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1、赛润 ELISA classic巨细胞病毒 IgG/IgM目录1.用途2.诊断意义3.赛润 ELISA classic - 检测原理4.试剂盒组成5.检测所需物质，试剂盒未提供6.储存和稳定性7.赛润 ELISA classic的检验步骤7.1注意事项7.2检验前的准备工作和储存7.3试剂盒反应试剂的准备7.4检测程序概要7.5检测过程8.检测结果评估8.1 4PL单点定量法8.2检验有效性标准8.3计算赛润 ELISA classic巨细胞病毒 IgG / IgM（定量）8.4检测结果分析9. 性能特性 9.1重复性 9.2 敏感性和特异性10.警告 10.1警告和安全措施 10.2废料处理
2、11.参考文献 V10.03/07-1赛润ELISA classic 巨细胞病毒 IgG/IgM试剂盒酶联免疫法测定人体抗体（IgG/IgM）- 只限用于体外诊断-IgG 试剂盒 (定量) 编号: ESR109GlgM 试剂盒 (定性) 编号: ESR109M检测评估标准: Dade Behring BEP III / BEP 2000, DSX, 手动操1用途：赛润 ELISA classic 巨细胞病毒 IgG/IgM试剂盒主要用于人血清、脑脊液或血浆中抗巨细胞病毒抗体的定性和/或定量测定，IgM-ELISA试剂用于确定急性感染，而IgG-ELISA试剂则用于近期感染和血清学状态的诊断。2
3、诊断意义 巨细胞病毒（CMV）是一种DNA病毒，它是人病原体-疱疹病毒属的一种。巨细胞病毒的主要感染途径是与被感染病人或有过接触，包括接触被感染病人的唾液、生殖器分泌物、尿液和乳汁，同时也可通过胎盘传播或发生医源性传染（输血，移植手术）。初期感染后就会相继发生终生的潜在性感染。巨细胞病毒寄生淋巴细胞中，可以在特定的环境下被激活。巨细胞病毒在发达和不发达国家的感染率在45-50%之间，个别国家和地区感染率超过90%。血清转化有两个高峰期：在感染后第2-3年间以及年龄在15-30岁之间。初期感染通常没有症状，临床表现的轻重一般是取决于病人的年龄、机体对局部感染到全身性感染的免疫能力高低。免疫能力低
4、下的人被感染后可能会出现严重的临床症状甚至死亡。在免疫活性正常的成年人体内，病毒的再激活及产生分泌物通常是无症状的，而在免疫能力低下的机体内巨细胞病毒的再激活可能会导致严重的临床疾病。巨细胞病毒感染是医源性免疫抑制如器官移植病人和艾滋病患者出现并发症的主要原因。怀孕妇女的初期与激发感染一样都会导致胚胎受损，初期感染胎儿病变的风险比激发感染期高。如果怀孕期间发生血清转化，将有40%的胎儿被感染，被感染的胎儿出生时的患病率达到15%，有10-15%的被感染婴儿会有不同程度的后期临床症状。巨细胞病毒感染是最常见的先天感染和后天的感染性疾病。3.赛润ELISA classic - 检验原理用抗原包被微
5、量板孔，制成固相载体。加患者血清到板孔中，其所含的抗体特异性地与固相载体中现存抗原结合，形成免疫复合物。除去多余物质后，加入结合了碱性磷酸酶的IgG、IgA或IgM抗体，使之与上述免疫复合物反应。洗板，除去多余的结合物，加入底物（对硝基苯磷酸盐）。该反应产生有颜色产物，颜色强度与特异性抗体含量成正比。4.试剂盒的组成试验成分IgG试剂盒 IgM试剂盒 数量/容积微孔条（此微孔条可以掰开单独使用，每条有8孔，共96孔，已经包被了抗原）1个微孔条框架包被的抗原为灭活抗原12 12标准血清（立即可用）人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液；抗HIV抗体、抗乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗丙肝病毒（HCV）抗体
6、均为阴性；防腐剂： 0.1%叠氮化钠染色剂：紫红色O22毫升 22毫升阴性质控血清（立即可用）人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液；抗HIV抗体、抗乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗丙肝病毒（HCV）抗体均为阴性；防腐剂： 0.1%叠氮化钠染色剂：里沙明绿 V12毫升 12毫升酶标记的抗人IgG, IgA, IgM （立即可用）羊抗人IgG, IgA, IgM（多克隆），碱性磷酸脂酶，以蛋白封闭液封闭。防腐剂: 0.01 % 甲基异噻唑啉酮，0.01% 溴化硝基二垩烷13毫升 13毫升浓缩洗液（可稀释至1000毫升）氯化钠，含吐温20和30mM Tris 防腐剂： 0.1% 叠氮化钠133.3毫升 13
7、3.3毫升稀释缓冲液磷酸盐缓冲液，内含蛋白和吐温20防腐剂： 0.1% 叠氮化钠，0.01克/升的溴酚蓝钠盐250毫升 250毫升终止液1.2N 氢氧化钠 15毫升 15毫升底物（立即可用）邻硝基苯磷酸盐，不含其它溶剂的缓冲液防腐剂： 0.1% 叠氮化钠（瓶子未盖好底物可能会轻微变黄，但不会影响其质量） 13毫升 13毫升带有标准曲线和评估表的质量控制认证文件（抗体以IU/毫升或U/毫升计量）1 15.其它检测所需物质- 普通实验室所需的仪器装置- IgM检测：特别赛润对照抗原类风湿因子Rf吸附剂（Rf-吸附剂/对照抗原；产品编号T200/20ml）- 分光光度计，波长405纳米，建议参考波长
