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1、卵磷脂的提取班级学号：0820651班26号（程永刚），27号（付朝迁），28号（范卿林），29号（赵家杰）一：实验简介 磷脂是生物体组织细胞的重要成分，主要存在于大豆等植物组织以及动物的肝、脑、脾、心等组织中，尤其在蛋黄中含量较多(10%左右)。卵磷脂和脑磷脂均溶于乙醚而不溶于丙酮，利用此性质可将其与中性脂肪分离开；此外，卵磷脂能溶于乙醇而脑磷脂不溶，利用此性质又可将卵磷脂和脑磷脂分离。二：实验的试剂和材料煮熟的鸡蛋蛋黄10g，无水乙醇，乙醚，丙酮三：实验的仪器和设备研钵，三角瓶，布氏漏斗，蒸发皿，量筒，棉花四：实验的过程和步骤1：卵磷脂的提取 蛋白10g放入洁净的带塞的三角瓶中，加入95乙
2、醇40ml，搅拌15min后静置15min，然后加入10ml的乙醚，搅拌15min后，静置15min；过滤，滤渣进行二次提取，加入乙醇与乙醚（乙醇与乙醚体积比3:1）的混合液30ml，搅拌静置一定时间；一二次过滤，合并两次滤液，加热浓缩至少量，加入一定丙酮除杂，卵磷脂即沉淀出来，即得到卵磷脂粗品。2：卵磷脂的纯化 去一定量的卵磷脂粗品，用无水乙醇溶解，得到约10乙醇提取液，加入相当于卵磷脂质量的10的Zncl水溶液，室温搅拌半个小时，分离沉淀物，加入适当冰丙酮（4）洗条，搅拌1h ，再用丙酮反复研洗，直到丙酮洗液为近无色为止，得到的白色蜡状的卵磷脂，然后干燥，称得干重。五:卵磷脂的含量测定也鉴
3、定1:磷脂含量测定： 方法 一钼蓝比色法 一、实验原理将含磷脂试样加氧化锌高温灼烧，使有机磷转变成无机磷，即以磷酸盐的形式(磷酸锌为主)留存在灰分中。加酸溶解灰分，使生成的磷酸根离子与钼酸钠作用生成磷钼酸钠，遇硫酸联氨被还原成蓝色的络合物钼蓝。产生蓝色的深度与磷的含量成正比。将被测液与磷标准液在相同条件下比色定量。以磷的含量乘以适当的换算系数，即得磷脂的含量。二、仪器和试剂1、仪器：瓷坩锅或石英坩锅、分光光度计或带塞的50mL比色管、电炉、高温炉、恒温水浴、分析天平（感量0.001g）、移液管（5、10mL）、容量瓶（100、500、1000mL）、表面皿、 烧杯、量筒、漏斗、滤纸、坩锅钳、试
4、剂瓶。2、试剂：（1）50%的氢氧化钾溶液；（2）0.015%硫酸联氨溶液（w/v）；（3）2.5%钼酸钠稀硫酸液：量取140mL硫酸滴加到300mL水中，摇匀，冷却至室温，加入12.5g钼酸钠，溶解后加水定容至500mL，摇匀，静置24小时备用。（4）磷标准溶液 ：称取无水磷酸二氢钾0.4391g，加水溶解并定容于1000mL水中（含磷0.1mg/mL）。 吸取10mL 0.1mg/mL的磷标准溶液于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度（含磷0.01mg/mL）。（5）其它：盐酸、硫酸、氧化锌。 三、实验步骤1、绘制标准曲线 分别准确吸取0.01mg/mL磷标准1.0，2.0，4.0，6.0，
5、8.0mL于50mL比色管中，再分别加水至10mL；再各加入8.0mL 0.015%硫酸联氨溶液、2.0mL钼酸钠稀硫酸溶液，加塞、摇匀。然后去塞，将5只管置于沸腾的水浴中加热10min，取出冷却至室温，加水稀释至50mL，充分摇匀，经10min后，以水调零，用3cm比色皿于分光光度计上在650nm波长处，分别测定吸光度。以吸光度为纵坐标，以磷量（0.01, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08mg）为横坐标绘制标准曲线。2、制备被测液 用坩锅称取试样约10g（准确至0.001g），加氧化锌0.5g，先在电炉上加热炭化，然后送入550600的高温炉中灼烧至灰化（呈白色），灼烧时间约2小
