《000001a4_林德峰-临床评价.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《000001a4_林德峰-临床评价.doc（12页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、米诺环素与利福平联用对100株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抗菌活性林德峰1,于旭红2,白艳1,宋秀杰2,梁蓓蓓2,蔡芸2,白楠2,钱金栿1*,王睿2*(1.大理学院药学院,云南大理 671000；2. 中国人民解放军总医院,临床药理研究室 北京100853）摘要：目的 为了评价米诺环素和利福平对临床分离得到的100株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-residtant Staphloccus aureus,MRSA）的联合体外抗菌活性，探讨两药联用的抗MRSA效应。方法 通过采用棋盘法设计,微量肉汤稀释法测定不同浓度组合的抗菌药物对100株临床分离MRSA最低抑菌浓度,并计算部分
2、抑菌浓度（Fractional Inhibitory Concentration FIC）指数判定联合效应。FIC指数的判定标准：FIC 0.5为协同作用,0. 5 4 为拮抗作用。结果 米诺环素和利福平联合应用后,两种抗菌药物对临床分离得到的100株MRSA的MIC50显著降低。FIC指数分布情况:FIC0. 5占92%；0. 5 4为0。结论 本研究结果表明米诺环素利福平联合应用对 100 株临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌体外抗菌效应表现为以协同作用为主,无关作用较少,无拮抗作用。关键词：米诺环素；利福平；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）；部分抑菌浓度（FIC）指数；联合药敏In
3、Vitro Activity of Minocycline in Combination with Rifampin on 100Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus Lin de-feng1，Yu xu-hong2，Bai yan1，Song xiu-jie2，Liang bei-bei2，Cai yun2，Bai nan2，Qian jin-fu1*，Wang rui2*(1.College of pharmacy, Dali University, Yunnan 671000, China；2.The Chinese PLA Genera
4、l Hospital .Beijing 100853 ,China)ABSTRACTObjective The objective of the study was to investigate the in vitro activity of Minocycline combined with Rifampin against MRSA. Methods 100 strains of MRSA isolated from two China hospitals clinical specimens of human infections were used in this study. Th
5、e checkerboard method was used to determine the combinations activity against these strains. The susceptibility results for Minocycline and Rifampin were interpreted according to the guidelines of the CLSI. The FIC index was calculated according to MIC results - antagonism was defined as FIC 4, indi
6、fference as FIC 0.5 and 4, and synergism as FIC 0.5. Results The MIC50 was reduced significantly for the combination of Minocycline and Rifampin against Staphylococcus aureus compare to use Minocycline and Rifampin alone.The results of combination of Minocycline and Rifampin were: 92% (92/100) syner
7、gism; 8% (8/100) indifference (minimum and maximum fractional inhibitory concentration index 0.13 and 0.53 respectively),and no antagonismConclusion combinations of Minocycline and Rifampin may show synergism for most MRSA, and there was on antagonism. which may be a future therapeutic alternative f
8、or infections caused by MRSA. Keywords: Minocycline; Rifampin; methicillin-resistant staphylococcus aureus (MRSA); fractional inhibitory concentration (FIC) Index; synergism 自英国首次检出耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant staphylococcus aureus ,MRSA）以来，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (Methicillin-residtant Staphloccus aure
