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1、常见色谱分析问题解疑一、产生前沿和拖尾的原因一般有哪些？（1）拖尾：1.干扰峰，优化条件分离 2 色谱柱塌陷，更换色谱柱 3 流动相pH不合适，调节pH值 4 管路没有接好，存在较大的死体积，可以重新接一下（2）前沿：1 溶剂选择不合适，选择合适的溶剂 2 样品过载，降低进样量 3 柱温太低，升高柱温 4 色谱柱损坏，更换色谱柱 5 干扰峰，优化色谱条件分离可能的问题：1.柱子问题2.流动相不恰当3.定容样品的溶剂不合适产生峰前沿的原因：柱过载，柱头塌陷，溶剂选择不对产生峰拖尾的原因：存在杂质未分开，柱污染，柱子选择不对。拖尾峰与柱子有关，可能是过载，稀释样品再做，或换新柱做吧一般产生托尾峰往
2、往是有机性相近杂质没有分开，可以优化分析方法，或更换柱子试一试；也可能由于柱子使用时间太久柱效下降出现塌陷等原因；再有也会根样品本身性质有关，基团需要流动相中添加能与之结合优化峰形的化学物质，要根据具体情况而定。柱子可能污染了吧，溶剂也可能有，或柱效下降。图谱前沿和拖尾的原因主要是流动相选择不合适，可以相应调整流动相的极性，或者适当加入酸来调整，可以得到较好的改善。一般来讲，酸碱在流动相中对于前沿和拖尾影响较大。柱前沿是可能因为柱超载，拖尾是可能因为样品被污染，选择合适的流动相，调节好PH能够改善这以情况。二、怎样避免拖尾和前沿，有何措施？选择合适的色谱条件和色谱柱，就可以避免峰拖尾和前沿在处
3、理样品时选择合适的流动相最为重要，所以在实验设计时充分了解所要分离的物质的化学性质和溶解度、极性等相关问题，摸条件时找到较好的流动相，是避免拖尾峰出现的最好方法。避免拖尾和前沿主要要控制好溶质的量，每种色谱方法有一定的线性范围，超过这一范围不对称峰则会出现。要看是由于什么原因造成的：分析物本身的性质：这类问题首先要选择合适的色谱柱，另样品的前处理非常重要，部分样品在分析过程中分解，那肯定是拖尾的。色谱柱问题：主要由于色谱柱柱效下降等引起，维护色谱柱或者更换流动相：流动相未起到抑制拖尾或者前沿的作用，应添加适当缓冲剂如三乙胺、醋酸等。三、一般拖尾比较厉害的是生物碱类成分的检测，对此类物质防止拖尾
4、有什么好的建议吗？对于生物碱类，应该选用封端了的色谱柱，减少硅羟基的作用，还有就是调节流动相的PH值来避免拖尾 对于生物碱类成分的分离关键在于加入的酸的量，因为你得让成分被色谱柱吸附后，能够很好的溶解在流动相中，即解吸附下来才行啊，所以注意你的酸的加入量吧！还有就是选择合适的色谱柱，最重要喽！ 分离碱性物质，易产生拖尾，一般我们都是在流动相中加点三乙胺（即碱性物质）.生物碱类液相色谱一般都会在流动相里加入少量碱（二乙胺或氨水等），使流动相的PH偏碱性。不过用普通的C18柱来分析可能进不了几针柱效就不行了，考虑使用宽PH范围的C18柱。关于生物碱薄层问题，可以对于薄层板的话可以用10%NaOH+
5、CMC-Na溶液进行铺板，还可以适当调节展开剂PH值来防治生物碱拖尾。应该加三乙胺吧，及三氟乙酸等调节PH值，使用氨基的色谱柱啊，不管怎么说首先考虑的是色谱柱的选择。四、 用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？ 关于漂移问题： 温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定 流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡 关于快速变化问题 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定 泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。 流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合五、
6、液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？ 筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。 存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子 可能柱超载，减少进样量。六、HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法 样品量不足，解决办法为增加样品量 样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子 样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器 检测器衰减太多。调整衰减即可。 检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数 检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。 检测池中有气泡。解决办法为排气。 记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。 流动相流量不合
7、适。调整流速即可。 检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。七、做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？ 泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理； 比例阀失效，更换比例阀即可； 泵密封垫损坏，更换密封垫即可； 溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法； 系统检漏，找出漏点，密封即可； 梯度洗脱，这时压力波动是正常的。八、最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么？ 这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。尽管过去几年来，填料的制造技术有了极大的提高，但不同的厂商的ODS填料表面硅醇基
