酒精或水擦拭）冰箱温度：冷藏室（28C） C;冷冻室（-202C） C实验室温度C（允许范围：1530C）;相对湿度： （允许范围：30%70%）HBV-DNA阳性室内质控物来源：浓度及批号：扩增位置：HBV-DNA阴性室内质控物来源：批号：扩增位置：所处理的HBV-DNA标本（对应标本接收的唯一编号）及拟扩增位置:191725334149576573818921018263442505
4、866748290311192735435159677583914122028364452606876849251321293745536169778593614223038465462707886947152331394755637179879581624324048566472808896核酸提取及加样过程：口按乙型肝炎病毒DNA荧光定量PCR操作程序SOP进行。仪器设备使用： 生物安全柜：口正常 不正常；恒温金属浴：C;离心机： 口正常 不正常；振荡器：口正常 不正常；低温离心机：制冷：口正常 不正常；离心：口正常 不正常实验后：口按实验室清洁消毒SOP清洁实验室台面、地面、加样器和离心
5、机，并进行紫外线照射30分钟以上。按实验室废弃物处理SOP处理实验废弃物。口使用后标本冷冻保存3个月，以备复查。操作者扩增及产物分析区i=i资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。检验日期:检验项目： HBV-DNA实验前：口更换专用工作服、戴口罩、帽子、鞋套口实验台面清洁（ 500mg/L含氯消毒液、70%酒精或水擦拭）实验室温 C（允许范围：1530C）;相对湿度：（允许范围：30%70%）LightCycler扩增仪操作：口开机自检及运行正常；口按LightCycler操作使用SOP进行编程、参数设定HBV-DNA标准曲线计算值:Slope值： Intercept值
6、： r2值：室内质控结果：阴性质控物结果：;阳性质控物结果：口填写室内质控记录、质控图；是否失控：口否 口是室内质控结果：阴性质控物结果：;阳性质控物结果：口填写室内质控记录、质控图；是否失控：口否 口是失控原因及分析：（失控判断标准及原因分析按室内质控SOP进行）实验结果：见所附扩增仪打印结果实验结果有效性判断：口有效无效（依据实验结果有效性判断SOP进行）实验后：口按实验室清洁消毒SOP清洁实验室台面、地面、加样器和离心机，并进行紫外线照射30分钟以上。按实验室废弃物处理SOP处理实验废弃物。操作者1.操作步骤:1.2.1取n个1.5ml的灭菌离心管，作好标记。（n二样本数+1管HCV阴性
7、对照+1管HCV强阳性对照+1管HCV临界阳性对照）1.2.2向上述离心管中分别加入25ul蛋白酶溶液。1.2.3分别加入待测样本、HCV阴性对照、HCV临界阳性对照和HCV强阳性对照各200ul.1.2.4加入200u l新鲜配制的裂解液工作液，盖上盖子，振荡15秒，充分混匀。（注意：不要把蛋白酶溶液直接加入裂解液工作液中）。1.2.556摄氏度温浴15分钟。瞬时离心，以去除管盖上的滴液。1.2.6加入250ul无水乙醇，盖上盖子，彻底混匀（振荡15秒）。在室温下静置5分钟（15-25摄氏度）。注意：如果环境温度超过25摄氏度，无水乙醇需预冷。1.2.71.2.81.2.91.2.101.2
8、.11瞬时离心，以去除管盖上的滴液。将n个核酸提取柱放入收集管中，小心地将步骤1.2.6中的液体移入核酸提取柱中。盖上盖子，6000*g离心1分钟。倒掉收集管中的废液，将提取柱重新放入收集管中。（如果离心后核酸提取柱中仍有部分液体，以更高的速度再次离心，确保提取柱中无残余的液体）小心的打开核酸提取柱的盖子，加入500ul洗液1,盖上盖子，6000*g离心1分钟， 倒掉收集管中的废液， 将提取柱重新放入收集管中。小心的打开核酸提取柱的盖子，加入500ul洗液2,盖上盖子，6000*g离心1分钟， 倒掉收集管中的废液， 将提取柱重新放入收集管中。小心的打开核酸提取柱的盖子，加入500ul无水乙醇，盖上盖子，6000*g离心1分钟，丢弃收集管，将提取柱放入新的收集管中。0*g高速离心3分钟，彻底去除乙醇。
