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1、诊断畜禽寄生虫病的一种新技术【关键词】 寄生虫病多年来，我们研究了一种定性、定量检测寄生虫病的新技术，包括新虫卵计数器（已获国家专利）、操作程序、每克粪中虫卵数计算公式、对被检粪便采 样量、粪便沉淀液的稀释体积和技术的可行性（即 在粪便沉淀液中难以分布均匀的蛭形巨吻棘头虫虫 卵、片形吸虫虫卵的分布均匀性进行了测定）进行了研究，并进行了临床试验检验，结果表明本技术用于定性、定量检测诊断寄生虫病是可靠的。 1 新虫卵计数器制作 在一张2mm厚的载玻片上画2个1cm 2 的方格，在每个方格内，每间隔1mm 画1根直线（避免虫卵的重复和遗漏计数），然后用3根1mm 厚的玻璃条分别粘在两方格的中间和两边
2、，再 将另一张 1mm 厚的玻片粘在玻璃条上，形成两个计 数室，即一个计数室的体积为 0.1mL ，见 图1。 2 其它器具 显微镜、秤（天平或其它小计量秤）、量筒、容器（烧杯、塑料杯或铁盅等均可）、铜筛网、 移液管。 3 操作程序 3.1 定量秤取被检家畜粪便（检测片形吸虫病时，最少被检羊粪便为 4.7g 、牛粪便 27.5g ），用定量粪便的35倍体积水调成糊。 3.2 用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。3.3 将滤液沉淀30min（检测较大虫卵如片形吸虫 虫卵、前后盘吸虫虫卵、棘头虫虫卵等的沉淀时间为1520min ，检测球虫卵囊等的沉淀时间为1h ）;弃上清液，再加水沉淀，重复3次
3、。检测单个样品时， 建议将沉淀改为离心，以便缩短操作时间。 3.4 弃适量上清液，用量筒量取该沉淀液量（每g 被检羊粪便沉淀液为510mL ，每g被检牛粪便沉淀液为35mL ）。 3.5 充分摇匀沉淀液后（肉眼见到粪渣在粪便沉 淀液中均匀即可），用移液管迅速将部分沉淀液移 至“计数器”的两计数室内。 3.6 在显微镜下，观察计数器两计数室内的寄生虫 虫卵，并计数。 3.7 按以下公式计算EPG（每克粪中虫卵数）值。 EPG= 计数器两计数室内的虫卵总数YmL（粪便沉淀液体积）Xg（粪便重量）0.2 4 临床印证 用本寄生虫病诊断监测新技术对178 只怀孕绵羊（之前已有3只怀孕绵羊因片形吸虫病死
4、 亡）的片形吸虫病病情程度进行诊断，有26只怀孕绵 羊的片形吸虫虫卵的EPG值在300以上。选用肝蛭 净（Fasinex）治疗这26只绵羊，治疗后第8天检测，17 只怀孕绵羊的片形吸虫虫卵转阴率为100%，其余9 只怀孕绵羊的片形吸虫虫卵EPG值减少率为 86.7% 96.4% 。在其后5个月的持续观察期内，这178只 怀孕种绵羊中没有一只因片形吸虫病死亡。此结果 表明，应用该寄生虫病诊断监测新技术， 对以往采用 的检测技术检获的EPG较小而危害性大的片形吸 虫病的诊断检测没有发生误诊或漏诊。 5 适用范围 本技术适合于检测诊断几乎所有经 粪便排虫卵或卵囊的寄生虫病，在用于临床诊断中 已经检测
5、出的寄生虫虫卵见表1。 表1 新诊断监测技术的试用情况（略） 6 应用这项新技术检测有关寄生虫虫卵的部分研究报告例举如下。 6.1 Liao Dangjin. Study on the new egg count tech- nique for M. hirudinaceus and A. suum . Veterinary Parasitology， 1996，61:113117. 6.2 廖党金.绵羊与牛片形吸虫病的粪便检测新技术.中国兽医寄生虫病，2000，8（4）:1822. 6.3 廖党金，张华贵，黄德恩，等.怀孕绵羊片形吸虫病病情程度的诊断和治疗试验.中国兽医杂志， 1999，25
6、（4）:1718. 6.4 骆家锐，徐文福，俄木阿迁，等.绵羊片形吸虫病和线虫病病情程度的检测与治疗试验.中国兽医寄生虫病，2003，11（4）:4648. 6.5 廖党金，向丕元，杨光希，等.规模化养猪的寄生虫病控制技术探讨.四川畜牧兽医，2003，30（增 刊）:5152. （四川省畜牧科学研究院，成都 610066） 规模化养猪场寄生虫病控制新技术探讨总述：寄生虫病给养猪业带来的经济损失是很大的，据报告，仅猪蛔虫病平均给东欧国家带了1750万美元的经济损失，给美国带来了6010万美元的经济损失。四川的养猪量是美国的2倍左右，估计仅四川省每年由猪蛔虫病引起的经济损失约10亿元人民币。其实在
7、全国各地，寄生虫都是养猪业的大患。但在驱虫方法上，迄今几乎所有的规模化养猪场是采用传统的“定期驱虫”模式，只是驱虫频率不同，规模化养猪通过十多年来的发展，许多技术日趋成熟，这种高频率的驱虫是否合理，值得我们探讨，为此笔者进行了以下研究。采用粪便虫卵检测和刮取皮屑镜检法调查了四川10个规模化养猪场寄生虫病，根据这些寄生虫种类、发育史等制订了每年3月、7月、11月各进行一次虫卵检查的定期监测程序；根据主要寄生虫病的危害等制订了进行驱虫的参考标准，再根据常用药物对上述猪寄生虫病的疗效，制订了驱虫效果及时检测和评估指针。对示范场寄生虫病监测结果表明该场2年不用进行预防性驱虫。从而形成了“定期监测、根据
