核糖核酸酶活力的测定

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1、成绩:日期:2015年11月1日实验二、核糖核酸酶活力的测定一实验目的:核糖核酸酶包括脱氧核糖核酸酶(DNase)和核糖核酸酶(RNase)是水解DNA和 RNA 磷酸二酯键的核酸内切酶,与植物的生长、分化、衰老、种子成熟和萌发等生 理生化过程密切相关。通过测定这两个酶的活性,可间接获得植物体内核酸含量极代谢情况。推测其所处 的生长发育状态和阶段。二、原理 以植物叶片试验材料,提取粗酶液,进行酶促反应,以反应混合物中 0.1ml 酶液在 30min 内催化形成具有 OD 值为 1 的硝酸镧可溶性 RNA 碎片的酶量为 1 个 酶活性单位。三、材料、试剂与仪器设备:植物材料:绣球实验试剂:0.0

2、1M的HAc (醋酸缓冲液pH4.8); 0.05ml30mM巯基乙醇;1ml酵母 RNA; 1.5ml冷的硝酸镧-HC1溶液。实验器具:分光光度计;离心机;研钵;离心管;移液管;试管等;恒温水浴箱。四、实验步骤1. 酶液的提取称取0.4g绣球叶片剪碎用3mlO.O1M的HAc (醋酸缓冲液pH4.8)分三次加入(1, 1, 1),研磨提取,在5000rpm下离心10min,取上清液。2. 核酸酶活力测定取0.1ml酶液放入离心管中+0.05ml30mM巯基乙醇+1ml酵母RNA+0.35ml HAc (pH4.8)混合均匀,在37水浴保温30min.3. 加硝酸镧-HCl到时间后,将离心管放入冰浴中放置34min,加入1.5ml冷的硝酸镧-HCl溶液一强 烈震荡混合液f至于冷冻离心机中离心15min (5000rpm/min),测定上清液的体积。4. 光密度测定取上清液0.3ml+2.7ml蒸馏水定容至3ml。在260nm下(紫外分光光度计)测定0D 值。活力单位=所测OD260nmX10五、结果计算OD=0.115-0.008=0.107活力单位=0.107*10=1.07六、注意事项1.研磨叶片要充分,在离心前要选择合适的离心管一起离心。2加入其他溶剂时要注意精确,不然会导致实验有失误。

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