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1、病毒性肝炎病毒性肝炎是由多种肝炎病毒引起的,以肝脏炎症和坏死病变为主的一组传染病.。主要通过粪口、血液和体液而传播。临床以疲乏、食欲减退、肝肿大、肝功能异常为主要表现。部分病例出现黄疸，无症状感染常见。因其病原不同而分为甲、乙、丙、丁、戊、己和庚七型。（一） 甲肝（HAV）的实验室诊断1、抗HAV IgM检测常用捕捉夹心ELISA法检测。该抗体的检出具有确诊意义，一般在临床症状出现后，患者血清中抗HAV IgM阳性，13个星期达高峰，12个月内含量下降，13个月左右转阴，故抗HAV IgM阳性，尤其滴度较高（1000）时，常表明为急性HAV感染或复发。 2、抗HAV IgG抗HAV IgG较抗
2、HAV IgM晚一周，可持续数年或终生。（二） 乙型肝炎（HBV）的实验诊断1、 HbsAg HbsAg多用固相放射免疫分析和ELISA检测。HbsAg是乙肝最先出现的病理标志物，在急性肝炎的潜伏期即可出现阳性，其检测结果有助于乙肝的诊断，据此采取及时措施，对减少输血后肝炎、控制乙肝的母婴传播有经济意义。2、 抗HBs 抗HBs方法同HbsAg的检测，其阳性显示机体曾受乙肝病毒感染并产生相应的抗体，抗HBs对HBV的侵袭具有免疫力，被认为是保护性抗体。3、 HbeAg HbeAg采用双抗体夹心ELISA法检测。它是乙肝传染性的标志，检测其有助于HbeAg携带者传染性强弱，母婴传播的危险率及急性
3、乙肝的预后等。4、 抗Hbe 为HbeAg刺激机体产生的非保护性抗体。HbeAg消失和抗Hbe的出现显示乙肝病情的好转，但不能作为无传染性的指标，也不一定是对机体有益的标志（甲胎蛋白与之有相关性）。当HbeAg阳性同时出现了抗Hbe，大部分患者生化指标趋于正常，临床病情稳定。但此时多有HBV DNA与肝细胞的整合，病理进程并未停止。因此临床上由于HBV感染所致的肝硬化和肝癌患者，有较高的HbeAg和抗Hbe同时存在的阳性率。5、 抗HBc 抗HBc用竞争ELISA法检测。高滴度的抗HBc阳性表明肝内HBV在复制，低滴度则示既往感染。几乎所有的个体在感染HBV后总能产生抗HBc，因此它是流行病学
4、调查的良好指标。6、 HbcAg HbcAg存在证明HBV感染。（三） 抗HCV 抗HCV检测用ELISA方法，而HCVRNA须以RTPCR检测。大多数感染有HCV的患者，体内均出现抗HCV，但由于其出现较慢，一般在发病后26个月才为阳性，有的在第12个月才出现，故阴性不能发现早期患者，且少数患者为一过性HCV感染，抗HCV始终阴性，所以一次阴性并不能排除HCV的诊断。抗HCV检测在献血员的筛选中能排除85%具有HCV传染性者，因此对预防丙肝具有重要意义。若HCVRNA和抗HCV同时阳性为活动性HCV感染，反之前者阴性而后者阳性是既往感染。（四） 抗HDV和抗HDV IgM检测一般运用竞争EL
5、ISA法检测抗HDV，而以捕捉夹心ELISA法检测抗HDVlgM。患者只有在感染了HBV后，才会感染HDV，因此临床上常见为乙肝与丁肝病毒同时感染或重叠感染。在这些患者血清中有HbsAg等乙肝学标志物，故检测HbeAg、抗Hbe和HBs可提示丁肝的预后。抗HDV检测代表总抗体，可借以诊断感染，尤其是高滴度抗HDV可确诊为慢性HDV感染。抗HDV lgM的检测有助于早期诊断，表示急性或新近感染HDV，慢性活动期也可阳性，但效价较低。（五） 抗HEV检测用间接ELISA法检测。阳性者为感染的证据，其阴性结果并不能排除患者对HEV暴露过。（六） 庚型肝炎的检测抗-HGV为感染的证据。 HBV拉米夫定
