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1、液相基本术语及操作液相色谱检测1 仪器的基本知识及术语仪器构造：液相色谱仪主要包含泵、进样器、色谱柱、检测器；仪器分类：液相色谱仪属于精细仪器中的色谱仪器；依照分为离体制，吸附、分派、离子互换、亲和色谱，体积排阻色谱；依照流动相与固定相的极性，分为正相色谱法和反相色谱法；1.2.2高效液相色谱法的应用范围：高效液相色谱法合用于高沸点不易挥发、受热不稳固易分解、分子量大的，不一样极性的有机化合物，生物活性物质和多种天然产物，合成的和天然的高分子化合物等。仪器检定：液相色谱仪检定周期为1年，在两次检定间期内进行一次时期核查，也能够依据状况增添核查次数；保护养护：对于液相保护方式主假如周保护和日保护
2、，此中周保护包括联机系统及中工作站软件保护、数据库整理备份、检测器自检、维护单向阀、溶剂砂芯滤头、进样器、电机泵检查保护、溶剂瓶冲洗等；日保护包含环境温度、环境湿度、色谱柱温度、压力流速、进样口能否干净、进液处的砂芯过滤头能否干净、流动相互换时能否有积淀；色谱法的常用基本术语基线：在色谱操作条件下,没有被测组分经过判定器时,记录器所记录的检测器噪声随时间变化图线称为基线.死时间,保存时间及校订保存时间:从进样到惰性气体峰出现极大值的时间称为死时间,以td表示.从进样到出现色谱峰最高值所需的时间称保存时间,以tr表示.保存时间与死时间之差称校订保存时间.以Vd表示.死体积,保存体积与校订保存体积
3、:死时间与载气均匀流速的乘积称为死体积,以Vd表示,载气均匀流速以Fc表示,Vd=tdxFc.保存时间与载气均匀流速的乘积称保存体积,以Vr表示,Vr=trxFc峰面积：流出曲线(色谱峰)与基线构成之面积称峰面积,用A表示.拖尾因子：是反应峰对称性的指标，计算公式：拖尾因子T2d1（其中为5%峰高处的峰宽，d1为峰极点至峰前沿之间的距离）。峰高与半峰宽:由色谱峰的浓度极大点向时间座标引垂线与基线订交点间的高度称为峰高,一般以h表示.色谱峰高一半处的宽为半峰宽,一般以x1/2表示；色谱检测的特征（ 1）敏捷度高；（ 2）线性范围宽；（ 3）分别度与柱效、选择因子、容量因子、剖析时间的关系：（ 4
4、）分别度与柱效的平方根成正比，选择因子一准时，增添柱效；（ 5）分派系数与分派比都是与组分及固定相的热力学性质有关的常数，随分别柱温度、柱压的改变而变化：一般经过改变固定相和流动相的性质和构成或降低柱温，可增大选择因子；（ 6）增大选择因子的最有效方法是选择适合的固定液。对于液相色谱，改变流动相的构成，能够有效控制k；2 仪器的操作规程日立液相设施L-2000/2400操作规程使用环境环境温度：455；相对湿度：小于95%RH。使用前准备检查所用溶液(如流动相，乙腈等)能否足够。检查线路能否连结正常。设施操作方法详细操作以下：(1) 挨次开启泵开关，检测器开关，自动进样器开关，柱温箱开关；(2
5、) 翻开软件，点击“i”按钮，出现联机界面，点击“Iinitialize”ini?.laiz按钮，当文本框出现文字时，表示联机成功；(3) 检查所用方法能否切合要求。如不切合，进行设置；(4) 开泵。检测详细操作以下：(1) 成立所需样品盒；(2) 点击检测按钮，选择刚成立的样品盒；(3) 第一进行走基线；(4) 当基线走平常，点击系列样品检测按钮，进行标样，样品检测；(5) 当标样检测结果出来时，翻开结果窗口，选择所需标样结果，点击“Recalculateri:k?lkjuleit进行从头计算，而后点击“Calibration”k?librei?n进行定标；(6) 当样品结果出来时，翻开结果
6、窗口，选择所需样品结果，点击“Recalculate”ri:k?lkjuleit进行从头计算，然后点击“ModifyReport”m?difai,?rip?:t,出现结果报告，即可查察样品详细结果。改换流动相详细操作以下：(1) 当流动相快不够时或异样时，及时改换流动相；(2) 先把泵封闭，将流动相进口放入新流动相中；(3) 将泵阀逆时针旋转，进行排气。大概3分钟后，封闭排气功能；(4) 排气完成后，将泵阀顺时针旋转拧紧，开泵；(5) 走基线，当基线走平常，开始做标样，做样。关机详细操作以下：(1) 先把泵封闭，将流动相进口改换为超纯水；(2) 将泵阀逆时针旋转，进行排气。大概3分钟后，封闭排
