长春工业大学毕业论文摘 要蛹虫草，也称北冬虫夏草，具有补虚损、益精气、保肺、益肾、止血化痰、滋补强壮等功效，是我国的名贵中草药材本论文采用沈阳微生物研究所提供的蛹虫草优质菌种，通过斜面培养、液体培养等过程，获得优质的蛹虫草菌丝体，并以菌丝体重量为指标，对培养温度、初始pH值、培养箱转速、最佳碳源、最佳氮源、最佳无机盐等液体培养条件进行单因素分析，通过正交试验法确立了蛹虫草菌丝体的最佳培养基配方实验结果表明，蛹虫草菌丝体培养最佳碳源是葡萄糖，最佳氮源是蛋白胨，最佳无机盐是KH2PO4和MgSO4；最佳培养基配方是葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，KH2PO4 1.0g/L，MgSO4 0.5g/L，VB1 50mg/L；最佳培养温度是24℃，最佳初始pH值是6.0，最佳培养箱转速时150r/min；并在最佳培养条件下绘制了蛹虫草菌丝体生长曲线，其对数期为第5～7.5天，菌丝体平均重为7.07g，稳定期为第7.5～9天，菌丝体重为14.63g，从第9天后，蛹虫草菌丝体开始衰退 关键字：蛹虫草；液体培养；正交试验法AbstractCordyceps militaris , also known as the North Cordyceps, has the effect of completing deficiency, benefiting the essence, lung and kidney, haemostatic and resolving phlegm, nourishing and strong, It is a precious Chinese herbal medicine materials.Cordyceps militaris in this paper has high quality and is provided by the Shenyang Institute of Microbiology. After taking slant culture and liquid culture processes, we get high quality Cordyceps militaris mycelia. It takes mycelium weight as an indicator to make univariate analysis of the incubation temperature, initial pH value incubator speed, the best carbon source, the best nitrogen source and the best inorganic salts liquid culture conditions. With orthogonal test method, it’s established the optimum mycelia medium. The experimental results show that the best carbon source for the mycelia is glucose, the best nitrogen source is peptone, the best inorganic salt is KH2PO4 and MgSO4.A optimum medium includes glucose 20g/L, peptone 10g/L, KH2PO4 1.0g/L, MgSO40.5g/L,VB1 50mg/L.The optimal incubation temperature is 24℃, the optimal initial pH value is 6.0, the best incubator speed is 150r/min. The growth curve of Cordyceps militaris mycelia is drawn on the optimal culture conditions. The logarithmic phase turned up at the 5th to 7.5th day, the mycelium average weighted 7.07g, the stabilization period turned up at the 7.5th to 9th day. The mycelium weighted 14.63g and the recession began from the ninth day.Keywords: Cordyceps militaris; Liquid culture; Orthogonal method.