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1、Waters 600E-2487 高效液相色谱系统操作规程1. 目的规范Waters高效液相色谱系统的使用和维护。2. 范围本规程适用于Waters高效液相色谱系统的使用和维护。3. 职责质检室仪器分析员负责Waters高效液相色谱系统的日常使用和维护。4. 系统组成本系统由Waters 600E多溶剂输送系统（有梯度控制器的高压输液泵）、Waters在线脱气机、Rheodyne 7725i手动进样阀、Waters 2487双通道紫外检测器、Millennium32色谱工作站/电脑等组成，另外还包括打印机、UPS和通风柜等辅助设备。5. 程序5.1. 准备5.1.1. 使用前应根据待检样品的检
2、验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用0.45m滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。5.1.2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。5.2. 开机和泵操作5.2.1. 开机5.2.1.1. 接通UPS的电源，依次打开断电保护器、脱气机、600E泵、2487检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。5.2.1.2. 打开Millennium32软件，按Login.，输入用户名和密码，按OK注册进入系统主界面。在Project档内选择所需的项目，右击Run S
3、amples图标，选择色谱系统“600_2487”后打开QuickSet窗口。5.2.2. 更换溶剂5.2.2.1. 打开600E泵后，转动进口集合管阀手柄（以下简称手柄）至RUN位置；5.2.2.2. 将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂，向右打开参照阀（断开柱和进样器）；5.2.2.3. 按Direct键使其显示直接控制屏幕，设流速为1ml/min（梯度配比阀在0ml/min时不工作）；5.2.2.4. 选择欲使用的某一溶剂通道，设其比例为100%，其它为0%；5.2.2.5. 将输液管从原有溶剂瓶中取出，放入一干净的空瓶中；5.2.2.6. 逆时钟转动手柄至DRAW位置，用启动
4、注射器从进口集合管阀的接口抽出约2ml溶剂；5.2.2.7. 再将输液管放入新溶剂瓶内，继续抽吸直到新溶剂出来并无气泡为止；5.2.2.8. 转动手柄至RUN位置，将启动注射器取下并排掉筒内的溶剂。5.2.2.9. 重复5.2.2.4.5.2.2.8.直至所有即将使用的溶剂更换完毕。5.2.3. 排气泡5.2.3.1. 打开参照阀，换流动相为100%超纯水，设流速为10ml/min（注意：确认参照阀是打开的，否则可能损坏安装好的柱）；5.2.3.2. 转动进口集合管阀手柄至DRAW位置，用启动注射器抽出约10ml水；5.2.3.3. 顺时钟转动手柄至INJ位置，缓慢用力使水通过泵头从参照阀出口
5、管排出（注意不要将气泡注入泵中）；5.2.3.4. 按Stop flow屏幕键停泵，关上参照阀。5.2.3.5. 如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下泵出口管，用塑料管连接至塑料烧杯中，设流速为10ml/min，冲洗25min（或更长时间）后停泵，重新接上柱。5.3. 平衡系统（分两种情况进行）5.3.1. 等度模式5.3.1.1. 每次以0.1ml/min的增量加大流速至1ml/min，以超纯水冲洗系统10min。5.3.1.2. 检查管路连接、柱接口及泵头处是否漏液，如漏液应予以排除。5.3.1.3. 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应在平均值的510%以内。如超出此范围，可初步判断
6、为柱前管路仍有气泡，重复5.2.3.下的步骤。5.3.1.4. 压力波动平稳后，换检验方法规定的流动相比例冲洗系统。在检查基线稳定性前，让最少56倍柱体积的流动相通过系统。5.3.1.5. 在QuickSet窗口下的Instrument Method档内选择所需的仪器方法，按Monitor（此后泵由软件控制），观察基线和压力变化。如果冲洗至基线漂移；5.5.2.2. 划入一段包含噪声的基线，按Next；5.5.2.3. 划入一段要积分的区间，按Next；5.5.2.4. 根据情况选择最小峰面积和最小峰高，按Next、Next；5.5.2.5. 在Name档内输入各组分峰的名称，按Next、Ne
7、xt；5.5.2.6. 在Method Name档内填写方法名称，按Finish。退出Review窗口。5.5.3. 修改标准选中所有标准，右击后选“Alter Sample”进入Alter Sample窗口。5.5.3.1. 在Sample Type档内将Unknown改成Standard；5.5.3.2. 按Amount图标（左上第六个）进入Component Editor窗口；5.5.3.3. 按Copy from Process Method图标（左上第五个），选择刚建立的处理方法，按Open，在Value和Units档内分别输入标准所含各组分的数值和单位，完成后按OK回到Alter
8、Sample窗口；5.5.3.4. 按Save图标存盘，退出Alter Sample窗口。5.5.4. 积分先选中所有标准，再选中所有未知样品，右击后选“Process”进入Background Processing & Reporting窗口，选Use specified processing methods，在右边档内选择刚建立的处理方法，按OK。5.5.5. 打印在Project窗口下选Results标签。5.5.5.1. 选中要打印的标准/样品，右击后选“Preview”进入Open Report Method窗口，选合适的打印方法，按OK进入Report Publisher (Pre
9、view)窗口，预览打印的结果。按打印(Print)图标（左上第二个）即可打印结果。5.5.5.2. 按Close可进入Report Publisher窗口对报告方法进行修改，完成后按Print图标（右数第二个）即可打印结果。5.5.6. 数据处理完成后，关闭所有窗口，在主界面下按Logout退出系统，关闭Millennium32软件，再依次关闭电脑主机、显示器、打印机。5.6. 清洗系统和关机5.6.1. 数据采集完毕后，关闭检测器，继续以工作流动相冲洗10min后，换水冲洗。5.6.2. 清洗进样阀5.6.2.1. 用启动注射器吸10ml超纯水；5.6.2.2. 将注射针导入口冲洗头（Rh
10、eodyne部件号7125-054）连接到注射器出口上（不要针），并将它们一起接到进样口上；5.6.2.3. 使进样阀保持在Inject位置，慢慢将水推入，水将通过注射针导入口、引导管、注射针导入管和注射针密封圈，由样品溢出管排出。5.6.3. 清洗柱5.6.3.1. C18柱先用超纯水以1ml/min冲洗40min以上，再用甲醇或乙腈冲洗20min。5.6.3.2. Protein PAK60柱先用超纯水冲洗90min以上，再用甲醇或乙腈冲洗40min。5.6.4. 用水冲洗柱后，分别用20ml超纯水冲洗柱塞杆外部和法兰盘上小孔。5.6.5. 清洗完成后，先将流速降到0，再依次关闭泵、脱气机、UPS，断开电源。5.6.6. 填写使用记录。