7、气功能；(3) 排气完成后，将泵阀顺时针旋转拧紧，开泵；(4) 用超纯水冲刷管路大概20分钟；(5) 把泵封闭，将超纯水改换为100%甲醇或100%乙腈；(6) 将泵阀逆时针旋转，进行排气。大概3分钟后，封闭排气功能；(7) 排气完成后，将泵阀顺时针旋转拧紧，开泵；(8) 用100%甲醇或100%乙腈冲刷管路大概30分钟；(9) 关泵，关液相软件，关泵开关，检测器开关，自动进样器开关，柱温箱开关。保护养护、注意事项(1) 进行旬保护检查工作，主要检查事项：软件能否正常、温度、冲洗、进样器、泵单元；(2) 每次丈量行进行标样检测，斜率达到%要求才能检测样品，测完样品及时清理。(3) 按要求进行每
8、日2个小时以上的冲洗。Waters高效液相色谱-2695/2489开机自检详细操作以下：(1)翻开Alliance?lai?ns2695和2489的电源开关至ON(1)的地点，仪器开始进行自检；(2) 仪器将进行大概5分钟的自检过程，待仪器自我测试完成后，出现以下画面，画面上方的状态显示区会出现“Idle”aidl状态，表示开机测试正常。2.2.2流动相有机溶剂要求用色谱纯(进口名牌最好)，水或缓冲盐溶液要用超纯水(电阻率：18.2M)，每48小时制备新鲜的水相流动相,特别是100%含水流动相使用时间不超出两天。6根管子都在液面以下。溶剂的位置必须高于溶剂混合阀(GradientProport
9、ioningValve)。greidi?ntpr?p?:?ni?v?lv冲洗柱塞密封垫(SealWash)si:lw?的溶液：含5%10%甲醇的超纯水。洗针液(NeedleWash)ni:d?lw?：50%甲醇：50%水(该比率仅合用于反相试验)。注:以上溶剂或溶液均需用m的膜过滤并超声脱气1分钟，用干净的玻璃容器盛放,防止污染，同时玻璃容器应用超纯水来冲洗而不可以用自来水。2.2.3灌输柱塞密封冲洗冲洗操作步骤：(1)回到Menumenju:画面，选择Diag；(2)确立SealWashsi:lw?的管路放在正确的地点；(3)按PrimeSealWashpraimsi:lw?，再按Start
10、，直到清洗溶剂流出泵杆密封圈冲刷废液管，按Halt；h?:lt(4)按Close。注意：密封圈冲洗(Sealwash)si:lw?溶剂，在反相液相色谱中可使用Water/MeOHmethylalcohol甲醇=90/10或Water/Acetonitrile同溶剂)。?sit?unaitril乙腈=95/5(依据实质需要使用不灌输针头冲洗操作步骤：回到Mainmein的画面，选择Diag，选择PrimepraimNdlWash。设定值为30秒，若想要多冲洗几次时，请按StartAgain。冲洗溶剂：50%的甲醇溶液注意：若上述冲洗溶剂没法防止进样时的交错污染，使用较强的溶剂系统来进行冲洗操作。
11、翻开真空脱气机如液相仪管路干，可进履行用，如管路不干则依照以下步骤进行操作：按“Menu/Status”steit?s键，进入Status(1)画面；利用方向键将光标移至“Degasser”di:g?s?地点，按Enter；利用上下键选择模式为ON。注意：在开启除气装置时，要确认所有溶剂管路都充满溶剂；若没有溶剂时请履行溶剂的DryPrimedraipraim操作。2.2.6ditekt履行干灌输确定流动相溶剂的管子放在正确的位置，检测器(Detector?)废液管及定量环(SampleLooplu:p)的废液管能否搁置于适合的废液容器中。摇动溶剂瓶内的过滤器(SolventFilter)防备
12、气泡附着在过滤器的表面面。将空的针筒插入抽液阀(Prime/Ventvalue)旋转3圈。s?lv?ntfilt?，中，以逆时针的方向按“Menu/Status”steit?s键，进入Status(1)画面，按“DirectFunction”direktf?k?n功能键，选择DryPrime，按Enter。按下边使用的溶剂开启阀门(比如:OpenA)，而后将针筒向外拉，抽出510mL溶剂并完全抽出溶剂管子内的气泡，完成后关闭Prime/Vent阀门。在“Enteraduration”djurei?n中输入3分钟，按“Continue”键，泵即以min的流速进行冲洗(Purge)。可重复上两个步骤，将所要使用的流动相溶剂DryPrime。2.2.7履行湿灌输按“Menu/Status”键，进入Status(1)画面，利用方向键将光标移至“Composition”k?mp?zi?n字段，将欲WetPrime的溶剂输入100%。按“DirectFunctionPrime，按Enter。”direktf?k?n功能键，选择WetWetPrime的原设定值，一般为FlowRate:min，Time:，而后按下“OK”键，泵即开始进
