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1、子痫前期病人胎盘组织可溶性endoglin表达及意义【摘要】目的探讨可溶性endoglin（sEng）在子痫前期病人胎盘组织中的表达及其与子痫前期发病的关系。方法2008年7月2009年2月,选取在我科住院分娩的子痫前期病人67例,其中轻度31例（轻度子痫前期组），重度36例（重度子痫前期组）。选取同期正常晚期妊娠妇女39例为对照组。酶联免疫吸附试验检测各组血清中sEng水平；采用RTPCR、免疫印迹法分别检测各组胎盘组织中sEng mRNA以及蛋白表达水平。结果轻度及重度子痫前期组血清sEng水平、胎盘组织sEng mRNA及蛋白表达水平明显高于对照组（F=133.54779.63，q=13
2、.2653.88，P0.01），且重度子痫前期组明显高于轻度子痫前期组（q=8.5916.79，P0.01）。轻度及重度子痫前期组血清sEng水平与胎盘组织sEng mRNA及蛋白表达水平呈正相关（r=0.7810.888，P0.01）。结论子痫前期病人胎盘组织sEng mRNA及蛋白表达上调，导致血清sEng水平升高，从而参与子痫前期的病理生理过程。 【关键词】 子痫；先兆子痫；胎盘；受体，细胞表面；抗原，CDEXPRESSION OF SOLUBLE endoglin IN PLACENTA OF PATIENTS WITH PREECALMPSIA XING BAOXIANG, CHEN
3、 WEIPING, PENG WEI, et al (Department of Obstetrics, The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266003, China); ABSTRACT Objective To study the expression of soluble endoglin (sEng) in placenta of patients with preecalmpsia. Methods Sixtyseven patients with preeclampsia,
4、who had a childbirth at our department from July 2008 to February 2009, were enrolled in this study. Of whom, 31 were mild and 36 were severe, and 39 healthy pregnant women of the corresponding time period were served as controls. Enzymelinked immunosorbent assay (ELISA) was used to measure the seru
5、m levels of sEng, semiquantitative RTPCR and western blot to detect the expressions of sEng mRNA and sEng protein in placenta. Results The levels of sEng in serum and expressions of sEng mRNA and sEng protein in placenta in both mild and severe cases were higher than those of the controls (F=133.54-
6、779.63;q=13.26-53.88;P0.01), and above parameters of the severe cases were higher than those of the mild ones (q=8.59-16.79,P0.01). The levels of sEng in serum showed a positive correlation with the expressions of sEng mRNA and sEng protein in placenta for both mild and severe preeclampsia (r=0.781-
7、0.888,P0.05),对照组孕周明显高于轻度及重度子痫前期组(t=2.68、4.86，P0.01)。1.2 方法1.2.1 标本采集分娩前1周内临床用药前采集各组空腹肘静脉血5 mL，分离血清，-20 冰箱保存待测。于胎盘娩出后30 min内，立即在无菌状态下取两块母体面胎盘组织(避开钙化区和坏死区)，每块约1 cm×1 cm×1 cm大小，-70 冰箱保存。1.2.2 血清sEng水平检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法，ELISA试剂盒购自美国DR公司,操作按说明书进行。标本均为同批测定，批内变异5%。1.2.3 胎盘组织sEng mRNA表达的检测采用RT