9、us ,MRSA)在世界各地广泛传播日益加快，成为医院感染和社区获得性感染的主要致病菌14。2006年中国CHINET细菌耐药性监测显示MRSA在金葡菌感染中的比例平均为76.3%,MRSA这种“超级细菌”感染已经达到了严重的程度5。MRSA感染治疗的难度来源于多方面：其存在广泛的耐药性、MRSA的毒力提高、抗生素的不合理应用等6。2001年日本首次报道MRSA引起心内膜炎经万古霉素治疗无反应7，万古霉素及替考拉宁对MRSA的抗菌活性均有些下降趋势，还有对利奈唑胺及奎奴普丁/达福普汀（quinupristin/dalfopristin)耐药及治疗失败的报道8,9，MRSA 不仅对内酰胺类抗菌药
10、物耐药,而且也屡见对大环内酯类、四环素类、氨基糖苷类抗菌药物均耐药的报道10，11。目前抗MRSA感染的一线药物主要有万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺等。更新的药物替加环素、达托霉素对MRSA也有良好效果，但缺少临床经验并且花费很高,当患者确认为重度MRSA感染时才选用万古霉素等一线药物，轻度的MRSA感染可以根据药敏结果选择米诺环素、夫西地酸、利福平、氟喹诺酮类与其他药物联合应用12。抗生素联合应用可以降低药物的剂量，避免单药治疗出现的选择性耐药问题从而减低细菌耐药的产生。新的抗生素的研究发展的遇到前所未有的尴尬的境地，由于细菌耐药的产生使新的抗生素的研究开发的速度明显减慢，更多的药品研发的公司
11、转向了其他疾病的药物13，14。1983-2007年间新的抗菌药物获得上市的比例下降了75%15。一种新型药物有时在未大量上市就出现了耐药16，一旦广泛用于临床，其耐药性迟早总会出现，随着耐药性的不断增加，供选择的有效方案十分有限。所以全球的制药公司正在寻找新的途径 ，其中之一就是对老的药物进行研究17。米诺环素(minocycline)是一种高效、长效和低毒的新型四环素的半合成衍生物，1972年上市，盐酸米诺环素是目前临床使用最广的一种四环素类抗生素，主要对革兰阳性菌，包括四环素耐药的金黄色葡萄球菌、链球菌属、脑膜炎双球菌等均高度敏感。有报道米诺环素与氨基糖苷类（奈替米星）联用对MRSA抗菌
12、活性呈协同和相加作用，无拮抗作用18。利福平属半合成利福霉素类广谱抗菌药，主要为抗结核一线用药,对金黄色葡萄球菌有一定的抗菌作用，因细菌对利福平的耐药性产生很快，一般不应该单独使用19。文献报道利福平与其他抗生素联合作用于MRSA有协同作用20，而且在临床上利福平与达托霉素联合应用于金黄色葡萄球菌引起的心内膜脓毒症的治疗取得很好的疗效，可作为在万古霉素治疗不理想的情况下优先考虑的治疗方案21，未见米诺环素与利福平两药联合应用报道。本实验拟通过研究米诺环素与利福平对100株MRSA的联合体外抗菌效应，本项研究旨在通过体外米诺环素与利福平联合药敏实验为评价体外联合抗MRSA效应提供可靠的实验依据，
13、为进一步的体内实验以及临床合理用药提供依据。1 材料与仪器1.1 菌株来源100株分别来自中国人民解放军总医院2008年1月至2009年9月间和北京协和医院2009年1月至2009年11月期间的MRSA非重复临床分离菌株，其中50株来源于呼吸道，29株来源于血培养，5株来源于尿液，4株来源于脓包分泌物， 12株来源于其他外科伤口等；用15%甘油+脑心浸液分装后放置 -80 冰箱保存,测定前复苏( 经VITEK 重新鉴定,并用头孢西丁纸片确认为MRSA)； ATCC29213购自中国药品生物制品检定所。1.2 培养基 Muller - Hinton (MH) 肉汤和Muller -Hinton
14、(MH) 琼脂(美国Difco 公司产品) ；乳胶凝集法金黄色葡萄球菌鉴定试剂盒购(法国Bio-Merieux公司)。1.3 抗菌药物 米诺环素标准品（中国药品生物制品检定所，批号130514-200401，纯度为85.10%）；利福平标准品（中国药品生物制品检定所，批号130496-200702，纯度为98.00%）。头孢西丁药敏纸片（中国药品生物制品检定所）。1.4 仪器 比浊仪(法国梅里埃公司) ；连续微量加样器(美国Eppendorf 公司) ；八导微量加样器(美国Eppendorf 公司) ；96 孔平板(爱思进医用塑料（台州）有限公司)。DHP-9162电热恒温培养箱（上海一恒科学
15、仪器有限公司）；2 方法 2.1 MRSA鉴定临床分离的100株MRSA菌株均用乳胶凝集法金黄色葡萄球菌鉴定试剂盒重新鉴定确认。按美国临床实验室标准化委员会（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）抗生素敏感试验执行标准6，用头孢西丁纸片进行筛选确认。头孢西丁（每片30g）纸片对102株金黄色葡萄球菌做药敏试验，头孢西丁纸片抑菌圈直径19为耐药，则可确定为MRSA。2.2 菌悬液配制 从已分纯并过夜新鲜培养的细菌平板上挑取45 个菌落,接种于MH 肉汤中增菌6h（恒温，震荡培养）。菌液用3ml MH 肉汤校正比浊仪浊度至0.5MacFarland ,再用MH 肉汤稀释至1. 5 105 cfumL 1 。2.3 抗菌药物储备液配制按照表1所示，精密称取适量米诺环素和利福平，根据CLSI2009以相应溶剂溶解，于25mL容量瓶中定容，含药储备液浓度均为1024(gmL 1)，然后进行分装冷藏，备用即可。表1. 抗菌药物储备液的配制Tab1. The preparation of antibiotics conuntrative solutionantibacterials solvent density (gmL 1)Minocycline steril