8、需要驱虫、驱虫效果及时检测评估”的新技术。材料和方法寄生虫检测方法：采用廖党金的方法检测粪便中的寄生虫虫卵，操作步骤如下：1、将被检猪粪便定量(Xg)，用定量粪便35倍体积水调成羹。2、用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。3、将滤液沉淀30min，弃上清夜，再加水沉淀，重复三次。4、弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(Yml)。5、充分摇匀沉淀液后，迅速将部分沉淀液移至“计数器”的两计数室内。6、在显微镜下，观察计数器两计数室内的寄生虫虫卵，并计数。7、按以下公式计算EPG值(每克粪便中的寄生虫虫卵数量)：结果1、规模化养猪场寄生虫病：对四川不同区域、规模、卫生条件等的10个养猪场寄生虫病进
9、行了调查。在调查的10个猪场中，粪便中寄生虫虫卵或卵囊呈阴性的有7个场，比率为70；在检出有虫卵或卵囊的有3个猪场中，1个种猪场的食道口线虫虫卵阳性率为25.0，EPG值为65；1个商品猪场的蛔虫虫卵阳性率为4.0，EPG值最大的为4678；1个商品猪场的虫卵或卵囊阳性率为15.79，其中猪毛首线虫虫卵的阳性率65.26，EPG平均值为34，猪食道口线虫虫卵的阳性率为15.79，EPG平均值为139，猪蛔虫虫卵的阳性率为5.26，EPG平均值为197，猪球虫卵囊的阳性率为10.53，EPG平均值为188。另外，临床观察和刮取镜检每一个猪场均有不同程度的疥螨流行。这些结果表明规模化养猪场的主要寄
10、生虫病为疥癣病、蛔虫病、毛首线虫病、食道口线虫病、球虫病。2、寄生虫病监测程序：猪蛔虫虫卵在1838条件下发育至感染性虫卵需要15天左右，猪吃到感染性虫卵后22.5个月可以通过粪便排出虫卵，即猪蛔虫的一个周期为约3个月(赵辉元，1996)；猪食道口线虫虫卵在外界58天内发育至感染性幼虫，猪吃到感染性幼虫后3850天可以通过粪便排出虫卵，即猪食道口线虫的一个周期为3358天；猪毛首线虫虫卵在室内2237下需要1854天发育成感染性幼虫，在户外624需要210天才能发育至感染性幼虫，猪吃到感染性幼虫后3040天可以通过粪便排出虫卵，即猪毛首线虫的一个周期室内为4894天、室外为240304天(孔繁
11、瑶等，1982)。故制订出以下规模化养猪场的寄生虫病定期监测程序，即每年3、7、11月各进行一次监测。疥癣病监测以平时饲养员监视猪红皮肤是否出现，兽医人员进一步做镜检。猪内寄生虫病监测程序见表1。3、进行驱虫的参考标准：蛔虫每条雌虫每天产卵1020万个，产卵旺盛期每天可达100200万个虫卵，食道口线虫每条雌虫每天产虫卵500010000个，毛首线虫每条雌虫每天产卵200个左右。从致病力来看，据我们检测猪蛔虫EPG值达4678时尚未表现出水肿等临床症状，以上调查表明四川规模化养猪场的寄生虫病很轻微，因此猪粪便中的猪蛔虫、食道口线虫和毛首线虫虫卵数量与该虫卵数的寄生虫对猪的危害相关性还需要进一步
12、研究。参考孔繁瑶等(1982)介绍的羊粪便虫卵数进行驱虫和猪的寄生虫病情况，暂时设计10的随机抽样被检粪便阳性猪的线虫虫卵500时进行预防性驱虫。4、驱虫评估参考指针制订：我们筛选的复合药物的线虫虫卵转阴率97.6(骆佳锐等，2003)，丙硫咪唑(Albendazole)(彭金菊等，2004)和阿维菌素(Avermectins)(李伟等，1996)的线虫虫卵转阴率为95以上，因此设计：线虫虫卵转阴率分别在95以上为优、8595为合格、85以下为不合格。5、防制技术：根据以上监测程序，以参考标准确定是否进行驱虫，驱虫后及时检测，最后按以上参考指针进行评估，程序见图1。6、养猪场寄生虫病控制：2年
13、来监测结果表明均表明不需要进行驱虫。讨论1、四川规模化养猪场寄生虫病的危害：在调查的10个规模化养猪场中，有7个猪场的寄生虫病虫卵或卵囊呈阴性，只有3个养猪场的寄生虫粪便虫卵或卵囊呈阳性，这表明这些规模化养猪场通过控制环境卫生等来切断寄生虫病感染途径的效果明显。2、进行驱虫的参考标准：由于调查的10个养猪场中，2个种猪场的食道口线虫虫卵阳性率分别为25.0和15.79，EPG值为65139；2个商品猪场的蛔虫虫卵阳性率分别为4.0和5.26，EPG值1974678；1个商品猪场毛首线虫虫卵的阳性率65.26，EPG平均值为34，这不足表明猪粪便中虫卵数与寄生虫对猪危害的相关性，因此还有待进一步研究，以便制订较合理的进行驱虫的标准。3、这两年通过以上对某原种猪场寄生虫病的监测，结果表明均不用进行驱虫，从而避免了约6500头猪的预防性驱虫，即避免了药物、人力、物力浪费，更重要的是避免了药物对环境的污染问题。四川省畜牧科学研究院廖党金杨光希
