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1、分类号：密 级：TS201.7公开单位代码：学 号：08523113208523117432大连工业大 学专业硕士学位论文中文题目：进口农副产品转基因筛选与品系检测英文题目：Genetically modified ingredients and maizes detection of imported agricultural products专业领域：食品工程隶属学院：食品学院研究生：杨静指导教师：张公亮 副教授董伟峰 高级工程师2015年 5 月目录学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其
2、他个人或其他机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学生签名： 杨静 关于硕士学位论文使用授权的说明论文题目： 进口农副产品转基因筛选与品系检测 本学位论文作者完全了解大连工业大学有关保留、使用学位论文的规定，大连工业大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后也遵守此规定。是否保密（ 否 ），保密期至 年 月 日
3、为止。学生签名： 杨静 导师签名： 张公亮 2015年 5 月 19 日摘 要 随着转基因作物的迅速发展，转基因产品已经迅速进入到人们的生活中。为了维护自己国家的安全，很多国家都对要求转基因食品中转基因成分能够有效地被检测出来。这进一步对检测机构提出了严格的要求，所以完善检验标准十分迫切。本试验应用两种不同的试剂盒对四种不同加工程度的转基因玉米进行提取，并用实时荧光仪7500和viia 7对玉米品系MON810、Bt11、T25、CBH351、GA21、MON863、NK603、TCl507、59122、MIR604、MIRl62、DP98140、3272、TCl507、BT176、MON88
4、017、Bt176的检出率进行了分析，接着比较实时荧光PCR和基因芯片的检出率。文章最后我们对几种具有代表性的待检样品进行了初筛和品系鉴定，实验结论如下：（1） 对于加工程度比较轻的产品或是未加工产品，采用TAKARA试剂盒提取后，基因芯片法检出了Tc1507、NK603、MON810、MON89034、59122、MON88017 、BT11，MIR604、GA21、T25等外源基因，而实时荧光PCR反应并没有检出GA21、T25，基因芯片法的检出率比较高，宜采用基因芯片进行检测；（2） 精加工玉米产品可采用天根实际盒进行提取后，实时荧光仪7500和VIIA 7进行实时荧光PCR反应，和应用
5、基因芯片法都检出了Tc1507、NK603、MON810、MON89034、59122、MON88017 、BT11、MIR604等外源品系，检出率相同；（3） 对于深加工产品玉米酒槽粕，采用天根实际盒在实时荧光仪7500上进行检测，检出了Tc1507、NK603、MON810、MON89034、59122、MON88017 、BT11、MIR604等外源品系，实时荧光PCR仪viia7和基因芯片法检出了Tc1507、NK603、MON810、MON89034、59122、MON88017等外源品系，实时荧光PCR仪7500的检出率更高； 本实验结合了实时荧光PCR和基因芯片技术对进口农副产品
6、进行了检测分析，两种方法的检测结果准确、检测周期短、特异性强、灵敏度高，能够符合并满足日常检测的需要。可以用于加工食品中转基因玉米成分及品系的定性检测, 也可以作为常规PCR定性方法的确证试验方法。关键词：转基因；实时荧光PCR；基因芯片；定性检测IVAbstract With the rapid development of transgenic crops, genetically modified products has rapidly into peoples lives.In order to safeguard the security of own country, many
7、countries have requirement for genetically modified genetically modified foods can be effectively detected.This further testing organization made stringent requirements, it is very urgent to improve inspection standards. In this study , two different kits for four different levels of transgenic corn
8、 processing to extract ,and analyzed detection sensitivity with quantitative real-time PCR 7500 and viia 7 though strains of maize MON810、Bt11、T25、CBH351、GA21、MON863、NK603、TCl507、59122、MIR604、MIRl62、DP98140、3272、TCl507、BT176、MON88017、Bt176, and then compare the detection rate between real-time PCR a
9、nd gene chip . Finally, several representative samples were screened and strain identification, experimental results are as follows: (1) For the degree of processing relatively light products or unprocessed goods,with TAKARA extraction kit, the chip method detected Tc1507、 NK603、MON810、MON89034、5912
10、2、MON88017、BT11、MIR604、GA21、 T25 substandard genes, and real-time PCR reaction did not detection of GA21、T25, gene chip method detection rate is relatively high, should be detected by gene chip； (2) For the refined corn products ,with tiangen extraction kit, real-time fluorescence analyzer 7500 and
11、real-time fluorescence viia 7 and gene chip are detected Tc1507、NK603、MON810、MON89034、59122、MON88017、 BT11、MIR604 substandard source strains, the detection rate is same;(3) For the corn deep processing corn wine scums ,with tiangen extraction kit ,real-time fluorescence analyzer 7500 detected Tc1507
12、、NK603、MON810、MON89034、59122、 MON88017、BT11、MIR604 substandard source strains, real-time fluorescence analyze viia7 and gene chips detected Tc1507、NK603、MON810、MON89034、59122、MON88017 substandard source line,7500 has a higher detection rate.This experiment was used a combination of real-time PCR and
13、 gene chip technology to analyze the import of agricultural products were tested, the two methods has accurately detect short cycle, specificity, high sensitivity, and can meet the needs of daily testing. This method can be used for the qualitative detection of transgenic corn processed food ingredi
14、ents and strains but can also be used as a confirmatory test methods qualitative conventional PCR methods.Keywords:GMO；real-time PCR; gene chip; qualitative detection目 录目 录第一章 绪 论11.1研究背景11.1.1转基因发展概况11.1.2玉米、马铃薯转基因品系鉴定现状1 1.1.2.1转基因玉米品系鉴定现状1 1.1.2.2转基因马铃薯品系鉴定现状21.2 转基因植物提取方法概述21.2.1十六烷基三乙基澳化馁(CTAB)
15、法21.2.2十二烷基磺酸钠(SDS)法31.2.3离心柱吸附提取DNA31.2.4磁珠法提取DNA31.2.5全自动核酸提取工作站41.3聚合酶链式反应(PCR)技术41.3.1定性PCR技术优势41.3.2 PCR方法分类5 1.3.2.1 普通PCR5 1.3.2.2 多重PCR5 1.3.2.3 实时荧光定量PCR技术5 1.3.2.3.1实时荧光定量PCR技术原理5 1.3.2.3.2实时荧光定量PCR技术应用6 1.3.2.4巢式PCR6 1.3.2.5 其他PCR方法71.4生物芯片技术71.4.1基因芯片技术81.4.1.1 基因芯片技术原理81.4.1.2基因芯片技术分类91.4.1.3基因芯片技术的发展现状91.4.1.4基因芯片技术的应用91.4.1.4.1在食品微生物检测中的应用91
