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1、项目名称探讨替米沙坦对人肾小管上皮细胞尿酸盐转运蛋白hUA表达的影响及其作用机制、立题依据(包括国内外研究现状分析)近年来研究表明，血尿酸升高与肾脏疾病、动脉粥样硬化程度及冠心病、心肌梗 死、原发性高血压、脑卒中、总心血管事件的发生率、死亡率和总死亡率等呈独立相 关性，不依赖于一些常见的心血管危险因素及肾损伤指标。尿酸排除减少或生成增加可导致高尿酸血症，其中 90%是因为尿酸排泄减少所 致。人体的尿酸约三分之二经肾脏排泄。原发性高尿酸血症主要由于近段肾小管上尿 酸盐运转蛋白异常所致，属多基因遗传缺陷。由于尿酸盐为极性分子，不能自由通过细胞膜，因此，其在近曲小管的重吸收和 分泌过程依赖于离子通道
2、，当中起主导作用的即是尿酸盐运转蛋白。近年来，运用生 理、分子生物学和细胞生物等多种技术研究肾脏尿酸盐的运转，现已明确有4种尿酸 盐转运蛋白参与人近曲肾小管对尿酸盐的转运，即生电型的尿酸盐转运体(human urat transporter, hUAT)、电中性的尿酸盐 /阴离子交换体(human urate anion transporter 1, hURAT1)、有机阴离子转运体(human orga nic an io n tran sporter,hOAT1)和 hOAT3。其中hUAT主要参与肾近曲小管对尿酸盐的分泌，hURAT1主要参与肾近曲 小管对尿酸盐的重吸收，hOAT1和hO
3、AT3与管周细胞对尿酸盐的摄取有关。研究发 现hUAT蛋白通道对亚酸盐的选择性比其他离子高，是一个生电性的高选择性的盐酸 盐单向运转通道，在肾脏上皮细胞中起到重要的运转盐酸盐的作用。而hUAT活性降 低和（或）hURAT1的活性升高以及hOATI和hOAT3活性的改变可成为高尿酸血症的 重要发病机制。高浓度的尿酸对肾脏组织有着直接的致病作用。我们前期实验发现，大鼠肾小管上皮细胞存在UAT的表达（见附图1），替米沙 坦具有降尿酸的作用，可能是通过升高UAT的表达来完成的（见附图2-4 ），但并非 所有ARB类药物均具有降尿酸作用。国外有研究表明替米沙坦是药物结构比较独特 的ARB，除能阻滞肾素一
4、血管紧张素系统外，还具有部分过氧化物酶体增殖物活化 受体（PPAR ）激动剂的功能，并能调控血糖、脂肪生成及代谢、胰岛素敏感性相关基 因以及抑制炎症因子产生。且替米沙坦的此种作用并不依赖于血管紧张素II受体的阻 滞作用，研究证实，在缺乏血管紧张素受体的情况下，替米沙坦仍然能部分激活PPAR Y,是唯一一个在治疗浓度内能激活PPAR-丫的ARB，对PPAR-Y作用最强。而与替 米沙坦结构类似的罗格列酮有降尿酸的作用，且是通过调节 UAT表达完成的。那么， 替米沙坦是否是通过激活PPARY来调节UAT的表达的呢？目前国内外尚无相关报 道。附图1大鼠肾小管上皮细胞存在UAT表达（免疫荧光）必X1-
5、-T |- 汁- 敘r 暑嚼W-T VI 占 jT- 1 -A曲T溶解曲线吸收曲线附图2不同浓度替米沙坦干预后大鼠肾小管上皮细胞 UATmRNA表达变化（实时 荧光定量PCR）附图3P-catin UAT TGF-pl a-SNA不同浓度替米沙坦干预后大鼠肾小管上皮细胞 UAT、TGF-B1、a-SMA蛋白表达变化( Western Blot )CAPBH 1UAT TGf-pi附图4 不同浓度替米沙坦干预后大鼠肾脏提取蛋白UAT、TGF-p 1表达变化(Western Blot )一、研究内容和预期目标1. 通过体内实验，观察替米沙坦对痛风性肾病患者SUA、SCr、PPAR-丫、NO表达 的
6、影响，明确替米沙坦降尿酸的作用及机制。2. 通过体外实验，观察人肾小管上皮细胞（HK-2 ）尿酸盐转运蛋白hUAT的表达 及定位。探讨在正常及高尿酸条件下HK-2上hUAT、PPAR-丫、NO、CO-X2、MCP-1、TGF- Bl的表达情况，观察替米沙坦、罗格列酮及PPAR-Y阻断剂HL005干预后其表达变化， 进一步明确替米沙坦降尿酸及保护肾脏的机制。三、研究方法和技术路线及可行性分析四、项目创新点1临床及基础实验相结合，共同探讨替米沙坦降尿酸作用及机制；2采用共聚焦显微镜等先进手段进行hUAT等指标检测。六、项目年度计划安排（2014年12月至2016年12月）时间工作安排2014.12-2015.2购买试剂，进行预实验201532016.1培养人肾小管上皮细胞（HK-2 ），观察其尿酸盐转运蛋白hUAT的 表达及定位。检测在正常及高尿酸条件下HK-2上hUAT、PPAR- Y、NO、CO-X2、MCP-1、TGF-p1的表达情况，观察替米沙坦、 罗格列酮及PPAR-Y阻断剂HL005干预后其表达变化，探讨替米 沙坦降尿酸及保护肾脏的机制。收集整理相应资料，撰写论文。201532016.12收集痛风性肾病患者100例，观察替米沙坦对痛风性肾病患者SUA、SCr、PPAR-丫、NO表达的影响，明确替米沙坦降尿酸的作用及机制。收集整理相应资料，撰写论文。
