《细胞复苏及冷冻》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细胞复苏及冷冻（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、细胞培养基及冻存液的配制细胞培养基的配制：注意事项：为了避免不小心污染造成的浪费，一般用50ml管分装配制。配置比例：45ml培养基（90%的总体积比例）+ 5ml FBS （血清，10%的总体积比例）+ 500 aL双抗（1:100的比例）双抗：链霉素+青霉素抑制细菌生长。细胞冻存液的配制：配置比例：5mlDMSO（100%纯度，以10%总体积的比例）+ 45ml已配好的培养基（90%的总体积比例）注意事项：刚配好的细胞冻存液会发热，需用封口膜封住瓶盖后（防止细菌污染） 放入冰箱冷冻后再使用。过热的冻存液会使得细胞死亡？冻存液一般提前一天配好即可，放置太久会DMSO二甲基亚砜（Dimethy
2、l sulfoxide）：是一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰品的形成，减轻自由基对细胞损害，因其抗冻作用，可用于细胞的 冻存；细胞冻存操作步骤：1、打开水浴锅，将培养基和冻存液用封口胶封好加热至37C。2、用酒精喷壶消毒（手及洁净工作台表面，进入工作台为防止污染均需酒精喷 壶消毒）；从培养箱中取出要冻存细胞的培养皿。3、用移液管吸出培养基，弃全废液缸（注意移液管勿碰到废液缸壁或其他物品， 避免污染；移液管用完后倒插放置待用）。4、在培养皿中加入约10ml的PBS缓冲液冲洗，用移液管吸除（移液管此时可以扔掉），若有剩余的少量液体，用移液枪吸除。5、加入1ml的TE,使得细胞消化（解除贴
3、壁状态），摇匀液体后放入培养箱中5min。6、镜下观察细胞是否消化（即由扁平的伸展状态变回圆润的收缩状态；此步骤 不可省略）。7、在每个培养皿中均加入4ml培养基，打匀后吸入50ml离心管（因为培养皿多，15ml离心管显然不够用）离心5min（ 8000rpm）。8、等待离心的同时，准备冻存盒。8.1、若冻存盒是从冰箱中拿出，一定要升至室温之后再使用。（水浴锅加热）8.2、检查冻存盒中是否有异丙醇。（异丙醇的作用是均匀缓慢降温）9、标记好冻存管，细胞系名称、冻存人、冻存时间。10、取出离心后的离心管弃上清，尽量吸取干净，但不要把细胞吸入。加入冻存 液，原则上每盘培养皿分3管，每冻存管加1ml冻
4、存液。11、打匀后加入冻存管。12、记得检查冻存管盖子是否拧紧。13、先放入一80C冰箱保存，接着放入液氮保存。大量细胞东村是，最好3盘一次操作，防止最后分装冻存管时，demo对细胞的 损害细胞复苏操作步骤:1、从液氮中取出细胞冻存管，放入37C水浴锅中迅速融化成液态。（速融慢冻）2、将溶解的细胞倒入15ml离心管，加入3ml培养基，离心5min。3、取10cm培养皿一只，在其内加入10ml培养基，并做好标记。4、离心管弃上清。5、从培养皿中吸取1ml培养基至离心管中打匀后，均匀加入培养皿。6、行十字法晃动，使得细胞均匀散布，在镜下观察确认。7、放入培养箱，箱内再行一次十字法晃动。细胞复苏冻存的原则一快速融化，缓慢冷冻 必须将冻存在-196C液氮中的细胞快速融化至37，使细胞外冻存时的冰品迅速 融化，避免冰品缓慢融化时进入细胞形成再结品，对细胞造成损害。