6、时，取出坩锅冷却至室温，用热盐酸（1:1）10mL溶解灰分，并加热微沸5分钟，将溶解液过滤至100mL容量瓶中，用热水冲洗坩埚和滤纸，待滤液冷却至室温后，用50%氢氧化钾溶液中和至出现混浊，缓慢滴加盐酸使氧化锌沉淀全部溶解后，再滴2滴，最后用水稀释至刻度，摇匀。3、样品测定 用移液管吸取被测液10mL注入50mL比色管中，加入8.0mL 0.015%硫酸联氨，加2.0mL钼酸钠稀硫酸溶液，加塞，摇匀。然后去塞，将比色管置于沸腾的水浴中加热10min，取出冷却至室温，加水稀释至50mL，充分摇匀，10min后在分光光度计上于650nm波长处，同标准曲线一样测定吸光度。 四、结果计算根据被测液的吸
7、光度值，从标准曲线查得磷量（P），按公式计算磷脂含量：式中： P 从标准曲线查得的磷量(mg)； V2 样品灰化后稀释的体积(mL)； V1 比色时所取的被测液体积(mL)； 26.31 每毫克磷相当于磷脂的毫克数； W 试样重量(g)。 方法二 重量法一、实验原理 磷脂吸水膨胀后比重增大，所形成的絮状悬浮物不溶于油脂而为沉淀物，从而能和油脂分离。磷脂又具有不溶于丙酮的特性，用丙酮洗涤沉淀，所得沉淀物放入105烘箱中烘至恒重，即得到无水磷脂。 二、仪器和试剂仪器: 玻璃漏斗、漏斗架、烧杯100mL、锥形瓶、滤纸、天平（感量0.001g）、电热烘箱;试剂: 丙酮 三、操作步骤1、取混匀试样100
8、mL，加热约90时进行过滤。2、用烧杯称取试样25g，加热至80后，加入22.5mL水，充分搅拌使之水化，在室温下静置过夜，或进行离心沉淀。3、倾出上层清液，用已经恒重的滤纸进行过滤（或用抽气装置抽滤）。待滤液全部滤出后，用冷丙酮把杯内残留的沉淀冲洗入滤纸中，继续用丙酮洗涤滤纸和沉淀，洗至无油迹为止。4、待滤纸和沉淀上的丙酮挥尽后，送入105烘箱，烘至恒重。 四、结果计算油品试样的磷脂含量按下式计算： 式中： W2 一 沉淀物加滤纸重（g） W1 一 滤纸重（g） W一 油样重（g）方法三 水化离心法一、实验原理 同重量法。 二、仪器和试剂仪器：天平（ 感量0.001g）、电热烘箱、离心管 1
9、0ml、离心机、烧杯 100ml、移液管 、 玻棒试剂：丙酮 三、操作步骤1、将干净的离心试管和玻棒置于100mL烧杯中，烘干、冷却后称量。2、称取在6570时过滤的油样10g 左右，注入离心管，放入烘箱中加热至40取出。3、用移液管向离心管中加水0.5mL，用玻棒猛烈搅拌1min。然后取出玻棒，在离心管边上刮净玻棒上的油，将离心管放入离心机中进行分离，直至吸水膨胀后析出的磷脂沉于离心管的底部。4、先倾出上层清油，再将磷脂离心分离，再倾出上层清油。离心管中沉淀物用丙酮进行洗涤，离心分离，倾出丙酮液。如此用丙酮反复洗涤分离34次，直到所得丙酮无油迹为止。5、把盛有沉淀物的离心管和玻棒放入盛有离心
10、管的烧杯中，置105烘箱内烘至恒重。 四、结果计算油脂的磷脂含量按下式计算： 式中 ： W1 一 沉淀物重（g ） W2一 油样重（g） 2:卵磷脂的鉴定： 1：三甲胺的检验：取干燥试管一支，加入少量提取的卵磷脂以及25mL氢氧化钠溶液，放入水浴中加热15min，在管口放一片红色石蕊试纸，观察颜色有无变化，并嗅其气味。将加热过的溶液过滤，滤液供下面检验。 2：不饱和性检验：取干净试管一支，加入10滴上述滤液，再加入12滴3%溴的四氯化碳溶液，振摇试管，观察有何现象产生。 3：磷酸的检验：取干净试管一支，加入10滴上述滤液和510滴95%乙醇溶液，然后再加入510滴钼酸铵试剂，观察现象；最后将试管放入热水浴中加热510min，观察有何变化。 4：甘油的检验：取干净试管一支，加入少许卵磷脂和0.2g硫酸氢钾，用试管夹夹住并先在小火上略微加热，使卵磷脂和硫酸氢钾混熔，然后再集中加热，待有水蒸气放出时，嗅有何气味产生。六：数据处理所得卵磷脂的质量为2.123g.卵磷脂的收率=2.123/18.4 * 100% =11.54%七：存在的问题与建议，实验注意事项 1：蒸去乙醇时需不断搅拌，勿蒸干。 2：两次滤液要混合。 3：蒸发乙醇不得在电炉子上。 4:乙醇和丙酮用量要合适。
