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1、扬州制药有限公司 SOPQV-JY013-01 文件名称液相色谱仪校验规程文件编号SOPQC-JY013-01替代原文件编号SOPQM2-027-5-2起草人日期发放部门：质量控制部、质量保证部、办公室审核人日期批准人日期制订部门质量控制部生效日期变更记载：增加附件，校验记录格式。1 流速准确度校验1.1 仪器及试剂1.1.1 仪器 秒表，50mL容量瓶，25mL容量瓶1.1.2 试剂 水 1.2 校验过程连接泵和管道，接通电源，设置流速2.0ml/min，开启泵，同时在流路出口处用50 ml容量瓶进行收集，至刻度，读取收集时间，计算流速，误差应不超0.02ml/min再次设置流速1.0ml/
2、min，开启泵，同时在流路出口处用25ml容量瓶进行收集，至刻度，读取收集时间，计算流速，误差应不超过0.02ml/min。2 温度准确度的校验2.1 仪器及试剂2.1.1 仪器 标准铂电阻温度计2.1.2 试剂 甲醇2.2 校验过程设定柱温箱温度40，待柱温箱温度稳定后，每间隔1分钟测定一次柱温箱温度，并记录下变化情况。判断标准，连续测定6个点，任一点温度误差不得超过1，报告以6点中最大误差报告。3 波长准确度校验3.1 仪器及试剂3.1.1 仪器 50ml容量瓶，分析天平（十万分之一），液相色谱仪3.1.2 试剂 氢化可的松标准品 甲醇：水（1:1）3.2 校验过程3.2.1 校验溶液3.
3、2.1.1 精密称取氢化可的松标准品10mg，用甲醇：水（1:1）溶液溶解并稀释至50ml，精密吸取5.0ml于50mL容量瓶中，用甲醇：水（1:1）溶液稀释至刻度备用。3.2.1.2 校验过程用甲醇：水（1:1）为流动相（不接色谱柱），流速1.0ml/min，紫外检测器Waters2487，在仪器冲洗平衡后，将装有氢化可的松溶液的1cm石英比色皿放入Waters2487的扫描池，设定扫描速度50nm/min，扫描范围200nm-400nm，按SCAN扫描，并同时记录下扫描图谱，最大吸收波长应为242nm，如有误差，误差不得超过2nm。4 定量定性重复性校验4.1 仪器及试剂4.1.1 仪器
4、液相色谱仪，25ml、50ml容量瓶，10l定量管，分析天平（十万分之一）4.1.2 试剂 氢化可的松标准品，氢化可的松含量用流动相，甲醇：水（1:1）溶液。4.2 校验过程精密称取氢化可的松标准品25mg于25ml容量瓶中，用甲醇：水（1:1）溶液溶解并稀释至刻度，精密吸取2.0ml于50ml容量瓶中并用甲醇：水（1:1）溶液稀释至刻度，设定波长254nm，氢化可的松含量用流动相洗脱，流速1.0ml/min，准确吸取10l连续进样5次，记录峰响应及保留时间，峰响应RSD应不超过2.0%，保留时间RSD应不超过1.0%。5 检测器线性校验5.1 仪器及试剂5.1.1 仪器 液相色谱仪，100m
5、l、50ml容量瓶，10ul定量管，2ml，5ml，10ml，15ml，20ml移液管，分析天平（十万分之一）5.1.2 试剂 氢化可的松标准品，氢化可的松含量用流动相，甲醇：水（1:1）溶液。5.2 校验过程精密称取氢化可的松标准品25mg于100ml容量瓶中，用甲醇：水（1:1）溶液溶解并稀释至刻度，备用，并分别吸取2.0ml，5.0ml，10.0ml，15.0ml，20.0ml，置50ml容量瓶，甲醇：水（1:1）溶液稀释至刻度，配制成0.010mg/ml，0.025mg/ml，0.050mg/ml，0.075mg/ml，0.100mg/ml的浓度。设定波长254nm，氢化可的松含量用流
6、动相洗脱，流速1.0ml/min，在仪器稳定状态下，各溶液进样10l，记录各浓度下氢化可的松的峰响应，并计算相关系数，应不小于0.9995。6 进样器线性校验6.1 仪器及试剂6.1.1 仪器 液相色谱仪，25ml，50ml容量瓶，2mL移液管,2l，5l，10l，20l，50l定量管。6.1.2 试剂 氢化可的松标准品，氢化可的松含量用流动相，甲醇：水（1:1）溶液。6.2 校验溶液精密称取氢化可的松标准品25mg用甲醇：水（1:1）溶液溶解并稀释至25ml，精密吸取2.0ml于50ml容量瓶中，用甲醇：水（1:1）溶液稀释至刻度备用。6.3 校验设定波长254nm，氢化可的松含量流动相洗脱
7、，流速1.0ml/min，在仪器稳定状态下，分别更换2l，5l，10l，20l，50l定量管测定样品，并分别记录峰响应，计算相关系数，应不小于0.9995。7 残留量取定量定性重复性项下的氢化可的松标准品溶液，进样10ul，记录峰响应，用同一注射器吸取甲醇：水（1:1）溶液清洗进样器5次，再吸取10l甲醇:水（1:1）溶液进样，如有氢化可的松峰出现,记录峰响应，并计算残留量，应不大于0.2%。8 最低检测限配制不同浓度的氢化可的松溶液，分别吸取10l进样，记录峰响应。以S/N3，计算最低检测限，应不大于5.010-10g。9 校验周期：每年校验一次。10 附件10.1 记录格式液相色谱仪校验记