6、耐药检测临床意义一、 项目名称：HBV拉米夫定耐药检测二、检测方法：荧光PCR三、概述：拉米夫定（Lamivudine，3TC）全称是2，3-双脱氧-3-硫胞嘧啶核苷（1）-L-2，3-deoxy-3-thiacytidine），是一种核苷类似物，拉米夫定被吸收后在细胞内磷酸化，形成拉米夫定（3TC）的5三磷酸盐（3TC-TP），主要为抑制病毒复制时必需的逆转录酶活性。目前认为拉米夫定抑制病毒复制的机制可能有三种：（1）3TC-TP与磷酸脱氧胞嘧啶核苷（dCTP）竞争HBV和HCV等多聚酶的三磷酸核苷结合部位；（2）3TC-TP导致HBV和HCV等反转录酶、多聚酶的不可逆性及剂量依赖性抑制；（
7、3）3TC-TP竞争性掺入延伸的DNA，因它缺乏3羟基而使复制的病毒DNA链终止。3TC仅抑制病毒 DNA的复制量及其复制中间体的产量，而对病毒 RNA、病毒抗原和已形成的共价闭环、超螺旋结构的病毒 DNA无作用。HBV及其抗原自肝细胞内的彻底清除，要靠机体自身的特异性免疫清除及病毒抗原的自然半衰期。拉米夫定作为新一代核苷类高效抗乙肝病毒药物，可迅速降低HBV-DNA的浓度，改善肝脏组织的病变，还可能阻止纤维化的进程，终止肝硬化的发展，尤其是拉米夫定不受人种、病毒感染的模式、野生型或基因组前C区突变的影响。该药与干扰素合用有协同作用。但是，长期服用拉米夫定会引起HBV基因突变而造成耐药，其中9
8、5%是由于HBV基因组P区中高度保守的YMDD功能区（Y酪氨酸M甲硫氨酸D天冬氨酸- D天冬氨酸）发生突变：第552位甲硫氨酸（M）被缬氨酸（V）或异亮氨酸（I）代替，突变后的HBV称为YVDD变异株和YIDD变异株。由于变异造成基因组核苷酸与DNA多聚酶的结合能力有降低，通常变异株的复制能力低于野生株。当停止应用拉米夫定治疗后，野生株通常会替代变异株。当HBV对拉米夫定耐药时，继续应用拉米夫定仍能抑制野生株，但变异株因耐药能进行增殖，临床上血清ALT水平可能出现暂时上升，并有轻度乏力、恶心等肝脏炎症损伤加剧等症状。有研究表明：拉米夫定耐药的平均发生率为24%，用药一年YMDD变异株发生率为1
9、216%，用药2年YMDD变异株发生率可达到58%。因此，在拉米夫定用药过程中对HBV的耐药情况进行监测极为重要，可以根据它及时调整治疗方案，以免延误病情和造成经济上浪费。HBV DNA荧光定量检测的临床应用 一、概述： 荧光定量PCR（FQ-PCR）技术使PCR实现了从定性到定量的革命性飞跃，融汇了PCR的高灵敏性、DNA杂交的特异性和光谱技术的高精确定量等优点，它有效地解决了其它方法很难处理的PCR污染的问题，并改善了PCR的应用如可广泛应用于临床观测患者病情发展及预后，判断药物疗效等。该技术以其明显的可靠性和优越性，迅速受到广泛的应用，已逐渐成为国际主流PCR技术，为PCR技术全面进入常
10、规临床应用打开了成功之门，同时也代表了PCR技术的发展方向。二、HBV DNA荧光定量测定的意义：1 全程动态观察病毒含量 病毒中的DNA是病毒存在和复制的直接证据，因此我们可以通过动态检测乙肝患者血清中DNA含量而对病人病毒活动情况有更真实和全面的了解，对科研、临床以及流行学研究均可提供有力的依据。2 选择治疗时机 FQ- PCR方法检测患者血中病毒含量，有利于明确病毒活动复制情况，决定是 否需要接受治疗以及采取何种治疗方案。3 估计治疗反应 研究表明，血清乙肝病毒低拷贝者干扰素治疗比高拷贝者要敏感，观察药物疗效。在应用干扰素治疗治后，病人HbeAg可以有明显下降，但HBV-DNA的消失比H
