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1、孕妇与不孕症妇女解脲支原体、沙眼衣原体感染的研究 要迎春一、课题名称：孕妇与不孕症妇女解脲支原体、沙眼衣原体感染的研究二、立项依据：解脲支原体（Uu），沙眼衣原体（Ct）感染在临床上非常多见, 已经成为医学界普遍关注的问题. 孕妇和不孕症妇女都是Uu和Ct的易感人群，Uu, Ct是孕妇和不孕症妇女生殖道感染的最常见的两种病原微生物，我们就妊娠期和不孕症患者Uu, Ct感染作出初步研究，研究两者Uu和Ct感染的情况，以便进一步做好围产期保健，提高妊娠质量及查找不孕症患者的病因，便于临床治疗。 三、研究方案1、研究目标：了解孕妇与不孕症妇女解脲支原体(Uu), 沙眼衣原体(Ct)感染的情况. 方法
2、：孕妇534例和不孕症患者124例分为两组取其宫颈分泌物检测Uu，CtDNA，并抽取空腹血清，采用Uu, Ct蛋白芯片方法检测两组血清中的Uu，Ct IgG抗体，以了解两组患者Uu, Ct感染的情况. 结果：孕妇与不孕症妇女Uu感染率无统计学差异，而Ct感染率则不孕症妇女明显高于孕妇(P0.05). 结论：Ct感染在不孕症的病因中更具意义。2、研究对象： 1、对象200307/2004 02来我院妇产科和生殖门诊就诊的孕妇534例和不孕症妇女124例（丈夫精液分析正常，多数为继发性不孕患者），检测其血清Uu和Ct IgG抗体及宫颈分泌物Uu和Ct DNA3、研究的方法用PCR方法检测孕妇及不孕
3、症妇女宫颈分泌物Uu和Ct DNA，其取材方法是：用扩阴器扩开阴道后，取消毒棉拭子，拭净宫颈外口分泌物，弃去. 再取一支棉拭子，伸入宫颈管内，停留30 s，沿管壁旋转3 wk后取出. 放入装有1 mL无菌生理盐水的试管中，充分悬浮，再挤干拭子中的水份，取出拭子，弃去. 试管于-4冰箱保存待检. 试剂由上海复星医学科技发展有限公司提供，操作严格按照试剂盒说明书进行. 扩增产物经含EB染色剂的琼脂糖凝胶电泳，将凝胶置于紫外检测分析仪上观察，如在450 nm处出现橙黄色条带，则标本中有Uu核酸存在，如在225 nm处出现橙黄色条带，则标本中有Ct核酸存在. 检测结果见Fig 1. 用蛋白芯片(南京大
4、渊生物医学试剂有限责任公司)方法检测两组血清中的Uu和Ct IgG抗体. 此蛋白芯片是渗滤式免疫反应芯片，使用间接法原理，胶体金标记. 可分型检测，多项同检. 以微孔滤膜为载体，利用微阵列技术将纯化的UuI, II群及CtLGV, CtBT群特异性蛋白固相于同一膜片上，并利用微孔滤膜的渗滤、浓缩、凝集等，使病原抗体反应在固相膜上快速进行，再以免疫金作为标记物直接在膜上显色，显色后的芯片放入芯片识别仪，在专门软件支持下对不同点阵的灰度值进行分析，实现了对两种病原体的抗体进行同步检测.4、资料统计分析：采用SPSS统计软件11.5进行统计学分析，2检验. P0.05,认为差异有统计学意义.5、可行
5、性分析2.1孕妇与不孕症妇女宫颈分泌物Uu和Ct DNA检测情况将不孕症患者组设为第一组，例有文献报道，PCR检测法检测Ct灵敏度及特异性可达94100，可作为临床检测的实用方法，尤其适用于Ct感染的早期诊断和无症状携带者的检查. 蛋白芯片法目前正开始应用于临床，蛋白芯片法是一种检测Uu和Ct的新方法，具有快速、简便、经济等优点，但其准确率稍低于PCR检测法. 我们采用PCR检测法和蛋白芯片法同时检测，可提高检测数为124例，孕妇组为第二组，例数为534例. 两组患者采用PCR方法检测Uu和Ct DNA不孕症患者Ct感染率显著高于孕妇组（P0.05）. 不孕症患者与孕妇Uu的感染率无统计学差异
6、，均在33%左右. 两组Uu和Ct感染的总阳性率无统计学差异2.孕妇与不孕症妇女蛋白芯片法检测两组血清中的Uu，Ct IgG抗体情况同样将不孕症患者组设为第一组，孕妇组为第二组. 两组患者采用蛋白芯片法检测两组血清中的Uu和不孕症患者与孕妇染率无统计学差异。6、研究成果Uu和Ct感染是不孕症的重要因素. 女性感染支原体可导致生殖道炎症，使黏膜细胞坏死，输卵管纤毛运动停滞，引起不孕1. 不孕症妇女Uu和Ct感染的阳性率,各地报道不一, Uu感染率为27.2%47.1%, Ct感染率为23.8%44.1% 2-4. 本研究中，不孕症妇女Uu感染率为33.06%37.10%，与各地报道一致，但Ct感
