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1、黄芪和苦参不同剂量比组方对小鼠溃疡性结肠炎治疗作用研究 熊永爱 韩 丽*（成都中医药大学药学院中药材标准化教育部重点实验室 四川成都611137）摘要: 目的 观察黄芪和苦参不同计量比对实验性小鼠溃疡性结肠炎的治疗作用。方法 采用三硝基苯磺酸灌肠法制作溃疡性结肠炎，两种药材采用11个剂量比，按组方比例称取药材，醇水双提制备水煎液给药，治疗结束时测定MPO活性；处死动物取结肠，评价黏膜损伤指数。结果 1)光镜下观察各给药组结肠黏膜病理损害程度明显轻于模型组，黄芪苦参低剂量比处方组也可见溃疡，有较明显的组织水肿和大量炎细胞浸润。黄芪苦参高剂量比组及柳氮磺胺吡啶组溃疡较少并可见已愈合的溃疡组织，组织
2、水肿和充血明显减轻，炎细胞浸润明显减少（P0.05）。2)模型组小鼠结肠MPO明显升高，给药组小鼠MPO则明显低于模型组(P0.01)。结论 黄芪和苦参高剂量比（30g:9g）组方能显著对抗三硝基苯磺酸导致的小鼠结肠组织病理损伤，能增强整体炎性免疫反应，明显改善动物便血、腹泻、少动等外观体征，疗效明显。关键字： 黄芪 苦参 溃疡性结肠炎 溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis，UC)又称非特异性溃疡性结肠炎，是炎症性肠病(Inflammato boweldisease，IBD)的一种1。IBD已成为公认的慢性腹泻的主要病因之一，并被认为是胃肠道中除恶变外最严重的疾病之一。西医对本病
3、治疗的药物主要为氨基水杨酸类、肾上腺皮质激素类、免疫调节剂等2，取得了一定的治疗效果，但因这些药物的毒副作用较大，不能长期使用，常导致病情反复。本研究拟以黄芪、苦参配伍，黄芪益气健脾升阳，治脾虚中气下陷、久泻久痢，苦参清热燥湿，治热痢，便血。通过对溃疡性结肠炎模型的药效学比较，确定黄芪、苦参最佳组方配比，达标本兼治之效。1材料1.1 动物：昆明种小鼠，清洁级，雌雄各半，体重18-22g，由成都达硕生物科技有限公司提供，合格证号:scxkc(111)2008-24。1.2 药材：黄芪、苦参，购于四川利民中药饮片有限责任公司，经成都中医药大学药学院中药标本中心卢先明老师鉴定，所购药材均符合中华人民
4、共和国药典标准，按组方比例称取药材，醇水双提制备水煎液。小鼠剂量按成人用量的20倍给药。黄芪和苦参各组剂量比例（参照中国药典单味药材日用量随机配对）、小鼠灌胃体积见表-1。柳氮磺胺吡啶片，上海三维制药有限公司，生产批号：200804C04，小鼠按成人用量20倍给药，即1g/kg，药物用蒸馏水配成0.05g/mL，小鼠灌胃给药体积为0.2mL/10g。 黄芪和苦参不同配比剂量及给药体积 组别黄芪（g）苦参(g)给药体积(ml)给药浓度（g/ml*20g）配比组194.50.40.23配比组2970.40.27配比组3990.40.30配比组4204.50.4 0.41配比组52070.40.45
5、配比组62090.4 0.48配比组7304.50.4 0.58配比组83070.4 0.62配比组93090.40.65配比组103000.40.50配比组11090.40.15 表-11.3 试剂：三硝基苯磺酸(TNBS)：sigma公司生产，批号: 107K5008。无水乙醇，乙醚、甲醛均为分析纯；髓过氧化物酶（MPO）试剂盒，南京建成生物工程研究所提供，批号：20090918。2 方法与结果2.1 模型复制方法 取小鼠，造模前禁食24h，乙醚麻醉，用小鼠灌胃针头轻轻从肛门插人，深度为4cm，推人TNBS溶液(5%TNBS溶液和无水乙醇按1:1混合)80mgL/kg，捏紧肛门倒提30s，
6、术后常规饲养3。2.2 给药方法 造模后第3天，将模型动物分为模型组，11个处方组，阳性药柳氮磺胺吡啶组，另设正常对照组，并同时开始按上述剂量给药，模型组及正常对照组给等体积蒸馏水，每天1次，连续7d。2.3 检测指标2.3.1 髓过氧化物酶活性 按试剂盒说明书处理样本，并测定各组样本MPO活性用紫外检测器(UV1700型，Tecan公司生产)在460nm处测吸光值。2.3.2 光镜检查剪取结肠病变最明显处2cm放于10%中性缓冲甲醛溶液中固定，酒精脱水，石蜡包埋，切片厚度4-6微米，HE染色，光学显微镜检查。病变按以下标准进行分级：溃疡：分三级，0无，1小溃疡（小于3mm），2大溃疡（大于3
