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1、多型性腮腺肿瘤p53和Ki-67的免疫组化表达郭树江 河南煤化集团鹤壁煤业公司总医院五官科 458000【摘要】目的： 探讨Ki-67、P53的表达与多型性腮腺瘤的发生及其临床病理意义。方法 ： 2004年1月至2009年l0月所用之石蜡包埋组织标本的腮腺多型性腺瘤患者，经随访3年以上，其中良性30例，恶性26例；以正常腮腺组织30例为对照。应用Envision法检测应用免疫组Ki-67、P53的表达，分析其与腮腺多型性腺瘤良恶性之间的关系。结果： p53 在正常腮腺组织中的表达 :腺管细胞P53强阳性1例（3.3%），中等3例（10.0%），弱阳性12例（40.0%），无表达14例（46.7
2、%）。腺泡细胞染色阴性25例（83.3%），3例弱阳性（10.0%），2例中等（6.7%）。间质细胞p53 强阳性1例（3.3%），弱阳性8例（26.7%），21例阴性（70.0%）。 Ki-67在正常腮腺组织中的表达 ： 腺管细胞Ki-67强阳性0例（0.0%），中等2例（6.7%），弱阳性6例（20.0%），无表达22例（73.3%）；腺泡细胞染色阴性27例（90.0%），弱阳性3例（10.0%）；间质细胞染色强阳性0例（0.0%），弱阳性5例（16.7%），无表达25例（83.3%）。 p53在PA表达 p53 表达强阳性7例（23.3%），中度染色16例（53.3%），弱阳性7例（24
3、.4%）。多形性腺瘤粘液软骨样组织中P53表达强阳性1例（3.3%），中度染色11例（36.7%），弱阳性18例（60.0%）。P53在粘液软骨样组织中表达和肿瘤导管细胞p53表达差异有统计学意义（P0.001）。 Ki-67在PA表达 Ki-67表达强阳性5例（16.7%），中度染色12例（40.0%），弱阳性13例（43.3%）；多形性腺瘤粘液软骨样组织中Ki-67表达强阳性2例（6.7%），中度染色7例（23.3%），弱阳性21例（70.0%）。Ki-67在粘液软骨样组织中表达与肿瘤导管细胞之间比较差异有统计学意义（P0.01）。2.5 p53 在CAP表达 p53表达强阳性11例（42
4、.3%），中度染色5例（19.2%），阴性10例（38.5%）。2.6 Ki-67在CAP表达 Ki-67表达强阳性13例（50.0%），中度染色3例（11.5%），阴性10例（38.5%）。结论： Ki-67、P53在腮腺肿瘤呈高表达，二者联合检测可提高诊断准确度。 【关键词】 腮腺； 上皮性肿瘤； 免疫组化检查； 肿瘤抑制基因；Ki-67 多型性腮腺瘤（Pleomorphic salivary adenoma ， PA )是最常见的腮腺肿瘤1，部分可呈恶化并发生远处转移2。 腮腺癌在多形性腺瘤中（Carcinoma ex pleomor phicadenoma， CPA)是存在于多型腮腺瘤
5、中恶性转化所致3，是最常见的恶性混合瘤，约占全部腮腺肿瘤的10%4。由多型腮腺瘤转化为腮腺癌的确切病理学机制仍然不清，可能涉及不同分子学事件5。癌症的分子生物学研究表明，肿瘤抑制基因如p53功能的缺失可能导致各种癌症的发生6,7。P53肿瘤抑制基因的突变是人类肿瘤最常见的遗传变异。肿瘤细胞增生程度是反映其生物学行为的重要参数，直接影响着临床治疗和预后，Ki-67是一种敏感而特异的增殖期细胞标记物8。本研究的目的在于探讨Ki-67、P53的表达与多型性腮腺瘤的发生及其临床病理意义。1 资料和方法1.1 一般资料 福尔马林固定、石腊包埋组织标本，多型性腮腺瘤30例，CPA26例，男性32例，女性2
6、4例，年龄2584（48.313.5）岁；同期切除的正常腮腺组织30例（男16例，女14例，年龄2177岁）为对照组。所有标本均经HE染色，并为病理学医生再次确认。1.2 试剂 Ki-67单克隆抗体，克隆号：SP12；p53单克隆抗体，克隆号：DO-11。显色剂：DAB-0031，福州迈新生物技术开发公司；EnvisionTM+加强型试剂盒，丹麦Dako公司，编号：K400033。1.3 方法石蜡标本4m厚连续切片，免疫组化采用SP法，石蜡切片置0.01mmol/L柠檬酸缓冲液微波修复抗原，DAB显色，苏木素复染，脱水、透明、封片。已知阳性片作阳性对照，PBS替代一抗作阴性对照。1.4 结果判
7、断 Ki-67和p53 均定位于细胞核，以背景清晰细胞核出现明显棕黄色颗粒为阳性反应。计数采用Ki-67指数和p53指数6,8，指每个标本低倍镜(100)下观察并确定有代表性的Ki-67和p53染色阳性视野，选择5个视野，在高倍镜(400)下每个视野数200个肿瘤细胞，计算其阳性细胞总数。1.5 统计学分析 采用SPSS16.0统计软件处理数据， 计量资料的比较采用t检验，计数资料的比较采用卡方检验， 取P0.05。2 结果 2.1 p53 在正常腮腺组织中的表达 腺管细胞P53强阳性1例（3.3%），中等3例（10.0%），弱阳性12例（40.0%），无表达14例（46.7%）。腺泡细胞染色
8、阴性25例（83.3%），3例弱阳性（10.0%），2例中等（6.7%）。间质细胞p53 强阳性1例（3.3%），弱阳性8例（26.7%），21例阴性（70.0%）。2.2 Ki-67在正常腮腺组织中的表达 腺管细胞Ki-67强阳性0例（0.0%），中等2例（6.7%），弱阳性6例（20.0%），无表达22例（73.3%）；腺泡细胞染色阴性27例（90.0%），弱阳性3例（10.0%）；间质细胞染色强阳性0例（0.0%），弱阳性5例（16.7%），无表达25例（83.3%）。2.3 p53在PA表达 p53 表达强阳性7例（23.3%），中度染色16例（53.3%），弱阳性7例（24.4%）。