目 录摘 要 IAbstract II第一章 前 言 1第二章 文献综述 22.1 蛹虫草简介 22.1.1 形态特征 22.1.2 生长条件 32.1.3 功能成分 32.1.4 药用价值 52.2 蛹虫草培养基的作用 72.2.1 碳源 72.2.2 氮源 72.2.3 无机盐 72.3 蛹虫草培养条件的影响 72.3.1 初始PH值的影响 72.3.2 培养温度的影响 82.3.3 摇瓶转速的影响 82.4 菌种液体培养及优化 82.4.1 单因素试验法 82.4.2 正交试验设计法 82.4.3 响应面优化设计法 92.4.4 二次正交旋转组合法 102.5 国内外研究现状 102.6 本文研究意义 12第三章 实验部分 133.1 试验材料 133.1.1 菌种 133.1.2 培养基 133.1.3 主要试剂 133.1.4 主要设备 133.2 试验方法 143.2.1 蛹虫草菌丝体的培养 143.2.2 蛹虫草菌丝体培养基的优化 143.2.3 蛹虫草菌丝体培养条件的优化 163.2.4 蛹虫草菌丝体生长曲线的绘制 173.3 结果与分析 173.3.1 蛹虫草菌丝体培养基的单因素分析与正交试验结果 173.3.2 蛹虫草菌丝体培养条件的优化 233.3.3 蛹虫草菌丝体生长曲线 26第四章 结论与展望 284.1 结论 284.2 展望 28致 谢 29参考文献 301 长春工业大学毕业论文第一章 前 言蛹虫草，又称北冬虫夏草，主要产自吉林、云南等地带的针阔叶林的鳞翅目昆虫蛹体上，是一种名贵的药用真菌。
蛹虫草菌含有多种有效成分，包括核苷类化合物（又称虫草素）、虫草多糖、虫草酸、氨基酸、超氧化物歧化酶（SOD）、维生素及微量元素等7大类具有生物活性和药理作用的化合物[1]这些有效成分可以增强人体免疫能力，并具有抗癌、抗病毒等功效[2]目前市场上销售的冬虫夏草人工替代品主要是通过3类方法培育的蛹虫草菌：1.用鲜或干蚕蛹体培植出的蛹与草为一体的“蛹体虫草”； 2.以大米、小麦等为主要原料，在固态人工合成培养基上培植出的“虫草菌子实体”； 3.采用液体深层发酵法培养的蛹虫草菌丝体在药化、药理和临床试验[3]均证明它们的主要有效成分可替代天然的冬虫夏草对蛹虫草菌进行液态发酵培养大量生产菌丝体，比固态培养蛹虫草菌子实体具有周期短、可控性强、功能性有效成分含量高等优点，且利于大规模生产[4~5]液态深层发酵培养蛹虫草菌主要受培养基组成及培养条件的影响，培养基内碳源、氮源和无机盐等物质的成分与含量，培养条件的变化及其各物质间的相互作用对菌丝体生长和产量都有直接影响因此，对蛹虫草菌优化培养不仅解决了野生虫草资源缺少的问题，也开发了其药用价值，对以后的人类生活产生重大意义本实验采用单因素法和正交试验法，对蛹虫草的液体培养基及培养条件进行了优化，目的是获得最大量菌丝体的培养基配方。
第二章 文献综述2.1 蛹虫草简介 蛹虫草为子囊菌亚门，麦角菌目，麦角菌科、虫草属的模式种[6]学名为Cordyceps militaris，又称为北冬虫夏草，野生资源稀少蛹虫草主要分为子座（即草部分）和菌核（即虫的尸体部分）两部分虫体外形较完整，体内充实如僵死的老蚕，表皮呈深黄色至黄棕色，背部有横皱纹，腹部有八对足，以中间四对较明显，头部三对不甚清楚，尾部一对隐约可见菌座细长，呈圆柱形，直立或稍弯曲，上部膨大，表面深棕色至棕褐色，带有不明显的纵皱纹，质地柔韧，端面内心空虚，呈粉白色[7]冬季幼虫居住在土里，部分菌类寄生在幼虫体内，从其中吸取营养，使幼虫体内充满菌丝导致死亡夏季从幼虫的尸体上生出幼苗，形状似草，夏至前后可采集得到中医认为，虫草主要入肾肺二经，既能补肾阳，又能补肺阴，是唯一的一种能同时调节、平衡阴阳的中药2.1.1 形态特征 子座单个或数个从寄主头部或节部生出，颜色以橙黄色为主，一般不分枝，高3～5cm，子座头部呈棒状，表面粗糙，长1～2cm，粗3～5mm；子囊壳下部埋生于子座头部的外层，外露，近圆锥形；子囊线形，细长，大小为(400～300)um×(4～5)um，内含8枚线形孢子，粗约1um，孢子细长，几乎充满子囊，成熟时产生横隔，并断成2～3um的小段；子座柄部近圆柱形，内实心，长2.5～4cm，粗2～4mm[8]。
蛹虫草菌丝体由子座单个或数个一起从寄生的蛹体头部或节部长出，颜色为橘红或橘黄色，全长2～8mm，蛹体的颜色变为紫色，全长约1.5～2mm2.1.1.1 菌丝体蛹虫草的菌丝是一种子囊菌当菌体成熟即形成子囊孢子，孢子随风传播，一旦落在合适的虫体上，便开始侵入形成菌丝体菌丝体一边不断地发育，一边开始缓慢向虫体蔓延，导致蛹虫被真菌感染，菌丝体开始分解蛹体内的组织，吸收蛹体内的营养，为其生长发育提供足够的物质和能量，最后将蛹体完全分解2.1.1.2 子实体通常当蛹虫草菌丝将蛹体内的各组织器官完全分解后，菌丝体开始进入发育新阶段发育菌丝体由营养生长转为生殖生长，最后集结后从蛹体空壳的各部分伸出，形成呈棒状的子实体，一般为橘黄色或橘红色见图2-1. 图2-1 蛹虫草子实体 2.1.2 生长条件 蛹虫草主要生长在高寒区，高山雪线附近，常于海拔4000m以上的高山上出现，尤其多出现在积雪、排水良好的高寒草甸最适分布海拔高度为4200～4600m，下限是3000m，上限是5100m产区的平均气温为0.2～8℃，年降水量556.7～651.3 mm，气候具有明显的干季和雨季。
在我国的分布主产于四川、西藏、青海、云南的高山、亚高山草甸区，近年在辽宁也有发现[6,9~11]蛹虫草的生长需要适宜的营养条件，包括碳源、氮源、无机盐以及维生素，还需要适宜的温度，水分以及光照，酸碱度等在菌丝生长过程和子实体成长过程需要不同条件，以保证生长最好2.1.3 功能成分蛹虫草含有多种生理活性物质，迄今已检测或分离到多种活性物质如虫草素、腺苷、虫草多糖、虫草酸、超氧化物歧化酶(SOD)以及矿物质元素等[12] （1） 虫草素虫草素又称虫草菌素，是Cuninghum等人于1951年从蛹虫草寄生的昆虫组织中分离得到的一种腺苷类活性物质，将其命名为虫草素，并确定其结构式为3′-脱氧腺苷[1。