7、mm）炎症：0无，1轻度，2重度肉芽组织：0无，1有病变深度：0无，1粘膜下层，2肌层，3浆膜层纤维化：0无，1轻度，2重度2.3.4 统计方法 计量资料采用t检验。2.4 实验结果2.4.1黄芪和苦参高剂量比组方能显著对抗三硝基苯磺酸导致的小鼠结肠组织病理损伤，能增强整体炎性免疫反应，明显改善动物便血、腹泻、少动等外观体征，疗效明显。结肠MPO活性测试结果表明模型组小鼠结肠MPO明显升高，给药组小鼠MPO则明显低于模型组，见表-2。 MPO活性测试结果 组 别 MPO(U/g)配比组1配比组2配比组3配比组4配比组5配比组6配比组7配比组8配比组9配比组10配比组11空白组模型组阳性组0.4
8、450+0.1657*0.6210+0.1942*0.4771+0.1194*0.6662+0.5289*0.3950+0.1414*0.3700+0.1164*0.5943+0.2011*0.5317+0.2477*0.4043+0.2564*0.3437+0.1324*0.5000+0.3961*0.2270+0.0776*1.0170+0.36060.5143+0.2890* 表-22.4.2 光镜观察模型组镜下可见溃疡，病变主要在粘膜下层，组织水肿明显及大量炎性细胞浸润，以淋巴滤泡增生为主，图见B和C。黄芪苦参低配比组处方组也可见溃疡，有较明显的组织水肿和大量炎细胞浸润，图见D、E和F
9、。黄芪苦参高配比组组及柳氮磺胺吡啶组溃疡较少并可见已愈合的溃疡组织，组织水肿和充血明显减轻，炎细胞浸润明显减少，图见G和H。镜检评分结果比较见表-3。 A-正常 B-溃疡 C-纤维化 D-淋巴滤泡增生 E-糜烂 F-表浅溃疡 G-正常 H-正常结肠病理切片100镜检评分结果比较 组 别 平均偏差配比组1配比组2配比组3配比组4配比组5配比组6配比组7配比组8配比组9配比组10配比组11空白组模型组阳性组0.37778+0.21543-0.06667+0.215430.17143+0.231070.02857+0.231070.10000+0.242130.30000+0.209690.4333
10、3+0.242130.60000+0.24213*0.60000+0.24213*0.17143+0.231070.10000+0.277390.47500+0.22241*0.6000+0.516400.60000+0.52130* 表-33.讨论溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis，UC）是一种原因不明的结肠粘膜和粘膜下疾病。目前认为UC是多种原因引起的，如遗传、环境、免疫、促炎和抗炎因子失衡等等。2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）是一种半抗原物质，在乙醇灼伤结肠粘膜后与组织蛋白的赖氨酸氨基团结合，成为抗原，使T淋巴细胞致敏，与半抗原结合的动物自身细胞被破坏，从而导致肠道炎
11、症发生。TNBS代谢产生的O2、H2O2等活性氧及过氧化物的毒性损伤肠壁组织和上皮细胞4。该模型动物易存活，制作简单，是现在最常用的UC动物模型之一。临床上U C的药物治疗目前主要有柳氮磺吡啶、皮质类固醇、免疫抑制剂的等药物。其中柳氮磺吡啶是轻、中度UC治疗和维持缓解的主要药物。但其不良反应较大；而5-ASA的特殊制剂如：美沙拉嗪、奥沙拉嗪等其不良反应明显低于柳氮磺胺吡啶，但价格昂贵，使患者难以接受，因此寻找新的价格合适的治疗药物己是当今溃疡性结肠炎研究领域的一大热点。 黄芪益气健脾升阳，治脾虚中气下陷、久泻久痢，黄芪多糖和黄芪皂苷是黄芪中的主要提取物，能增强机体免疫，是黄芪发挥药理作用的物质
12、基础；苦参清热燥湿，治热痢，便血，苦参生物碱能对抗炎症反应，是苦参发挥药理作用的物质基础。本实验通过对MPO活性单位测定和对结肠病理组织学镜检结果分析，黄芪:苦参=30:9时疗效最明显，可初步作为黄芪和苦参配方治疗溃疡性结肠炎最佳剂量比参考值。参考文献 1 陈 奇.中药药效研究思路与方法M.人民卫生出版社，2005：4362 江学良.溃疡性结肠炎M.人民卫生出版社，2005：23 袁学勤，王旭丹，等.三硝基苯磺酸诱导Balb/c小鼠结肠炎的实验研究J.中国药理学通报.2005 21(6)：75694 段 真，汪维伟.溃疡性结肠炎大鼠模型研究现况.重庆医学，2007，36（7）：662基金资助：国家重大科技专项经费资助（重大新药创制专项）（No：2009ZX09103-307）作者简介：熊永爱（1985），男（土家族），湖北恩施人，现为成都中医药大学药学院在读硕士研究生，学士学位，主要从事药理和中药新制剂研究。通讯作者：韩丽（1965），女，博士，副教授，从事中药新制剂、新技术研究。E-mail：；电话：13982185413
