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1、文档从网络中收集，已重新整理排版.word版本可编辑欢迎下载支持.淀粉的液化实验报告篇一：淀粉液化及糖化实验淀粉液化及糖化实验一、实验目的1. 掌握用酶解法从淀粉原料到水解糖的制备原理及方 法； 2. 掌握还原糖的测定方法。二、实验原理在发酵过程中，因有些微生物不能直接利用淀粉，当以 淀粉为原料时，必须先将淀粉水解成葡萄糖，才能供发酵使 用。一般将淀粉水解为葡萄糖的过程成为淀粉的糖化，所制 得的糖液成为淀粉水解糖。水解淀粉为葡萄糖的方法包括酸 解法、酸酶结合法和酶解法。实验室常采用酶解法制备淀粉 水解糖。酶解法是指利用淀粉酶将淀粉水解为葡萄糖的过程。酶 解法葡萄糖可分为两步：第一步是利用a -
2、淀粉酶将淀粉转 化为糊精及低聚糖，使淀粉的可溶性增加，这个过程称为液 化；第二步是利用糖化酶将糊精或低聚糖进一步水解，转变 为葡萄糖的过程，这个过程在生产上成为糖化。淀粉的液化 和糖化都是在酶的作用下进行的，故该方法也称为双酶法。 1. 酶解法液化原理淀粉的酶解法液化是以a -淀粉酶作为催化剂，该酶作 用于淀粉的a -1,4-糖苷键，从内部随机地水解淀粉，从而迅速将淀粉水解为糊精及少量麦芽糖，所以a -淀粉酶也称 内切淀粉酶。淀粉受到a -淀粉酶的作用后，其碘色反应发 生以下变化：蓝色f紫色f红色f浅红色f不显色(即显碘 原色)。酶解法液化因生产工艺不同分为间歇法、半连续法和连 续法；液化设备
3、分为管式、罐式和喷射式；加酶方法包括一 次加酶法、二次加酶法和三次加酶法；根据酶制剂的耐温性 分为中温酶法、高温酶法及中温酶和高温酶混合法。本实验 采用：高温酶法，间歇式，罐式，一次加酶法。2. 酶解法糖化原理淀粉的酶解法糖化是以糖化酶为催化剂，该酶从非还原 末端以葡萄糖为单位依次分解淀粉的a -1,4-糖苷键或a -1,6-糖苷键，由于是从链的一端逐渐一个个地切断为葡萄 糖，所以糖化酶也成为外切淀粉酶。 淀粉糖化的理论收率： 因为在糖化过程中有水的参与反应，故糖化的理论收率为 111.1%(C6H10O5) n +H2O fn C6H12O6三、实验仪器与试剂1. 仪器 分光光度计、恒温水浴
4、锅、烘箱、滴定管、酸度计、电 炉、离心机、白瓷板、烧杯、试管等。2. 试剂玉米淀粉、a-淀粉酶、糖化酶、PH试纸、盐酸、葡萄 糖溶液、 DNS 试剂、无水酒精等。 磷酸-柠檬酸缓冲液（PH6.0）：称取磷酸氢二钠（Na2HP04 12H20） 45.23 g, 柠檬酸（C6H8O7 H20）8.07 g,用蒸馏水溶解定容至1000 mL, 配好后应以酸度计调整PH值为6.0。原碘液（存储液）：称取0.5 g碘和5.0 g碘化钾，研 磨，溶于少量蒸馏水中，然后定容至100 mL，储存于棕色瓶 中备用。 稀碘液（工作液）：取1 m/L原碘液用蒸馏水稀 释100倍（当天制备）。 反应终止液：01 m
5、ol/L硫酸。四、实验方法1. 淀粉的液化配置30%的淀粉乳（按照01 L配制）两份，调节PH值 至6.5，加入氯化钙（固形物0.2%，钙离子的存在可以保持 a-淀粉酶在水解过程中保持活力和稳定性），加入a-淀粉 酶（1220 U/g淀粉）；在剧烈搅拌下，先加热至72 C，保 温15 min；再加热至90 C，并维持30 min，中间不停止搅 拌，以达到所需的液化程度（DE值1518%）；取小样检测碘 色反应呈棕红色；液化反应后，再升温至100120 C，保持 58 min，以凝聚蛋白质；以6000 r/min离心5 min得到上 清液。2. 淀粉的糖化迅速将上述上清液用盐酸将PH调至4. 2
