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1、Leica TCS SP5激光共聚焦显微镜系统软件操作手册打开软件后,默认在Acquire面板的acquisition中,acquisition mode为xyz,Format扫描像素为512x512,average line and frame average 为1。根据需要选择扫描模式,常用的有以下几种:xyz 层面扫描;xyt 时间扫描;xy光谱扫描。扫描像素 一般选10241024设置平均 一般选择line average 2-3次保存图像方法注意:一般在扫描结束后统一保存,为免数据丢失,可以从获取第一张图片后就要开始保存,以后每获取一张图片保存一次。1、 保存Leica .lif 文
2、件进入Acquire 面板的Experiment 中,右键点击Experiment,从弹出菜单中选中“Save Experiment “Experiment” as”,保存lif文件到自己的文件夹中并取名。2、 导出lif文件右键点击Experiment,从弹出菜单中选中“Export Experiment as tiff”,选择目标文件夹,选中rawdata导出单通道图片。如需导出overlay 图片,则再次右键点击Experiment,从弹出菜单中选中“Export Experiment as tiff”,选择目标文件夹,选中overlay 导出多通道合成图片。一、 获取单一荧光图像1、在
3、beam path setting 中的load/save single setting 中选择所标记荧光的光路设置方法。2、点击live开始连续扫描,优化图像质量。调节z position选择需扫描层面,调节gain和offset 使图像亮度和背景到达到合适的状态,Zoom调节电子放大倍率。点击stop,停止扫描。3、选择像素102410244、点击capture image获取图像。5、保存图像。二、获取多荧光图像 1、点击seq ,出现sequential scan面板。2、在sequential scan面板中点击scan 1,在beam path setting 中选择所标记的一种荧
4、光的光路设置方法。点击live开始连续扫描,优化图像质量。调节z position选择需扫描层面,调节gain和offset 使图像亮度和背景到达到合适的状态,Zoom调节电子放大倍率。点击stop,停止扫描。在sequential scan面板中点击“+”,点击scan 2,在beam path setting 中选择所标记的另一种荧光的光路设置方法,点击live开始连续扫描,优化图像质量。标记了几种荧光就添加几种方法。选择“between frames ”模式。3、选择像素10241024,点击Start获取图像。4、保存图像。三、获取多层荧光图像1、在beam path setting
5、中选择所标记荧光的光路设置方法。2、打开Z-stack 面板。3、点击live开始连续扫描,优化图像质量。调节z position选择需扫描层面,设置begin和end ,调节gain和offset 使图像亮度和背景到达到合适的状态,Zoom调节电子放大倍率。点击stop,停止扫描。在Z-stack 面板中确定Nr. Of steps (在选择层面中确定需扫描张数)4、点击start获取图像。5、如需将扫描图像叠加,选择Process 面板,选择visualization 3D projection ,点击apply ,即可生成叠加图像。6、 保存图像。四、获取时间序列图像1、Acquisition mode 改为xyt。2、根据需要拍摄图像的时间间隔和图像质量调整fomat 和line average值。3、在beam path setting 中的load/save single setting 中选择所标记荧光的光路设置方法。 如是多种荧光则选择点击seq,设置序列扫描。4、点击live开始连续扫描,优化图像质量。调节z position选择需扫描层面,调节gain和offset 使图像亮度和背景到达到合适的状态,Zoom调节电子放大倍率。点击stop,停止扫描。5、点击start获取图像。6、保存图像。