8、的浓度不同。正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。因此，同一被分析物中的各组分在不同牌号的ODS柱上的相对保留时间就可能不同。在流动相中加入少量竞争物，如三乙基胺（TEA），将会使硅醇基的成键能力饱和，从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。如分离情况可以，系统稳定，达到系统适用性要求，就不必保留时间的重现。九、购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？ 柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。 拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查； 把色谱柱从仪器上取下，看压力是
9、否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查； 将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查；只用于使用过的柱子。 更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne 7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。十、色谱双峰产生的可能及判断和处理 HPLC分析中，在色谱柱正常，样品灵敏度足够，分析方法合适，色谱峰在出峰时
10、间较短的条件下（不包括梯度），峰型应对称而尖锐。但是，在对样品了解程度不够，方法不妥，样品处理方法及进样方式不合理下，会出现各种意想不到的问题，而对色谱峰难以作出合理的解释，尤其对于新手更是如此。下面根据本人几年工作的体会，提出一些看法，向同仁指教。 色谱双峰指的是明是一种物质，但在色谱图中出现双峰，而表明含二种物质。我将这种情况分为四种原因。1、色谱柱 如果你分析样品时发现每个色谱峰都双峰出现（出峰越快，双峰的可能性会减少），尤其采用单一纯物质时，可以肯定色谱柱出问题柱头受损或柱头固定相变脏或流失。如果进样量少，原来色谱柱正常，色谱峰的形状多为一大峰带一小峰，不一定拖尾，这一般应是柱头受堵，
11、将色谱柱反过来接，用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂，将堵在柱头的残留物冲掉，再反过来，一般情况下就行了。当然不反冲，正冲有时也会正常的。如果峰拖尾，双峰强弱相差不大，柱头固定相变脏或流失可能性更大，这是可以将进样那头拧开，将微孔滤片超声，柱头刮去一部分填料，重新填上新填料拧紧，不过这种活，需要一定技术，同时不能老干那种事，否则用不了几次，色谱柱就会应柱效很低而报废。2、溶剂极性及进样量 许多HPLC分析者对此可能不以为然，一般的HPLC的书籍和文献都不会提到这方面的内容，而这确是双峰产生的一个很重要的原因。目前HPLC分析多为反相色谱，流动相多为甲醇、乙腈、水，加各种添加剂以改善分离性能。样品一般
12、用与流动相相溶的溶剂溶解。最佳的溶解方法是用流动相溶解，但是很多情况是不一致的。当用溶剂极性强度大的试剂，如纯甲醇、纯乙腈，纯乙醇，而分析体系中以水为主，样品进样量大，如定量管为20ul，此条件下完全可以肯定，单一的纯物质出双峰，第二峰比第一峰小（每次都不太一样），且拖尾，保留时间会提前(相对进样量少而言)，将进样量减少一半以上，峰型将变为正常。这是样品的溶剂与流动相极性相差太大，而流动相来不及将其稀释达到平衡造成的。上面提到进样量造成双峰的一个原因，另一个原因是，进样量不一定大，但绝对量很大，色谱图上的双峰紧靠在一起，基本上齐高，不拖尾（如果出峰很快，也可能是色谱柱问题）。将样品稀释再进样就
13、可以了，这是由于进样量过大，色谱柱过载造成的。3、样品的特性 有些样品由于其化学结构的特点，存在互变异构现象，而这种互变异构体无法分开，而是以一个动态平衡存在。在色谱分析时，在一个特定的条件下，一种物质将出现双峰，双峰靠的很近，基本齐高，不拖尾，条件稍一变化，尤其pH，双峰现象将消失，如红霉素等。有的样品紫外的色谱图上看不到双峰，但在LCMS下，用质谱检测器，其质谱的总离子流图上较明显，例如我分析过的农药啶虫眯（吡虫清）。 4、参数 记录的参数一般都内定的，不必修改，但GC和HPLC的参数是不完全一致的，例如CR3A数据记录仪上的一般记录时间间隔GC为2ms，HPLC为5ms，如果记录间隔时间
14、缩短，一个峰将变为二个峰或更多。系统堵塞问：我的系统压力比它应该的压力高很多，是什么原因？答：首先，让我们检查一下你的前提，你怎么知道压力应该是多少？问：之前同样的柱子，同样的流动相，同样温度压力只有2000PSI。现在是两部了。我把泵压的上限设为4000PSI，泵停了。答：很好你有以前的参考数据，我们可以从这里开始排查故障。压力变大，原因很多。首先，流动相的粘度可能不对。其次，系统某个地方可能堵了。后者比较常见，但是在我们拆系统前，先检查下其他的可能。你确定你的流动相是对的？如果用的是自动混合，你溶液有没有放错？例如把甲醇和乙腈弄混了（由于两者与水混合液的粘度差异很容易导致压力不同）。如果使
15、用了柱温箱加热，确认一下它有没有工作。温度每变10粘度变化25%。所以如果你本来要开60，但是柱温箱没有工作，这样压力就会翻倍了。问：OK，这个很容易检查，其它还有哪些要检查的？答：我经常问这个问题，压力变大是在长期分析中慢慢出现还是突然出现的。如果是突然出现的，可能是有些错误发生了。让我们来检查一些东西，从简单的开始：柱子填料的颗粒大小对不对？柱子压力与颗粒大小的平方成比例变化。如果你用5um的柱子代替10um的柱子，就可以解释压力的增加了。不是这种情况，那么就有地方堵住了。首先卸掉柱子接二通，保护柱和柱前过滤器不要下下来。我们要检查的一个可能是流动相不相容，如果接分析柱在后面的操作中可能对其有损。不连柱子，检查压力，如果还有1500多psi，那么是其他地方堵了，柱子是好的。我们可以在流路上一个一个断开看哪里压力最大。通常换一个部件比清洗更有效，但我们不是随时都有备用的，所以可以考虑清洗。如果我们知道要除掉的是什么东西，那么就很容易知道怎么洗。假设