6、4.5,同时迅速 降温至60 C；然后加入糖化酶（酶活力为10000 U的酶液 0.5 mL）,于60 C保温12 h；当用无水酒精检验无糊精存 在时,将溶液PH值调至4. 850,同时,将溶液加热至80 C, 保温20 min；然后将溶液温度降至6070 C,以6000 r/min 离心5 min即得到糖上清液；量取该糖液体积，取样分析还 原糖含量（测定方法参见附录“葡萄糖含量的测定（3,5-二 硝基水杨酸比色法）”相关内容）。五、实验结果1. 在详细记录实验数据基础上完成下表,计算淀粉转 化率。 葡萄糖含量计算六、实验思考1. 分析糖化酶用量对糖化效果的影响？ 2. 淀粉液 化过程中几个保
7、温过程有何作用？附录1：葡萄糖含量的测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）一、实验原理本实验是利用3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂与还原糖 溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物,在一定范围内还 原糖的含量和棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系, 故可用于比色测定。葡萄糖与3,5-二硝基水杨酸试剂反应生 成的有色物质在540 nm波长下有最大吸收峰，故在此波长 下进行比色测定。二、实验方法1. 标准曲线的绘制取6支大试管，分别编号05，按下表1加入各种试剂。 表1 葡萄糖含量的测定将各试管中溶液振荡均匀后，在沸水浴中准确煮沸5 min 将试管取出迅速用冷水冷却至室温，加入蒸馏水15 mL,摇 匀
8、。在540 nm波长下，用0号试管作为空白调零，测定其 他试管内溶液的吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄糖含量为 横坐标，绘制标准曲线。2. 样品的测定将发酵液5 mL，以5000 r/min离心5 min，取上清液1 mL置于试管中，加入DNS试剂3mL，振荡混匀后，在沸水浴 中准确煮沸5 min，取出迅速用冷水冷却至室温，加入蒸馏 水15 mL，摇匀。在540 nm波长下，用0号试管作为空白调 零，测定其他试管内溶液的吸光度。利用Origin或Excel 软件绘制的标准曲线，求出样品中葡萄糖的含量。篇二：玉米淀粉的液化与糖化玉米淀粉的液化与糖化一、实验目的1、掌握用酶法水解淀粉制备水解糖的原理
9、及方法。2、掌握还原糖的化学测定和比色测定方法。二、实验仪器、设备和材料1 设备25升罐（可用本院 25 升发酵罐代替）；装料按 20 升计， 采用小型板框过滤机压滤，烘箱；水桶，量筒。2 分析仪器分光光度计，水浴锅，糖度计，滴定管，电炉，白瓷板， 三角瓶，阿贝折光仪，比重瓶，pH计。3 实验主要原料：玉米淀粉，高温液化酶和糖化酶。三、实验原理、过程和方法1、主要过程：通过双酶法制糖，从玉米淀粉原料出发， 经配料，糊化，液化和糖化，过滤，制备成淀粉水解糖。本 实验所得到的糖液，可用于下一批酵母发酵实验。2、配料：称重，按照20 升有效体积，配制30%淀粉乳。 取样烘干至恒重，测定淀粉中的水分含
10、量。3、糊化和液化糊化原理：将淀粉乳加热，淀粉颗粒膨胀，由于颗粒的 膨胀，晶体结构消失，变成糊状液体，淀粉不再沉淀，这种 现象称为糊化。不同的淀粉的糊化温度不同。如玉米淀粉开 始糊化的温度为62.0C,中点温度为67C,终结温度为72C。 糊化分为：预糊化（吸水），糊化（体积膨胀）。糊化过程中， 要防止淀粉的老化（分子间氢键已断裂的糊化淀粉又重新排 列形成新的氢键的过程）。液化原理：液化是利用液化酶使糊化淀粉水解到一定的 糊精和低聚糖程度，粘度大大降低，流动性增加。液化方法分：酸法、酶酸法、酶法等。以生产工艺不同 又分为间歇法，半连续和连续式；液化设备有：管式、罐式、 喷射式。加酶方法有：一次
