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1、旱莲草对衰老小鼠自由基代谢的影响【摘要】目的： 探讨旱莲草对衰老小鼠体内氧自由基代谢的影响. 方法： 以D半乳糖致亚急性衰老小鼠为模型,测定脑组织中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性及丙二醛(MAD)含量，脑细胞膜Na+K+ATP酶、Ca2+APT酶活性. 结果： 与模型组比较,旱莲草组可明显提高脑组织SOD()和GSHPX()的活性；提高脑细胞Na+K+ATP酶()、Ca2+APT酶()活性，降低MDA含量(). 结论： 旱莲草具有明显的抗衰老作用，其作用机制可能与其清除自由基的作用有关.【关键词】旱莲草；自由基；衰老0引言旱莲草为菊科一年生草本植物鳢肠Ecliptaprostratal
2、的全草，江南诸省均有分布，为常用中药之一. 祖国医学认为旱莲草入肝、肾经，具有滋阴补肾、凉血止血之功效. 主治牙齿松动，须发早白，眩晕耳鸣，阴虚血热之吐血、尿血、便血、崩漏等. 旱莲草对老龄小鼠氧自由基代谢影响少见报道，我们采用D半乳糖致亚急性小鼠衰老模型，观察研究旱莲草的抗衰老作用,初步探讨其作用机制.1材料和方法1材料D半乳糖. 超氧化物歧化酶(SOD)，谷胱甘肽过氧化物酶，Na+K+ATP酶、丙二醛(MDA)检测试剂盒. 旱莲草购自河南省南阳市医药公司. 751型紫外分光光度计;XHF21高速离心机;XW 280A旋涡混合器;电子分析天平;电动玻璃匀浆机. 雄性昆明种小鼠50只，体质量(
3、255) g，由南阳医学高等专科学校实验动物中心提供.方法旱莲草水煎剂的制备取旱莲草500 g加自来水2500 mL煎煮30 min,四层纱布过滤，药渣用2000 mL自来水煎煮30 min过滤，合并滤液，浓缩至1 kg/L,高压灭菌,4冰箱保存备用.动物分组及给药将50只小鼠随机分成5组，每组10只，即空白对照组，模型组，旱莲草低、中、高剂量组. 实验组分别以8 g/(kgd), 16 g/(kgd), 24 g/(kgd)旱莲草煎液灌胃给药，1次/d. 对照组、模型组每日灌胃等量生理盐水.造模方法模型组和旱莲草低、中、高剂量组每日颈背部皮下注射10 g/L D半乳糖 g/，空白对照组注射等
4、量生理盐水.小鼠脑组织匀浆制备给D半乳糖及受试药42 d 后,断头处死小鼠，迅速取出小鼠脑，用冰冷的生理盐水洗2次,滤纸拭干称质量，剪碎组织块后，倒入匀浆瓶中，量取9倍生理盐水，先取少量倒入装有组织块的匀浆瓶中，冰水中匀浆15 min，然后将余下的生理盐水加入，制成100 g/L的脑组织匀浆.脑组织SOD酶、GSHPX酶活力及MDA含量测定 脑组织SOD酶活力的测定： 取上述脑组织匀浆4000 r/min离心15 min，取上清液5 L，按试剂盒说明书方法，测定A值； 脑组织GSHPX酶活力的测定： 取脑组织匀浆上清液，按试剂盒说明书方法，测定A值； 脑组织MDA含量测定：以硫化巴比妥比色法
5、取匀浆上清液，制备标准管、空白管、测定管，分别在532 nm处1 cm光径比色杯，蒸馏水调零，测A值.脑组织细胞膜Na+K+ATP酶、Ca2+ATP酶活性测定取脑组织匀浆以10 625 g离心20min，按试剂盒说明书提取细胞膜测 Na+K+ATP酶活性.统计学处理： 实验数据用xs表示,采用方差分析处理数据.2结果旱莲草对D半乳糖亚急性衰老小鼠脑SOD，GSHPX，MDA含量的影响给予D半乳糖后,与对照组比较，小鼠脑中的MDA含量明显增加() ,SOD，GSHPX的活性和脑细胞膜明显下降(). 同时给予旱莲草制剂组能明显降低脑中的MDA含量,提高SOD，GSHPX的活性(表1).表1旱莲草对
6、D半乳糖衰老模型小鼠脑组织中SOD，GSHPX，MDA含量影响，vs对照； ，vs模型.旱莲草对D半乳糖亚急性衰老小鼠脑细胞Na+K+ATP酶及Ca2+ATP酶活性的影响给予D半乳糖后,与对照组比较，小鼠脑细胞Na+K+ATP酶及Ca2+ATP酶活性明显降低( )，同时给予旱莲草制剂组能明显提高脑细胞Na+K+ATP酶及Ca2+ATP酶的活性.表2旱莲草对D半乳糖亚急性衰老小鼠脑细胞Na+K+ATP酶及Ca2+ATP酶活性的影响，vs模型； vs对照.3讨论机体衰老的分子机制包括诸多因素，而自由基的损伤在衰老机制的研究中占有重要的地位. 机体在代谢过程中可产生羚自由基(HO-),琉自由基(RS
7、-),氢过氧物自由基(HO2)等活性氧，这些自由基组织内一旦生成，则可损伤邻近的生物膜或其它组织生物大分子包括糖类、蛋白质、DNA和脂质，使组织遭受损伤. 尤其是使DNA碱基发生羟化等修饰及多核昔酸链断裂，使DNA的复制与转录受到严重干扰，加速机体的衰老过程1-2. 细胞内Ca2+的超载也与衰老密切相关3.D半乳糖所致的亚急性痴呆模型，已为大多学者所公认，长期注射D半乳糖使其在细胞内大量集聚，造成代谢紊乱，导致过多自由基的产生. 体内存在的氧化防御系统包括超氧化物歧化酶( SOD)，谷胱甘肤过氧化物酶( GSHPX)和过氧化氢酶(CAT)等，对抗氧化应激反应，清除机体内产生的自由基.本结果证实
8、旱莲草可以减少衰老小鼠脑组织中MDA的产生，增加SOD, GSHPX的活性. 旱莲草通过减少脑中氧自由基的产生，增强清除氧自由基的能力，提高机体抗氧化的功能，抑制机体、组织、细胞的过氧化过程. 并能明显提高脑细胞Na+K+ATP酶及Ca2+ATP酶的活性，防止细胞内Ca2+超载而延缓衰老.【参考文献】1 包金风，包金云，李锦明，等. 脑力智宝对D半乳糖所致亚急性衰老小鼠的抗衰老作用及机制J. 中国老年病学杂志，2004,24(8):742-744.2 压德生，张守信. 老年性痴呆M. 北京： 人民卫生出版社，2001:233-237.3 李笑萍，喻培先，赵冬. D半乳糖衰老模型观察的新指标J. 中国现代应用药学杂志， 2004，21(6):442-444.