9、多形性腺瘤粘液软骨样组织中P53表达强阳性1例（3.3%），中度染色11例（36.7%），弱阳性18例（60.0%）。P53在粘液软骨样组织中表达和肿瘤导管细胞p53表达差异有统计学意义（P0.001）。2.4 Ki-67在PA表达 Ki-67表达强阳性5例（16.7%），中度染色12例（40.0%），弱阳性13例（43.3%）；多形性腺瘤粘液软骨样组织中Ki-67表达强阳性2例（6.7%），中度染色7例（23.3%），弱阳性21例（70.0%）。Ki-67在粘液软骨样组织中表达与肿瘤导管细胞之间比较差异有统计学意义（P0.05）；二者的Ki-67表达亦未显示有显著差异。3 讨论3.1 正常腮
10、腺组织中 p53 和Ki-67表达 正常腮腺组织中p53表达呈阴性或弱阳性，与文献9结果一致。有作者观察 11 正常的胸腺上皮细胞不表达p53，来自正常口腔黏膜亦无p53表达12；而口腔癌病人的“正常”黏膜呈p53表达阳性13 。肿瘤抑制蛋白p53广泛存在于多种细胞内，在正常细胞，p53的表达很低，免疫组化方法多呈阴性结果。但是，p53蛋白质的基因编码可发生频繁的突变，导致突变蛋白质的积累。因而，在22%70%的恶性肿瘤如结肠癌、胃癌、膀胱癌、乳腺癌、肺癌、甲状腺癌，p53蛋白质可经免疫组织化学检测证实14,15。 Ki-67是与增殖细胞相关的核抗原，仅分布于核内，其功能被认为与细胞的有丝分裂
11、密切相关。现已知道G0期细胞无Ki-67抗原表达，在G1后期开始出现，S、G2期升高，M期达高峰，其后迅速降解。在甲状腺的皮质组织、外周淋巴组织生发中心和睾丸未分化的精原细胞中未见表达。Ki-67抗原在非增生性的或低转化性的组织中几乎不表达，它反映的是细胞的增殖情况，肿瘤细胞的增生活性与肿瘤生物学行为有关。3.2 p53和Ki-67和PA和CPA中表达 以核染色p53 强阳性和中度染色作为阳性，本组中PA检测阳性率为76.6%，与文献结果一致16,17。CPA中阳性表达为61.5%，文献资料分别为67%10和75%5。Ki-67在PA和CPA中表达阳性分别为56.7%和61.5%。3.3 p5
12、3和 Ki-67表达与肿瘤 Ki-67反映的是细胞的增殖情况，在许多肿瘤组织中都高表达。正常宫颈组织中Ki-67表达只存在于基底层细胞核中，癌组织中其表达明显增强，它在子宫颈上皮内瘤变I、子宫颈上皮内瘤变、子宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中表达水平随病变程度的加重而升高，并与宫颈癌的发生、发展及恶性程度有关。P53基因是定位于人类第17号染色体17P131的抑癌基因，人类肿瘤中约51种与P53基因突变有关，P53蛋白在细胞增殖和凋亡调节中起关键作用。另方面，突变型P53蛋白表达促进肿瘤血管增生，是肿瘤发生发展的机制之一。本研究结果显示，PA和CPA组织中p53和Ki-67表达均较正常的腮腺组织为高，提
13、示组织细胞中二者表达阳性有助于对肿瘤的诊断。但是，由于二者在良或恶性肿瘤组织中均呈高表达，用于鉴别肿瘤组织良恶尚有困难。 总之，本研究结果显示：CPA与PA和正常腮腺组织比较，p53和Ki-67表达增强，而对于PA和CPA的鉴别意义需要增加样本进一步观察；应用明确的阳性或阴性判断标准确定肿瘤抑制基因表达可能较不同分级的标准得到的结果更能令人信服；肿瘤抑制蛋白p53和Ki-67联合染色分析可提高确诊准确度；肿瘤抑制蛋白p53和Ki-67在肿瘤细胞异常表达频率较粘液软骨样组织中表达异常更为多见，这一结果与粘液软骨样组织不是恶性疾病进展的重要肿瘤细胞相一致；p53和Ki-67在PA和CPA的表达值得
14、进一步进行精确的DNA研究，以确定引起突变的可能原因如甲基化或杂合性（heterozygosity）丧失对肿瘤发生和发展的影响； 由于p53和Ki-67在良或恶性肿瘤组织中均呈高表达，用于鉴别肿瘤组织良恶尚有困难。参考文献1 Ungari C, Paparo F, Colangeli W,et al.“Parotidgl and stumours: over view of a 10 - years experience with 282 patients, focusing on 231 benign epithelial neoplasmsJ.” European Review for M
15、edical and Pharmacological Sciences ,2008,12(5):321-325. 2 Demasi APD, Furuse C, Soares AB,et al. “Peroxiredoxin I, platelet-derived growth fact r A, and platelet-derived growth factor receptor are overexpressed in carcinoma ex pleomorphic adenoma: association with malignant transformationJ,” Human Pathology,2009,40(3):390-397.3 saki T，ShiohamaA，Minoshima Set a1Identification of eight membersof the Argnnaute family in the human genomeJGenomics，2003，82(
