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1、饲料中粗蛋白测定方法 1、原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。2、试剂2.1硫酸（GB625）：化学纯，含量为98，无氮。2.2混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB665），6g硫酸钾（HG3920）或硫酸钠（HG3908），均为化学纯，磨碎混匀。2.3氢氧化钠（GB629）：化学纯，40水溶液（m/V）。2.4硼酸（GB628）：化学纯，2水溶液（m/V）。2.5混合指示剂：甲基红（HG3958）0.1乙醇溶液，溴甲酚绿（H
2、G31220）0.5乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。2.6盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB601制备。2.6.1盐酸标准溶液：c（HCl）=0.1mol/L。8.3mL盐酸（GB622，分析纯），注入1000mL蒸馏水中。2.6.2盐酸标准溶液：c（HCl）=0.02mol/L。1.67mL盐酸（GB622，分析纯），注入1000mL蒸馏水中。2.7蔗糖（HG31001）：分析纯。2.8硫酸铵（GB1396）：分析纯，干燥。2.9硼酸吸收液：1硼酸水溶液1000mL，加入0.1溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1甲基红乙醇溶液7mL，4氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，
3、置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。3、仪器设备3.1实验室用样品粉碎机或研钵。3.2分样筛：孔径0.45mm（40目）。3.3分析天平：感量0.0001g。3.4消煮炉或电炉。3.5滴定管：酸式，10、25mL。3.6凯氏烧瓶：250mL。3.7凯氏蒸馏装置：半微量水蒸气蒸馏式。3.8锥形瓶：150、250mL。3.9容量瓶：100mL。3.10消煮管：250mL。3.11定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动。4、试样的选取和制备选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。5分析步骤5.1.1试样的消煮称取试样0.51g（含氮量
4、580mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360410）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。5.1.2氨的蒸馏：将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液1020mL注入蒸馏装置
5、的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。5.1.2.3蒸馏步骤的检验精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，按5.1.2步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.190.2，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。5.1.3滴定用5.1.2.1或5.1.2.2法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L（4.6.2）盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色
6、为终点。6、空白测定称取蔗糖0.5g，代替试样，按第5章进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2mL。消耗0.02mol/L盐酸标准溶液体积不得超过0.3mL。7、分析结果的表述7.1计算见下式：粗蛋白质（）=（V2-V1）c0.01406.25/（mV/V）100式中：V2滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL；V1滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL；c盐酸标准溶液浓度，mol/L；m试样质量，g；V试样分解液总体积，mL；V试样分解液蒸馏用体积，mL；0.0140与1.00mL盐酸标准溶液c（HCl）=1.000mol/L相当的、以克表示的氮的质量。6.25氮换算成蛋白质的平均系数。7.2重复性每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。当粗蛋白质含量在25以上时，允许相对偏差为1。当粗蛋白含量在1025之间时，允许相对偏差为2。当粗蛋白质含量在10以下时，允许相对偏差为3。