8、PCR法。总RNA提取试剂盒由日本TAKARA公司提供,按逆转录酶第1链cDNA合成试剂说明书操作，将组织总RNA逆转录为cDNA。建立20 μL PCR反应体系。sEng扩增条件为：94 预变性5 min；然后按94 30 s, 60 30 s, 72 30 s,共35个循环；再72 充分延伸10 min。内参照葡萄糖磷酸脱氢酶（GAPDH）扩增条件为：94 预变性5 min；然后按94 30 s, 62 30 s, 72 30 s,共35个循环；再72 充分延伸10 min。根据Premier 5.0软件设计引物, sEng 上游引物为：5′ATCCCACTGCACTTG
9、GCCTAC3′,下游引物为：5′TTCCAGCATGCAGAAGGACAG3′,扩增产物的长度为216 bp；内参照GAPDH 上游引物为：5′TCATGGGTGTGAACCATGAGAA3′,下游引物为：5′GGCATGGACTGTGGTCATGAG3′，扩增产物长度146 bp。以上引物均由上海生工生物工程技术有限公司合成。20 g/L琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物,电泳结果用计算机扫描分析,以各检测标本sEng以及GAPDH扩增条带的实际灰度值的比值表示sEng的表达水平。1.2.4 胎盘组织sEng蛋白表
10、达检测采用免疫印迹法。按蛋白裂解液说明书（浙江碧云天公司产品）抽提、浓缩得到蛋白样本,蛋白样本电泳后,转移至蛋白转印膜上,封闭液（浙江碧云天公司产品）封闭2 h，加入1200一抗(兔抗人sEng,美国Santa Cruz公司产品) 4 过夜，Western洗涤液（浙江碧云天公司产品）洗涤，加入11 000二抗（鼠抗兔,丹麦Dako Cytomation 公司产品）孵育2 h后，弃去二抗, Western洗涤液洗涤。增强化学荧光发光法（ECL）显影，X线曝光30 s，X线片经激光扫描仪行定量分析。以同一张膜上β肌动蛋白（βactin）为内参照进行比较，以各标本sEng与&be
11、ta;actin 实际灰度值的比值表示sEng蛋白表达水平。1.3 统计学方法 应用SPSS 13.0及PPMS 1.53统计软件进行数据处理，组间比较采用t检验、方差分析，相关性检验采用Pearson相关性分析。2 结果2.1 各组血清sEng水平比较 轻度子痫前期组及重度子痫前期组病人的血清sEng水平均高于对照组，差异有统计学意义（F=133.54，q=13.26、22.91，P0.01）,而且重度子痫前期组明显高于轻度子痫前期组（q=8.59，P0.01）。见表1。 表1 各组血清、胎盘组织sEng表达水平比较（略）2.2 各组胎盘组织中sEng mRNA及蛋白表达水平比较 轻度子痫前
12、期组及重度子痫前期组病人胎盘组织中sEng mRNA及蛋白表达水平均明显高于对照组（F=779.63、373.26，q=19.9453.88，P0.01），且重度子痫前期组明显高于轻度子痫前期组（q=13.64、16.79，P0.01）。见表1，图1、2。2.3 血清sEng水平与胎盘sEng mRNA及蛋白表达水平的相关性 对照组血清sEng水平与胎盘sEng mRNA及蛋白表达水平呈显著正相关(r=0.797、0.713，P0.01)；轻度及重度子痫前期组血清sEng水平与胎盘组织sEng mRNA及蛋白表达水平呈正相关（r=0.7810.888，P0.01）。3 讨论3.1 子痫前期病人
13、血清sEng水平变化及意义 endoglin是一种相对分子质量为18万的存在于细胞表面的同源二聚体跨膜糖蛋白，是TGFβ1和β3型受体复合体成分之一，主要表达于正常血管内皮细胞、合体滋养细胞和肿瘤血管。CD105的功能与TGFβ及其受体密切相关，TGFβ调节细胞增殖、分化，影响细胞外基质代谢，可调节血管生成和血管壁结构的完整性。sEng作为CD105的可溶性形式，是其氨基末端裂解重组的截短形式，可以通过抑制细胞对TGFβ的反应，参与血管发生和发育。 关于sEng与子痫前期的关系已有报道, VENKATESHA等4通过动物实验发现，经腺病毒表达体系将sEng转染孕鼠，结果出现高血压、血管形成障碍、血管通透性增加等效应，而与可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt1)共同转染时这一效应被扩大，并出现HELLP综合征(溶血、肝酶升高和