7、染率在10以下，显著低于前述研究，可能有地域差异. 不孕症患者Uu和Ct感染的阳性率明显高于正常未怀孕妇女. 孕妇Uu感染率可高达40%80%. Ct感染率国内报道为1%34%，国外报道为2%47% 5，6. 一般人群支原体感染率为19.35%，衣原体感染率为0.05% 7. 妊娠时由于多种激素水平的改变，机体内环境变化从而更适于一些微生物的生长，其中包括Uu和Ct的繁殖，此外，妊娠期妇女处于免疫抑制状态，多种病原体乘虚而入，所以孕妇的Uu和Ct感染率较正常非孕妇高. 可见，不孕症妇女和孕妇均是Uu和Ct感染的高危人群，所以对不孕症患者及孕妇进行Uu及Ct的检测是防治不孕症及防治围产期并发症的
8、重要方法. 从研究结果看出，不孕症患者和孕妇Uu的感染率均明显高于Ct的感染率，但前者Ct感染率显著高于后者. 李琰等8报道，原发不孕，继发不孕的Uu DNA阳性率分别为26.7%，34.4%，而正常早孕为8%，Ct DNA阳性率分别为26.0%，23.8%，而正常早孕为6%，提示Uu及Ct感染率均明显高于正常早孕组. Uu和Ct同时感染是引起不孕的重要原因之一四、参考文献1 赵晓岚，楚雍烈，叶国玲,等. 反复流产和不孕症与支原体和免疫因素地关系J. 第四军医大学学报，2003；24（20）：1884-1886.Zhao XL, Chu YL, Ye GL, et al. Associatio
9、n of myloplasma and immune factors with recurrent spontaneous abortion and sterilityJ. J Fourth Mil Med Univ, 2003；24（20）：1884-1886.2 张兰英,王成瑜. 不孕症妇女解脲支原体、沙眼衣原体的临床分析J. 中国计划生育学杂志，2002；12（86）：746-748.Zhang LY, Wang ChY. Clinical analysis of infection of ureaplasma urealyicum and chlamydia trachomatis i
10、n infertilityJ. Chin J Planned Parenthoodol, 2002；12（86）：746-748.3 朱军，王卫萍，陈亚利，等. 聚合酶链反应和DNA探针杂交法检测沙眼衣原体的比较J. 东南大学学报（医学版），2003；22（1）：35-38.Zhu J, Wang WP, Chen YL, et al. Comparing of detecting chlamydia trachomatis with polymerase chain reaction and DNA probe intercrossJ. J Southeast Univ (Med Sci E
11、d), 2003；22(1):35-38.4 胡德芬，段炼，刘晓兰. 生殖道沙眼衣原体和解脲支原体119例分析J. 第三军医大学学报，2001；23（12）：1497-1498.Hu DF, Duan L, Liu XL. Clinical analyses of 119 cases of chlamydia trachomatis and ureaplasma urealyticum in genital ductJ. Acta Acad Med Mil Tert, 2001；23（12）：1497-1498.5 陆春，朱国兴，顾米泉，等. 子宫颈解脲支原体、人型支原体和沙眼衣原体感染186
12、6例分析J. 中国实用妇科产科杂志，2001；17（12）：729-730.Lu C, Zhu GX, Gu MQ, et al. Clinical study on the infections of neisseria gonorrhoeae, ureaplasma urealyticum, mycoplasma hominis and chlamydia trachomatis in cervices in 1866 casesJ. Chin J Practical Obstetrics Gynecol, 2001；17（12）：729-730.6 郭英花，刘颖. 沙眼衣原体及解脲支原体与胎膜早破、早产的关系J. 中日友好医院学报，2002；16（1）：11-13.Guo YH, Liu Y. The relationship between chlamydia trachomatis or ureaplasma urealyticum infection and premature rupture of membrane or premature deliveryJ. J ChinaJapan Friendships Hospital, 2002；16(1) ：11-13