8、录1、流速准确度校验1.1 仪器及试剂1.1.1 仪器 秒表，50ml容量瓶，25ml容量瓶1.1.2 试剂 水1.2 校验过程50 ml容量瓶进行收集，至刻度，读取收集时间，计算流速，误差应不超0.02ml/min再次设置流速1.0ml/min，开启泵，同时在流路出口处用25ml容量瓶进行收集，至刻度，读取收集时间，计算流速，误差应不超过0.02ml/min。设定值(ml/min)收集体积(ml)实测时间(min)实测流速(ml/min)误差(ml/min)2.050.01.025.02、温度准确度的校验2.1 仪器及试剂2.1.1 仪器 标准铂电阻温度计2.1.2 试剂 甲醇2.2 校验过
9、程设定柱温箱温度40，待柱温箱温度稳定后，每间隔1分钟测定一次柱温箱温度，并记录下变化情况。判断标准，连续测定6个点，任一点温度误差不得超过1，报告以6点中最大点误差报告。间隔时间t(min)设定值()实测值()误差()140234563、波长准确度校验3.1 仪器及试剂3.1.1 仪器 50ml容量瓶，分析天平（十万之一），液相色谱仪3.1.2 试剂 氢化可的松标准品 甲醇：水（1:1）3.2 校验过程3.2.1 检验溶液3.2.1.1 精密称取氢化可的松标准品10mg，用甲醇：水（1:1）溶液溶解并稀释至50ml，精密吸取5.0ml于50ml容量瓶中,用甲醇：水（1:1）溶液溶解稀释至刻度
10、备用。3.2.1.2 校验过程用甲醇：水（1:1）为流动相（不接色谱柱），流速1.0ml/min，紫外检测器Waters2487，在仪器冲洗平衡后，将装有氢化可松溶液的1cm石英比色皿放入Waters2487的扫描池，设定扫描速度50nm/min，扫描范围200nm-400nm，按SCAN扫描，并同时记录下扫描图谱，最大吸收波长应为242nm。如有误差，误差不得超过2nm。氢化可的松标准品称重量： g标准值(nm)实测值(nm)误差(nm)2424、定量定性重复性校验4.1 仪器及试剂4.1.1 仪器 液相色谱仪，25ml、50ml容量瓶，10l定量管，分析天平（十万分之一）。 4.1.2 试
11、剂 氢化可的松标准品，氢化可的松含量用流动相，甲醇：水（1:1）溶液。4.2 校验过程精密称取氢化可的松标准品25mg，于25ml容量瓶中，用甲醇：水（1:1）溶液溶解并稀释至刻度，精密吸取2.0ml于50ml容量瓶中并用甲醇：水（1:1）溶液稀释至刻度，设定波长254nm，氢化可的松含量用流动相洗脱，流速1.0ml/min，准确吸取10l连续进样5次，记录峰响应及保留时间，峰响应RSD应不超过2.0%，保留时间RSD应不超过1.0%。氢化可的松标准品称重量： g进样次数(#)峰面积保留时间(min)峰面积RSD%保留时间RSD%123455、检测器线性校验5.1 仪器及试剂5.1.1 仪器
12、液相色谱仪，100ml、50ml容量瓶，10l定量管，2ml，5ml，10ml，15ml，20ml移液管，分析天平（十万分之一）。5.1.2 试剂，氢化可的松标准品，氢化可的松含量用流动相，甲醇：水（1:1）溶液。5.2 校验过程精密称取氢化可的松标准品25mg于100ml容量瓶中，用甲醇：水（1:1）溶液溶解并稀释至刻度，备用，并分别吸取2.0ml，5.0ml，10.0ml，15.0ml，20.0ml，置50ml容量瓶，用甲醇：水（1:1）溶液稀释至刻度，配制成0.010mg/ml，0.025mg/ml，0.050mg/ml，0.075mg/ml，0.100mg/ml的浓度。设定波长254n
13、m，氢化可的松含量用流动相洗脱，流速1.0ml/min，在仪器稳定状态下，各溶液进样10ul，记录各浓度下氢化可的松的峰响应，并计算相关系数，应不小于0.9995。氢化可的松标准品称重量： g浓度(mg/ml)峰面积(平均)相关系数r0.0100.0250.0500.0750.1006、进样器线性校验6.1 仪器及试剂6.1.1 仪器 液相色谱仪，25ml，50ml容量瓶，2ml移液管，2ul，5ul，10ul，20ul，50ul定量管。6.1.2 试剂 氢化可的松标准品，氢化可的松含量用流动相，甲醇：水（1:1）溶液。6.2 校验溶液精密称取氢化可的松标准品25mg用甲醇：水（1:1）溶液溶
14、解并稀释至25ml，精密吸取2.0ml于50ml容量瓶中，用甲醇：水（1:1）溶液稀释至刻度备用。6.3 校验设定波长254nm，氢化可的松含量用流动相洗脱，流速1.0ml/min，在仪器稳定状态下，分别更换2l，5l，10l，20l，50l定量管测定样品，并分别记录峰响应，计算相关系数，应不小于0.9995。氢化可的松标准品称重量： g定量管体积(l)峰面积(平均)相关系数r251020507、残留量取定量定性重复性项下的氢化可的松标准品溶液，进样10l，记录峰响应，用同一注射器吸取甲醇：水（1:1）溶液清洗进样器5次，再吸取10l甲醇：水（1:1）溶液进样，如有氢化可的松峰出现，记录峰响应，并计算残留量，应不大于0.2%。标准品溶液主峰面积进样器残留主峰面积残留量（%）8、最低检测限配制不同浓度的氢化可的松溶液，分别吸取10l进样，记录峰响应。以S/N3，计算最低