11、BeAg的消失早几周到几个月出现，更适于指导临床用药。4 选择治疗方案 慢性乙肝病人使用干扰素治疗，只有30-50%的病人有反应；干扰素价格昂贵并有一定的副作用，因此对采用干扰素治疗的病人，在治疗前后作HBV DNA浓度测定，有利于观察药物疗效，对治疗无反应者，应及时更换治疗方案，降低不必要的费用。5 治疗后随访及检测复发 在抗病毒治疗结束后，用PCR方法继续监测病毒定量，定期复查，可以 及时发现复发病人，及早给予治疗。6 抗病毒药物疗效的评价和监测 Marcellin等观察了60例接受单磷酸阿腺甘的慢性乙肝患者，按治疗前检测的HBV水平分两组。结果显示，低水平组治疗结束后11/30（37%）
12、的患者HBV DNA转阴，高水平组1/30（3.3%）HBV DNA转阴，两者有显著差异。 7围产期保健 通过测定孕妇围产期HBV-DNA含量，衡量其乙肝传染性，可预测其新生儿乙肝疫苗预防的成败。HCVRNA荧光定量检测的临床意义一、概述： 荧光定量PCR技术使PCR实现了从定性到定量的革命性飞跃，融汇了PCR的高灵敏性、DNA杂交的特异性和光谱技术的高精确定量等优点，它有效地解决了其它方法很难处理的PCR污染的问题，并改善了PCR的应用如可广泛应用于临床观测患者病情发展及预后，判断药物疗效等。该技术以其明显的可靠性和优越性，迅速受到广泛的应用，已逐渐成为国际主流PCR技术，为PCR技术全面进
13、入常规临床应用打开了成功之门，同时也代表了PCR技术的发展方向。二、荧光定量测定的意义：1动态观察病毒含量 病毒中的RNA是病毒存在和复制的直接证据，因此我们可以通过动态检测血清中RNA含量而对病人病毒活动情况有更真实和全面的了解，对科研、临床以及流行学研究均可提供有力的依据。2 选择治疗时机 PCR方法检测患者血中病毒含量，有利于明确病毒活动复制情况，决定是 否需要接受治疗以及采取何种治疗方案。3 估计治疗反应 4治疗后随访及检测复发在抗病毒治疗结束后，用PCR方法继续监测病毒定量，定期复查，可以 及时发现复发病人，及早给予治 乙型肝炎两对半定量检测的临床应用一、 概述乙型肝炎遍布全世界。在
14、我国乙肝病毒感染率很高， HBsAg携带率为10%左右，且南方高于北方。在临床上HBV不仅可引起人类患急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化和无症状HBsAg携带者，还可以引起细胞转化或诱发肝癌，原发性肝癌患者常伴有肝硬化且1/3有慢性肝炎病史。由于乙肝的发病机理与机体免疫反应密切相关，所以乙型肝炎血清学指标的定量检测对乙肝的预防、诊断与鉴别诊断、治疗效果及乙 肝疫苗免疫效果考察有重要作用。二、 两对半定量检测的临床意义、 乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、 乙型肝炎表面抗原（HBsAg）由Dane颗粒的外层、小球形颗粒和杆状颗粒构成。根据电镜观察，Dane颗粒数量与HBsAg在血清的浓度成正比，HBsAg
15、高峰值也就是血清内Dane颗粒最多的时期，也就是症状即将开始的时期，也是转氨酶高峰值。所以HBsAg的检测对乙型肝炎的诊断和鉴别诊断有重要作用。、 治疗效果考察和抑制HBV的药物筛选。、 乙型肝炎预后判断：急性乙肝病人血清中HBsAg往往携带一个短时期，然后逐渐转阴。如HBsAg长期高滴度携带，预示疾病慢性化。、 病毒性肝炎的分型诊断。、 献血员筛选、供精者筛选和胎盘选择。、 婚前检查、饮副食行业从业人员、公共场所服务人员和托幼机构人员的健康检查及乙肝感染率调查。、 乙型肝炎表面抗体（抗-HBs） 、抗-HBs是对HBV免疫的指标，抗-HBs的滴度可表示患者的免疫状况。血清中检出抗-HBs表示疾病在恢复或既往受过HBV的感染。急性乙型肝炎病人 HBsAg阴转，同时抗-HBs阳转，是病情恢复的表现。但慢性肝炎病人和HBsAg 携带者往往缺乏此抗体，这与病人的免疫能力有关。 、乙型肝炎的诊断和鉴别诊断，在HBV感染后3个月，血清中出现