11、加酶、二次加酶、三次加酶。根 据酶制剂的耐温性分为中温酶法、高温酶法、或中温酶和高 温酶混合法。本实验采用：高温酶法，间歇式，罐式，二次加酶法。间歇液化法工艺流程：配制30%的淀粉乳，PH值6.5, 加入氯化钙（对固形物0.2%），加入液化酶（加酶量根据酶制 剂厂商的要求），在剧烈搅拌下，先加热至72C,保温15min, 再加热至90C，并维持30min，以达到所需的液化程 度（DE值：1518%）。碘反应呈棕红色：最好在液化后，再 升温至120C，保持58 min，以凝聚蛋白质，改进过滤。4、糖化糖化理论：糖化的理论收率：因为在糖化过程中，水参与反应，故糖化的理论收率为111.1%。 （C6
12、H10O5）n+nH2O=nC6H12O6淀粉 水葡萄糖162 18 180糖化实际收率：实际收率=淀粉转化率：指100份淀粉中有多少份淀粉被转化为葡萄糖。淀粉转化率的计算：转化率DE值：用DE值表示淀粉水解的程度或糖化程度。糖化 液中还原性糖以葡萄糖计，占干物质的百分比称为DE值。DE值计算：DE=糖液体积(V)?糖液葡萄糖浓度(C)?100% 投入淀粉 量(W)?淀粉含量(C)还原糖用裴林氏法等法测定，浓度表示：葡萄糖 g/100ml 糖液；干物质用阿贝折光仪测定，浓度表示：干物质 g/100ml 糖液。影响DE值的因素：糖化时间：最初糖化时，糖化速度快，DE值显著上升; 但24h后，当D
13、E值达到90%以上时，糖化速度显著放慢。液化DE值与糖化DE值的关系：液化程度应控制适当，太低或太高均不利。原因是液化 程度低，则粘度大，难操作；同时，由于液化程度低，底物 分子少，水解机会少，影响糖化速度；液化程度低，易发生 老化；但液化超过一定程度，则不利于糖化酶与酶与糊精生 成络合结构，影响催化效率，造成糖化液的最终DE值低。故应在碘试本色的前提下，液化DE值越低，则糖化液的最 高DE值越高。一般液化DE值应控制在1218%。酶制剂用量与糖液DE值的关系： 糖化时间与糖化酶用量关系表： 为加快糖化速度，可以提高酶用量，缩短糖化时间。但 酶用量太高，反而使复合反应严重，最终导致葡萄糖值降低
14、， 在实际生产中，应充分利用糖化罐的容量，尽量延长糖化时 间，减少糖化酶用量。糖化酶参考用量：液化DE值17%，淀粉乳33%, 60C, pH4.5，酶制剂（NoVo-150）用量：0. 75-1ml/kg 绝干淀粉， 或150 u/g绝干淀粉。糖化时间36 ho糖化工艺流程：液化结束后，迅速将料液用酸将pH调至4. 2-4.5,同时 迅速降温至60C，加入糖化酶，60C保温数小时后，当用无 水酒精检验无糊精存在时，将料液pH调至4. 85.0,同时， 将料液加热至80C，保温20min，然后将料液温度降至，开 始过滤。5过滤在发酵罐内将料液冷却至6070C；洗净板框过滤机, 装好滤布；接好板
15、框滤机的管道；泵料过滤；热水洗涤（60 70C）；空气吹干；过滤结束后，洗净过滤机及有关设备。 量取糖液体积；取样分析还原糖浓度。6、组织形式：每班分为四组，每 7-8 个学生。四个罐 分别由四组操作，加酶量可互不相同，或分为两种，每两组 选定一种酶的浓度，以便做出不同加酶量条件下还原糖动力 曲线。四、实验分析项目和方法分析试剂：测定液化反应终点（碘反应）；总糖（裴林法）；还原糖（水杨酸比色法）的测定方法； 原料淀粉含量的测定，原料含水量的测定（烘干称重法）； 糖液透光率（分光光度计法）；糖化终点测定（无水乙醇检 验）；糊化液和糖化液 DE 值；用分光分度计对料液透光度的测定方法。五、数据处理 在详细记录实验数据的基础上完成实验报告。计算转化率：各组配合实验，不同加酶量条件下还原糖浓度动力学曲 线。六、实验结果和讨论 糖化酶用量及糖化时间对糖化效果的影响； 液化和糖化温度及 pH 对实验效果的影响； 活性碳用量及 pH 对脱色效果的影响。篇三：绿叶在光下制造的有机物是淀粉实验报告绿叶在光下制造的有机物是淀粉 实验报告单姓名 班级实验日期 指导老师 一、实验目的：1、检验绿叶在光下制造有机物是不是淀粉。2、探究光 是不是绿叶制造有机物不可缺少的条件。二、小组实验设计（突出创新点）