8、范围620纳米- 690纳米（例如 650纳米）- 37温箱- 湿盒- 蒸馏水。6.储存及稳定性试剂储存稳定性微孔条(包被抗原)开封后放在2-8装有干燥剂的密封铝箔袋中。4星期质控血清 / 标准血清开封后保存于2-8。有效期内；24个月酶标记抗体立即可用的溶液于2-8储存。避免污染（使用无菌针头）。有效期内24个月稀释缓冲液开启后于2-8储存。有絮状时丢掉未开封18个月有效期内36个月洗涤液浓缩液开封后保存于2-8。工作液在2-8。工作液在室温下。盛过工作液的瓶子应按常规方法清洗，并丢弃混浊溶液。有效期内2星期1星期底物2-8储存，避光。避免污染（使用无菌针头）。当溶液变为黄色时应予以丢弃（水
9、作空白，吸光度大于0.25时）。有效期内24个月终止液开封后保存于室温下。有效期内7. 赛润 ELISA classic的检验步骤7.1注意事项只有全部使用赛润 ELISA classic试剂才能保证检测效果，因为所有试剂都是有关联的，不能混用其他制造商的产品。尤其是标准血清，对照血清以及酶标记物，必须使用试剂盒配备的，不要使用其它批号产品。稀释缓冲液，洗液，终止液和底物溶液可用于所有赛润 ELISA classic试剂盒。未开封的情况下，如果保存于2-8，ELISA classic试剂盒内所有试剂均在标定的有效期内有效。详细的稳定性和储存资料在“6. 储存及稳定性”内将加以详述。每一种试剂都
10、是经过校准以保证最佳的检测结果。这些试剂如果经过稀释或改动都会导致检测的敏感度的降低。在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，试剂避免受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。如果铝袋破损或者已开启装有干燥剂的铝袋而未以夹子封紧的，则不要继续使用微孔条。开始试验前，将所有试剂置于室温。从试剂管中吸取试剂的时候，应注意使用无菌技术以防污染。为避免假阳性结果，吸加酶结合物时，吸嘴应确保不接触或喷洒于小孔的顶避，注意不要盖错瓶盖或管盖。试验结果的可重复性依赖于充分混合试剂。使用前振荡装有对照血清的小管和所有稀释过的溶液（例如使用混合器）。小心吸
11、取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本 / 对照血清，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。只有严格遵守赛润ELISA classic试剂的试验说明才会得到最佳的检测结果。如果实验中未严格遵守质量控制认证文件上的有效性特异准则，则试验结果无效。洗涤不充分将影响试验结果：应该小心进行洗涤。洗涤步骤应遵守相关洗涤器（平底孔，孔直径7毫米，深10.9毫米）指导手册进行，所有的孔内均应加入相同体积的洗涤缓冲液。洗涤结束时，应将微孔板倒扣于纸巾上并轻轻敲打，以确保所有孔内均无洗涤缓冲液。避
12、免产生泡沫！如果使用自动洗板机，注意正确操作。7.2检验前的准备工作和储存为避免干扰结果，高血脂的，溶血的，或污染的血清不要用于检测。样品不应加热灭活。7.2.1样品准备 赛润 ELISA classic 巨细胞 IgG开始试验前，患者的待测样品必须以稀释缓冲液稀释如下（V1+V2）：V1+V2=1+100 加 10微升 患者待测样品 于 1000微升 稀释缓冲液稀释后及加入微孔板前，样品必须充分混合。赛润 ELISA classic 巨细胞 IgM类风湿因子抗体是IgM的自体抗体，可与IgM免疫复合物结合。非特异性IgM抗体（类风湿因子）的存在将导致IgM检测的假阳性结果。另外，也存在弱结合
13、的病原体特异性IgM抗体被强结合的IgG抗体取代的可能性。在这种情况下，IgM的检测将得到假阴性的结果。因此，在进行IgM检测前应用类风湿因子吸附剂对血清作预处理。特别类风湿因子Rf吸附剂（产品编号T200,20ml）不仅包含抗人IgG抗体，还含有一定量的对照抗原。类风湿因子和抗体可识别宿主细胞的膜成份，并与之结合。不必进行微量孔内覆有对照抗原的平行试验。在进行以下SERION ELISA classic IgM检测时，此类RF吸附剂需作为附加试剂另行购买:巨细胞，单纯疱疹病毒，麻疹，腮腺炎，风疹病毒，刚地弓形虫，带状疱疹病毒首先应该使用稀释缓冲液(V2)对类风湿因子吸附剂(Rf-吸附剂/对照
14、抗原)(V1)进行如下稀释：V1+V2=1+4 加 200微升 Rf-吸附剂/对照抗原 于 800微升 稀释缓冲液中然后将患者的待测样品(V1)在此Rf-稀释缓冲液(V3)中进行稀释：V1+V3=1+100 加 10微升 患者待测样品 于 1000微升 Rf-稀释缓冲液中 7.2.2 样品储存密封的患者样品可在冰箱中2-8保存7天。 -20可保存更久。避免样品反复冻融。已稀释的样品可在2-8 保存一星期。7.3 试剂盒反应试剂的准备7.3.1 微孔条微孔条置于一框架内，并与干燥剂一同封于铝袋之中。应将不需要的微孔条取下并重新放入铝袋。将袋口折叠2-3次，并以夹子夹紧，确保铝袋的密封性。7.3.2 对照血清 / 标准血清对照和标准
