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1、外周血白细胞的分离:(细胞分离液有市售,有各种型号:白细胞、单核细胞淋巴细胞等分离液)1 取3ml正常人的外周血(枸橼酸钠抗凝)与等体积pbs混匀后小心的加于6ml白细胞分离液液面上,1500r/min离心20 min。(或先将抗凝血离心,然后吸取中间白细胞层,再混以等体积pbs然后小心加于等体积细胞分离液液面上,离心同上)2 吸取中间云雾状白细胞,加34mlPBS后3000 r/min离心10 min。3 弃上清,加1ml PBS洗涤沉淀后,将细胞悬液转移至1.5mLEp管中。4 3000r/min离心20 min,弃上清。即得白细胞 可以试试红细胞裂解液提供我的配方:氯化铵82.9克;重碳
2、酸钾10.0克;EDTA0.37克;用三蒸水配成1升 所有的细胞培养都应该坚守无菌操作原则2.分层后的确有3层,准确说来是4层,最下面是红细胞,上面的一层不应该是稍微混浊的白色,应该也比较透明,这一层上面就是我们需要的薄细胞层,最上面是血清3.细节:a.淋巴细胞分离液要避光保存b.就您的试验看来,淋巴细胞分离液的问题可能是最主要的c.首先再离心管中加入淋巴细胞分离液,然后把标本缓慢加在淋巴细胞分离液表面上,一定要缓慢小心操作,切不可混匀d.所有操作都应在无菌环境进行e.把离心管放入离心机是也应小心,不要太大幅度的摇幌离心管,当然离心后拿出来也要小心就这么多了吧,这个操作是不是很难的,比较基本祝
3、您好运了!.参考方法:人外周血, 肝素抗凝(100U m l) , 等量无血清培养液(或者PBS等缓冲液)稀释。按12 的体积比缓置于比重1. 077 g/m l 的淋巴细胞分离液, 1000 g 离心30 m in, 收集培养液2分离液界面上的单个核细胞。于无血清培养液, 400g 离心10 m in, 洗涤2次。用培养液重新悬浮细胞并计数我也是最近要做所以查了一下,仅供分享,呵呵!一 外周血白细胞的分离1 取3ml正常人的外周血(枸橼酸钠抗凝)与等体积pbs混匀后小心的加于6ml白细胞分离液(33.9%泛影葡胺和9%Ficoll液按1:2.4体积比混合)液面上,1500r/min离心20
4、min。(或先将抗凝血离心,然后吸取中间白细胞层,再混以等体积pbs然后小心加于等体积细胞分离液液面上,离心同上)2 吸取中间云雾状白细胞,加34mlPBS后3000 r/min离心10 min。3 弃上清,加1ml PBS洗涤沉淀后,将细胞悬液转移至1.5mLEp管中。4 3000r/min离心20 min,弃上清。即得白细胞二 自然沉降法本法是利用血細胞自然沉降率的分離法,採集血液後應及時抗凝,通常選用肝素抗凝法。肝素能阻止凝血酶原轉化為凝血酶,從而抑制纖維蛋白原形成纖維蛋白而防止血液凝固。操作原則是將含抗凝血的試管直立靜置室溫3060min後,血液分成明顯三層,上層為淡黃色血漿,底層為紅細胞,緊貼紅細胞層上面的灰白層為白細胞,輕輕吸取即得富含白細胞的細胞群,離心洗滌後加入少量蒸餾水或含氯化銨的Gey溶液,經短時間的低滲處理,使紅細胞裂解,經過反復洗滌可得純度較高的白細胞懸液。 (注:专业文档是经验性极强的领域,无法思考和涵盖全面,素材和资料部分来自网络,供参考。可复制、编制,期待你的好评与关注)